Определение токсигенности микробов
В патологии человека большую роль играют токсигенные микроорганизмы, к которым относятся возбудители ботулизма, столбняка, газовой анаэробной инфекции, дифтерии, а также некоторые штаммы бактерий дизентерии Григорьева -Шига, стафилококка и стрептококка и некоторые другие.
Экзотоксины, вырабатываемые различными представителями этой группы микробов, обладают резко выраженной токсичностью, высокой избирательностью действия с поражением отдельных органов и тканей и способностью при парентеральном введении в организм вызывать образование антител—антитоксинов, способных нейтрализовать соответствующие им экзотоксины.
Продуцируемые в процессе жизнедеятельности микроба экзотоксины легко диффундируют из клетки в окружающую их питательную среду. Бульонную культуру микроба выдерживают в термостате в течение 2—3 недели для накопления в ней токсина, затем фильтруют через бактериальный фильтр. Получаемый при этом прозрачный фильтрат содержит неразведенный токсин.
Токсигенность микробов определяют по тому же принципу, что и вирулентность. Единицами измерения токсигенности, как и вирулентности, являются минимальная смертельная доза (Dlm) и средняя смертельная доза (LD50).
Для определения Dlm и LD50 фильтрат бульонной культуры разводят стерильным изотоническим раствором хлорида натрия в сотни, тысячи и миллионы раз. Каждую дозу токсина испытывают одновременно на 6—10 животных. Для постановки проб подбирают животных, наиболее чувствительных к исследуемому токсину. Например, дифтерийный токсин титруют на морских свинках, столбнячный токсин—на мышах.
При учете полученных результатов в протоколе опыта отмечают дозу введенного токсина, способ его введения, массу тела животного и время наступления его гибели после введения токсина.
Литература
1. Аристовский В.М. др. Учебник медицинской микробиологии. —М., Медгиз, 1949.
2. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования. Под ред. Биргера М.О., —М., «Медицина», 1982.
3. Лабинская А.С. Микробиология с техникой микробиологических исследований. —М., «Медицина», 1978.
4. Методы общей бактериологии в 3-х т. —М., «Мир», 1983.
5. Розанов Н.И. Микробиологическая диагностика заболеваний сельскохозяйственных животных. —М., ГИСХИ. 1952.
6. Сидоров М.А., Скородумов Д.И., Федоров В.Б. Определитель зоопатогенных микроорганизмов. —М., «Колос», 1995.
7. Тимаков В.Д., Гольдфарб Д.М. Основы экспериментальной медицинской бактериологии. —М., Медгиз, 1958.
Оглавление
Введение............................................................................................................................... 3
Бактериологическая лаборатория................................................................................ 3
Помещение бактериологической лаборатории и оборудование рабочего места 4
Правила работы и поведения в лаборатории....................................................... 7
Уборка лабораторного помещения..................................................................... 8
Мытье и обработка лабораторной посуды............................................................... 9
Дезинфекция...................................................................................................................... 14
Стерилизация.................................................................................................................... 15
Подготовка и стерилизация лабораторного оборудования........................... 15
Виды стерилизации.................................................................................................... 17
Микроскопические методы исследования............................................................... 23
Приготовление препаратов для микроскопирования живых микроорганизмов. 23
Приготовление мазков............................................................................................... 29
Окраска мазков............................................................................................................ 31
Простые методы окраски мазков....................................................................... 35
Окраска по Муромцеву.................................................................................... 35
Сложные (дифференциальные) методы окраски мазков............................. 36
Окраска по Граму.............................................................................................. 36
Видоизменения метода окраски по Граму...................................................... 39
Окраска по Граму в модификации Хукера................................................. 39
Окраска по Граму в модификации Берка.................................................... 41
Модификация по Синеву.................................................................................. 42
Модификация по Эткинсу................................................................................ 44
Окраска кислотоустойчивых микробов........................................................... 45
Окраска по Циль-Нильсену............................................................................. 45
Метод Труанта окрашивания на кислотоустойчивость......................... 46
Метод Гонзеля.................................................................................................... 47
Метод Бунге и Траутенрота........................................................................... 48
Окраска по Вейксельбауму (на спиртоустойчивость)............................ 48
Окраска по Грам-Муху (на грамофильную зернистость)...................... 49
Способ Нейссера................................................................................................ 49
Метод Пью (окраска метахроматических зерен)...................................... 50
Окраска по Романовскому-Гимза.................................................................. 51
Окраска капсул....................................................................................................... 52
Метод окраски капсул по Дюгиду................................................................ 52
Метод окраски капсул по Гиссу.................................................................... 52
Метод окраски капсул по Антони................................................................. 53
Способ Михина.................................................................................................. 53
Способ Гисса....................................................................................................... 53
Способ Ольта...................................................................................................... 53
Способ Ребигера................................................................................................. 54
Способ Гусельниковой (1949)........................................................................ 54
Способ Кауфмана.............................................................................................. 55
Способ Ионе........................................................................................................ 55
Окраска спор............................................................................................................ 55
Метод окрашивания эндоспор по Дорнеру................................................ 56
Метод окраски эндоспор по Шефферу -Фултону..................................... 57
Метод Виртца в модификации Саватеева.................................................. 58
Способ Пешкова (1924).................................................................................... 59
Способ Мюллера:.............................................................................................. 59
Способ Ауески.................................................................................................... 60
Способ Клейна:.................................................................................................. 60
Окраска жгутиков................................................................................................... 61
Метод окраски жгутиков по Грэю................................................................. 62
Метод окраски жгутиков по Ляйфсону........................................................ 63
Окраска жгутиков серебрением – модификация по Морозову............. 64
Способ Уварова.................................................................................................. 66
Способ Леффлера............................................................................................... 67
Способ Инуйе...................................................................................................... 67
Способ Бениньетти и Джино........................................................................... 68
Цитоплазматические включения........................................................................ 68
Окрашивание поли-b-оксимасляной кислоты............................................ 68
Окрашивание полифосфата............................................................................ 69
Окрашивание полисахаридов с использованием реактива Шиффа.... 69
Метод окраски полисахаридов алциановым синим................................ 70
Питательные среды......................................................................................................... 71
Техника посева микроорганизмов.............................................................................. 81
Техника посевов на плотные и жидкие питательные среды.................. 83
Получение чистых культур...................................................................................... 85
Посев штрихом.................................................................................................... 87
Получение чистой культуры методом рассева в глубине среды (по Коху) 88
Выделение чистой культуры по способу Дригальского......................... 88
Анаэростат для культивирования анаэробов............................................ 89
Методы, позволяющие изучить культуральные свойства микроорганизмов 89
Рост микробов на плотной питательной среде................................................... 89
Особенности микробного роста на жидких питательных средах................ 92
Рост на полужидкой питательной среде.............................................................. 93
Методы изучения биохимических свойств микроорганизмов............................ 94
Сахаролитические свойства микроорганизмов........................................ 94
Протеолитические свойства микроорганизмов......................................... 95
Определение индола в культуре микроорганизмов................................. 97
Определение сероводорода............................................................................ 98
Окислительно-восстановительные свойства микроорганизмов............... 98
Определение редуцирующей способности................................................. 99
Определение фермента каталазы.................................................................. 99
Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам.............. 100
Лабораторные животные............................................................................................ 102
Краткие сведения о содержании, разведении, кормлении и заболеваниях лабораторных животных 103
Правила пополнения вивария новыми животными................................ 105
Правила содержания экспериментальных животных в виварии....... 106
Уборка и дезинфекция вивария.................................................................... 111
Личная гигиена работников питомника (вивария)................................. 112
Правила кормления лабораторных животных....................................... 113
Заболевания лабораторных животных.............................................................. 115
Подготовка животных к заражению.................................................................... 117
Фиксация, методы заражения и взятия крови у лабораторных животных 122
Способы заражения............................................................................................. 126
Наркоз лабораторных животных............................................................... 127
Внутрикожный метод..................................................................................... 127
Подкожный способ заражения..................................................................... 127
Внутримышечный способ заражения........................................................ 128
Внутрибрюшинный способ заражения..................................................... 128
Внутривенное заражение кроликов............................................................ 129
Внутривенное заражение крыс и мышей.................................................. 129
Заражение через пищеварительный тракт............................................... 130
Заражение через дыхательные пути (интраназальное заражение).. 131
Заражение в переднюю камеру глаза (интраокулярный метод)........ 132
Внутримозговой метод (интрацеребральный)........................................ 132
Внутриплевральный метод........................................................................... 133
Содержание животных под опытом........................................................... 133
Взятие крови у лабораторных животных и ее обработка........................ 133
Умерщвление и вскрытие лабораторных животных.......................................... 138
Вскрытие животных................................................................................................. 138
Определение вирулентности микробов.................................................................. 142
Определение токсигенности микробов................................................................... 144
Литература..................................................................................................................... 145
МЕТОДЫ ОБЩЕЙ БАКТЕРИОЛОГИИ
Учебно-методическое пособие
Дмитрий Аркадьевич Васильев
Сергей Николаевич Золотухин
Наталья Михайловна Никишина