Цели использования лабораторных животных

В настоящее время лабораторных животных используют в вирусологии для:

– обнаружения вируса в патматериале;

– первичного выделения вируса из патматериала;

– накопления вирусной массы;

– поддержания вируса в лаборатории в активном состоянии;

– титрования вируса;

– получения гипериммунных сывороток;

– в качестве тест-объекта в реакции нейтрализации.

В вирусологии используют кроликов, морских свинок, белых крыс, белых мышей, золотистых хомячков. Однако только некоторые вирусы удается культивировать на животных перечисленных видов. Во многих случаях для тех же целей используют других чувствительных к данному вирусу животных: кур, голубей, котят, щенков и т. д. Так, биопробу при диагностике оспы птиц ставят на курах, оспы овец – на овцах, чумы свиней – на подсвинках.

ТРЕБОВАНИЯ К ЛАБОРАТОРНЫМ ЖИВОТНЫМ

Комплектуя группы животных для вирусологических исследований, необходимо выполнять следующие требования:

– животное должно быть чувствительным к данному вирусу;

– возраст его имеет большое значение для культивирования многих вирусов. Большинство вирусов лучше размножается в организме молодых и даже новорожденных животных. Например, для биопробы на бешенство и ящур используют мышей-сосунов, на ларинготрахеит птиц – цыплят. Но в то же время заражение взрослых кроликов вирусом болезни Ауески ведет к появлению ярких и специфичных клинических признаков заболевания;

– стандартная чувствительность достигается подбором животных определенного возраста и одинаковых по массе;

– лабораторные животные должны быть здоровы. Животные, поступающие в виварий вирусологической лаборатории, должны быть привезены из благополучного по инфекционным заболеваниям хозяйства. Их содержат изолированно, т. е. в карантине (белых мышей и крыс 14 дней, а остальных животных 21 день). В этот период за животными ведут ежедневное клиническое наблюдение. При подозрении на наличие инфекционной болезни животных подвергают лабораторному исследованию. В случае установления инфекционного заболевания среди животных всю поступившую партию уничтожают.

СОДЕРЖАНИЕ ЛАБОРАТОРНЫХ ЖИВОТНЫХ

Виварий для лабораторных животных должен иметь основное помещение для животных, моечную (с боксом, сушиль­ными и стерилизационными установками), кухню для приготовления корма с одним по крайней мере столом, оборудованным для приготовления корма, и холодильником для скоропортящихся продуктов, кладовую, операционную, гар­дероб и санитарное помещение для обслуживающего персонала. Помещения должны быть чистыми, стены и полы легко дезинфицируемыми. Запасы корма следует хранить в специальных помещениях. В местах содержания опытных животных желательно иметь гигрометр и термометр.

Мышей, крыс, хомяков и морских свинок в период опыта рекомендуется содержать в стеклянных банках с крышкой из проволочной сетки или перфори­рованного листового железа. Это облегчает наблюдение за ними, а банки легко чистить и дезинфицировать. Можно содержать животных в металлических клет­ках, которые также легко дезинфицировать.

В качестве подстилки применяют материалы, которые адсорбируют влагу и могут быть использованы животными для постройки гнезда: стружку для мы­шей, крыс, хомяков, морских свинок, хорьков, кур; опилки для крупных мы­шей, крыс, хомяков, хорьков, кур; солому для хомяков, морских свинок, кроли­ков, собак, кур; мякину для мышей, крыс; сено для мышей, крыс, хомяков, хорьков, кур; песок для кур. Следует использовать такую подстилку, которая образует как можно меньше пыли, так как последняя может привести к заболева­нию органов дыхания. Любую подстилку необходимо предварительно стерили­зовать при 100 °С в течение 30 мин.

Помещения для лабораторных животных периодически дезинфицируют, осо­бенно перед размещением новой партии животных. Это относится и к предме­там ухода за животными (лопаты, скребки, метелки и др.), которые соприкаса­ются с навозом и различными отбросами из помещения. После окончания каж­дого опыта клетки обязательно обрабатывают дезинфицирующими растворами, чему должна предшествовать чистка как клеток, так и помещения.

Посуду для корма и воды ежедневно смачивают дезинфицирующим раствором, после чего моют и споласкивают чистой водой. Помещения обрабатывают 1% раствором едкого натра, который используют в течение суток. Дезковрики пропитывают свежим раствором каждые 2 дня. Для дезинфекции предме­тов ухода, мытья полов и посуды рекомендуется использовать 3% раствор хлорамина, который должен быть применен в течение 2 ч. В виварии необходи­мо уничтожать вредителей: мух, комаров, блох, власоедов, клещей, вшей, му­равьев, мышей, крыс.

Лабораторных животных размещают так, чтобы, с одной стороны, было обеспечено функционирование всех систем организма в пределах физиологической нормы, с другой – исключено взаимное перезаражение и распространение инфекции за пределы вивария. Животных содержат в виварии с учетом их физиологической потребности в освещенности и температуре. Так, мышам, крысам нужны полумрак и температура воздуха около 20 °С, морским свинкам, кроликам и курам – дневной свет и температура в пределах 16–23, 14–18 и не ниже 0°С соответственно. Плотность посадки должна составлять примерно 1 г массы лабораторных животных на 1 см² дна клетки. Животных обеспечивают регулярным и полноценным кормлением и постоянно питьевой водой.

Если виварий один, зараженных животных содержат изолированно от здоровых и с последних начинают уборку помещения и кормление. Для ухода за зараженными животными используют отдельный инвентарь и кормушки. Лучше иметь два вивария: для содержания здоровых и зараженных животных.

Обслуживающий персонал при работе в виварии пользуется спецодеждой: халатом, резиновыми перчатками, фартуком, непромокаемой обувью. В виварии ежедневно дезинфицируют инвентарь и проводят влажную уборку с применением дезинфицирующих веществ. По окончании эксперимента клетки дезинфицируют, погибших животных обезвреживают сжиганием в печах или автоклавированием.

В группу для проведения опыта подбирают животных с одинаковыми показа­телями массы, температуры, состава крови и т. д. От этого в значительной степени зависит успех выделения, титрования и пассирования вируса. При этом учитывают восприимчивость животных к различным вирусам. Отобранных животных метят, распределяют по банкам или клеткам, отмечают дату постановки опыта, его номер, заражающую или профилактическую дозу препарата и, если необходимо, как мечены животные. Последнее важно, когда в одной банке или клетке находятся животные нескольких групп.

Таблица 1 - Масса животных в разном возрасте

Возраст	Масса, г
Морские свинки	Кролики	Мыши
Дней
		37-55,7*	1,5
		-	3,0
		-	4,5
		-
		-
	221-240-250	-
Месяцев
	350-400	167-307	10-11
	-	419-526	16-18
	450-500	612-897	18-19
	650-700	909-1069	20-22
	700-750	1221-1237	-
	-	1931-2017	-

* Масса кроликов зависит от величины помета: первые цифры при помете из 8 кроликов, вторые – при помете из 3 кроликов

Выписывая из питомника беременных животных, особенно мышей, следует учитывать, что самки первое потомство нередко уничтожают. Поэтому лучше брать животных, беременных 2–3-й раз. Беременных белых мышей и крыс сле­дует брать в виварий не позже чем за 2–3 дня до родов, а кроликов и морских свинок – за 15 – 20 дней. Перемещение животных в более поздние сроки бере­менности приводит к аборту.

Для предупреждения каннибализма и аборта беременных мышей размешают по 2 – 3 в банку, а белых и хлопковых крыс, морских свинок и кроликов – по одной. Клетки для морских свинок должны быть размером 0,3 х 0,5 м. а для кроликов – 0,75 х 1,0 м. Маток, проявляющих каннибализм, надо немедленно удалять из гнезда. На каждую матку (белую мышь, белую крысу) должно приходиться не более 10–12 новорожденных Большая нагрузка способствует канни­бализму. При проведении с молодыми животными длительных опытов (особен­но зимой) в пищу мышей необходимо добавлять витаминизированный рыбий жир, а в рацион хлопковых и белых крыс – молоко и мясо.

Таблица 2 - Температура тела, пульс и число дыханий у здоровых животных

Вид животных	Температура, °С	Пульс в 1 мин	Дыхание в 1 мин
Морская свинка	37,9-39,4
Кролик	38,5-39,7
Крыса белая	37,5-39,3	-
Мышь белая	37,0-39,0		-
Собака	37,5-39,0
Кошка	38,0-39,5
Курица	40,0-42,0
Голубь	41,0-43,0	140-200	16-28
Овца	38,0-41,0		12-20
Свинья	38,0-40,0		10-20
Корова	37,5-39,5	40-80	10-30
Лошадь	37,5-38,5	24-44	8-16

Таблица 3 - Состав крови некоторых лабораторных животных

(по В.Н.Никитину)

Вид животных	Гемо­глобин г%	Число эритроци­тов, млн /мл	Число лей­коци­тов	Лейкоцитарная формула
Базофилы	Эози- нофи- лы	Мие- лоци- ты	Юные	Пало- чко- ядер- ные	Сег-мен-то-ядер-ные	Лим­фоци­ты	Мо­ноци­ты
Собака		6,5		1,0		-	-	3,0	58,0	25,0	7,0
Овца		9,4	8,2	0,6	4,5	-	-	1,2	33,0	57,7	3,0
Кошка		7,0		-	4,0	-	-	6,0	52,0	37,7	2,1
Кролик		5,0		5,0	1,0	-	-	-	30,0	60,0	4,0
Морская свинка		5,0	12,0	0,1	6,0	-	-	0,5	35,0	53,4	5,0
Крыса белая		6,0	15,0	-	2,0	-	-	-	30,0	67,0	1,0
Мышь белая		9,0	13,0	0,5	-	-	-	2,0	36,0	60,0	0,5
Курица		3,5	36,0	3,0	4,0	-	-	0,25	36,0	50,0	6,75
Голубь		4,0	10,4-31,4	2,0	1,5	-	-	-	-	55,5	34,9
Лягушка		0,38	2,4-39,1	23,0	6,0	-		-		44,5	38,3-39,1

Проявлению каннибализма в значительной мере способствуют посторонние запахи, приобретаемые новорожденными в ходе манипулирования с ними экс­периментатора Новорожденных животных следует брать только прокипячен­ным пинцетом Экспериментатор должен работать в перчатках, с которых смы­ты следы антисептика (йода, фенола и др.) Заражать новорожденных животных лучше на весу или на толстом слое стерильной фильтровальной бумаги.

В группу для проведения опыта подбирают животных с одинаковыми показа­телями массы, температуры, состава крови и т. д. (табл. 1-3). От этого в значительной степени зависит успех выделения, титрования и пассирования вируса. При этом учитывают восприимчивость животных к различным вирусам Отобранных животных метят, распределяют по банкам или клеткам, отмечают дату постановки опыта, его номер, заражающую или профилактическую дозу препарата и, если необходимо, как мечены животные Последнее важно, когда в одной банке или клетке находятся животные нескольких групп.