Вскрытие лабораторных животных

После окончания опыта оставшихся в живых лабораторных животных умерщ­вляют. Мышей, крыс, хомяков и кроликов помещают под стеклянный колпак, в который кладут ватный тампон, смоченный эфиром или хлороформом, – жи­вотное умирает. Собаке внутривенно вводят хлоралгидрат в дозе не менее 0,5 г на 1 кг массы. Можно также инъецировать 20–40 мл насыщенного раствора сульфата магния. Курам отрезают голову или оглушают ударом по голове и пере­резают шейные сосуды. Убить животное можно избыточной дозой наркоза, а также (мелких животных) путем разрыва спинного мозга. Для этого тело животного, удерживая правой рукой за затылок, а левой за хвост, быстрым коротким движением растягивают до ощущения обрыва нити. Менее гуманный метод умерщвления – декапитация (отрезание головы).

Для изучения патологоанатомических изменений и получения вируссодержащего материала, экспериментально зараженных животных вскрывают. Делают это сразу же после гибели их, что предотвращает обсеменение органов и тканей микрофлорой, находящейся при жизни животного на поверхности слизистых оболочек, особенно в кишечнике. Если зараженное животное не погибло, его убивают в момент максимального проявления симптомов болезни или при их отсутствии на 8–10-й день после заражения.

Для удобства вскрытия труп животного фиксируют. Более крупных животных укрепляют на специальных вскрывочных столиках или на доске с приспособлением для фиксации конечностей и головы. Мелких животных целесообразно фиксировать в кювете с залитым воском (парафином) и покрытым бумажной салфеткой дном. Для фиксации используют инъекционные иглы или одностержневые булавки (портновские). Вскрытие выполняют стерильными инструментами.

Брюшную и грудную полости вскрывают при фиксации животного в спинном положении с направленными в стороны и укрепленными передними и задними конечностями (рис. 13).

Шерсть животного по линии разреза обрабатывают дезинфицирующим раствором. Мелких животных перед вскрытием можно опускать полностью в дезинфицирующий раствор, держа за хвост.

Рисунок 13 - Порядок вскрытия грудной и брюшной полостей (по Вагнеру)

Разрез кожи делают по белой линии от лонной кости (симфиза) до шеи. Чтобы при этом не прорезать брюшную стенку, пинцетом, находящимся в левой руке, приподнимают кожу и делают сначала поперечный надрез складки кожи, удерживаемой пинцетом у симфиза, а затем, вставив одну браншу ножниц в образовавшееся отверстие, разрезают кожу до шеи животного, после чего кожу разрезают по направлению к каждой из четырех конечностей. Тупым путем кожу отпрепаровывают, открывая ее лоскуты вправо и влево наподобие дверок шкафа. Лоскуты кожи фиксируют булавками за верхние и нижние углы.

Заменив инструменты, вскрывают брюшную полость. Для этого разрез брюшной стенки делают под линией диафрагмы и по белой линии до лонной кости. Треугольники брюшной стенки отводят в стороны и фиксируют.

В качестве вируссодержащего материала из брюшной полости берут кусочки (или целый орган у мелких животных) печени, селезенки, почки, брыжеечные лимфатические узлы, участок кишечника при наличии патологоанатомических изменений или симптомов болезни, наблюдавшихся перед смертью.

Грудную полость вскрывают с учетом того, что она имеет твердые стенки. Для получения доступа к находящимся в ней органам с нее надо как бы снять «крышку». Для этого разрезают ребра поперек сзади вперед, удаляя их вместе с грудной костью.

Череп вскрывают, укрепив животное в брюшном положении путем фиксации передних конечностей и головы (рис. 14). Кожу головы и шеи обрабатывают дезинфицирующим раствором.

Рисунок 14 - Порядок вскрытия черепной полости

Разрез кожи делают перпендикулярно оси тела за ушами, продолжают слева и справа вперед к глазницам. Кожу вместе с ушами отпрепаровывают и отбрасывают вперед, оголяя черепную коробку. Одну браншу ножниц вставляют в большое черепное отверстие и режут кости черепа влево и вправо по направлению к глазницам. Затем разрезают кости черепа между глазницами и удаляют весь вырезанный участок. Если кости черепа толстые, их распиливают по тем же направлениям. Можно разрезы черепа вести от глазниц назад.

Мозг животных, имеющий мажущуюся мягкую консистенцию, извлекают из основания черепа, подняв его слегка раздвинутыми браншами ножниц и подрезав черепно-мозговые нервы.

Основное требование к вируссодержащему материалу–максимальное содержание в нем вируса, что определяется тропизмом вируса, т.е. способностью его размножаться в определенном типе клеток, а следовательно, и в соответствующих органах животного. Поэтому, вскрывая животное, обращают внимание на то, какие органы имеют патологоанатомические изменения, т.е. предположительно содержат вирус. Измененные органы берут в качестве вируссодержащего материала. Одновременно с той же целью берут регионарные пораженному органу лимфатические узлы.

При заражении животных пневмотропными вирусами в качестве вируссодержащего материала берут легкие, средостенные лимфатические узлы, трахею. Висцеротропные вирусы содержатся в паренхиматозных органах брюшной полости (в печени, селезенке), брыжеечных лимфатических узлах и стенке кишечника. Для исследований нейротропных вирусов берут головной, а если надо, то и спинной мозг.

Каждую пробу материала, разделив на две части, помещают отдельно в две стерильные пробирки, закрытые резиновыми пробками. Ткань одной пробирки предназначается для вирусологических исследований, поэтому ее сразу же заливают соответствующим фиксатором. В тех случаях, когда в комплексе диагностических исследований на определенную инфекцию предполагаются микроскопические методы обнаружения вируса (световая, люминесцентная микроскопия), из вируссодержащих органов делают мазки или отпечатки. Учитывая, что специфические для вируса изменения могут быть локализованы в различных отделах органа (например, в мозге при бешенстве), отпечатки готовят следующим образом: мозг мелкого животного из вскрытой черепной полости, не повреждая структуры, переносят на лист (10x10 см) фильтровальной бумаги, где он достаточно прочно фиксируется. Браншами глазных ножниц отрезают по вертикальной плоскости небольшой кусочек его и кладут на бумагу рядом. Затем отрезают следующий слой мозга и также кладут рядом и т. д. Взяв в левую руку лист бумаги с фиксированными на нем кусочками мозга, правой рукой прикладывают сверху к каждому поочередно предметное обезжиренное стекло, получая отпечатки.

Демонстрация

а) клинических признаков заболевания у зараженных лабораторных животных; б) методов умерщвления лабораторных животных; в) техники вскрытия (обращают внимание студентов на состояние внутренних органов) и приемов получения вируссодержащего материала; г) техники изготовления отпечатков мозга; д) действий по обеззараживанию рабочего места и трупа после вскрытия зараженного животного.

Задания

1.Установление у зараженных животных симптомов болезни.

2.Вскрытие зараженных животных с целью обнаружения патологоанатомических изменений и получения вируссодержащего материала.

3. Получение отпечатков головного мозга.

Самостоятельная работа студентов

а) распознавание по цветной метке зараженных каждым из студентов мышей, анализ их клинического состояния, умерщвление, фиксация в кювете с восковым (парафиновым) дном, вскрытие; б) анализ патологоанатомических изменений, получение вируссодержащего материала (паренхиматозных органов), приготовление послойных отпечатков мозга.

Студенты отрабатывают приемы вскрытия трупов лабораторных животных и получения отпечатков головного мозга.

Подведение итогов занятия

Задание к следующему занятию

Контрольные вопросы

1. Признаки размножения вируса в организме лабораторного животного.

2. Методы взятия материала от лабораторных животных.

3. Порядок вскрытия лабораторных животных по Вагнеру.

4. Порядок получения отпечатков головного мозга.