Середовища для культивації клостридій

Середовище Кітта-Тароцці. М'ясо або печінка великої рогатої худоби нарізають дрібними шматочками, заливають трикратним об'ємом МПБ або бульйон Хоттінгера (рН 7,4—7,6) і 30 хвилин кип'ятять. Потім середовище фільтрують, печінка (м'ясо) промивають водопровідною водою, підсушують фільтрувальним папером. По 3-4 шматочки м'яса (печінки) поміщають в пробірку, наливають 7-8 мл бульйону, покривають шаром вазелінового масла і стерилізують при 120°С 20 хвилин. Перед використанням середу регенерують (кип'ятять з наступним охолодженням).

Кров'яний агар з глюкозою. До 3%-ному МПА (рН 7,2—7,4), розплавленого і охолодженого до 50°С, додають до 1-2% стерильного розчину глюкози, 15-20% свіжої дефібрінірованной крові барана або коня. Розливають по чашках Петрі, підсушують 20-30 хвилин в термостаті. Культивування проводять в анаэростате.

Напіврідкий агар для суворих анаеробів (Тароцци). У бульйон Мартена (рН 7,2-7,4) з 0,3-0,5% глюкози додають 0,1% агару. Середовище розливають по 9 мл в стерильні пробірки з шматочками вареного м'яса, печінки або фаршу, стерилізують при 120°С 30 хвилин. Середовище можна використовувати, не заливаючи поверхню вазеліновим маслом.

Агар для трубок Виньял-Вейона. У бульйоні Мартена (рН 7,4) розчиняють 2% агару, 0,1% глюкози. Середовище розливають у вузькі тонкостінні пробірки і стерилізують дрібно, текучим паром протягом 3 днів.

Бульйон Вейнберга для анаеробів. 1 кг бичачого серця пропускають через м'ясорубку, додають до фаршу 1 л води, нагрівають до кипіння, охолоджують, знімають жир. Змішують 400 г печінки, 400 г свинячих шлунків, 40 г соляної кислоти, 4 л води, підігрітої до 50°С, і витримують при цій температурі 18-24 год. Потім підігрівають до 100°С, рідину зливають, фільтрують, додають 0,2% двоосновного фосфорнокислого натрію і встановлюють рН 7,4. Змішують 1 л м'ясної води із серця бика і 2 л отриманого пептона, встановлюють рН 7,8—8,2 і стерилізують при 120°С 30 хвилин. Бульйон розливають по пробірках з шматочками вареної печінки, наливають стерильне вазелінове масло шаром 0,5 см і знову стерилізують при 120° С 30 хвилин. Перед посівом до бульйону додають стерильний розчин глюкози до 0,5%.

Середовище Віліса і Хоббе. Змішують 400 мл бульйон Хоттингера, 4,8 г агару, 4,8 г лактози, 1,3 мл 1%-ного розчину нейтрального червоного. Стерилізують при 115°С 15 хвилин, охолоджують до 50°С і додають 15 мл стерильної жовткової суспензії (змішують порівну курячий жовток і фізіологічний розчин) і 60 мл стерильного знежиреного молока.

Залізо-сульфітний агар (Вільсон, Блер, 1924). До 100 мл 3%-го МПА (рН 7,4) з 1% глюкози при температурі 60°С, додають 10 мл 20%-ного розчину сірчанокислого натрію (Na2SO3) і 1 мл 8%-ного розчину хлористого заліза (FeCl3), приготовленого на стерильній дистильованій воді. Розчин Na2SO3 попередньо стерилізують 1 год текучим паром. Потім середу, не стерилізуючи, розливають по чашках Петрі. Сірчанокислий натрій можна замінити сірчанокислим натрієм (Na2S2O3), а хлористе залізо—сірчанокислим (FeSO4). При відновленні Na2SO3 сульфат натрію з'єднується з хлорним залізом і утворюється чорний осад сірчистого заліза (FeS). Цією здатністю володіють анаероби і деякі аеробні бактерії, внаслідок чого колонії таких мікроорганізмів забарвлюються в чорний колір. С. perfringens, володіє великою швидкістю росту, змінює колір середовища через 1-2 год культивування. Інші анаероби формують зеленувато-чорні колонії через 6-7 г.

Залізо-сульфітне молоко (Робінзон, Стоваль, 1937). До 100 мл знежиреного молока додають 10 мл 20%-ного розчину серністокіслий натрію і 1 мл 8%-ного хлористого заліза. Середовище готують безпосередньо перед використанням і розливають по пробірках. На даній середовищі С. perfringens можна виявити в суміші зі стрептококами, які на інших середовищах здатні помітно гальмувати його зростання.

Бензидино-кров'яний агар (Гордон, Мак Леод, 1940). До 3%-ному МПА (рН 6,4) з 1% глюкози, подогретому до температури 50°С, додають бензидин до концентрації 9% і 10% стерильної дефібрінірованной крові барана. Компоненти перемішують до придбання середовищем шоколадного відтінку, розливають по чашках Петрі і підсушують 4-5 год в термостаті. Засіяні чашки витримують в анаеробних умовах в термостаті 12-24 год, а потім переносять у аеробні умови. Колонії С. novyi забарвлюються в чорний колір за 15-30 хвилин. Розчин бензидину готують наступним чином: до 50 мл дистильованої води додають 0,25 г основного бензидину, 0,3 мл 1% HCl і нагрівають до розчинення. Розчин придатний для вживання протягом 2 тижнів.

Жовтково-кров'яний агар (Шапина-Вегина, 1962). До 2,5%-ному МПА додають 10% дефібрінірованной крові барана, 10% желточной суспензії. Середа призначена для виявлення С. novyi. Через 16 год вирощування колонії оточені непрозорою зоною гемолізу з наявністю на поверхні середовища навколо колоній непрозорої плівки з перловим блиском. Інші бактерії (аероби, анаероби), як правило, не дають одночасно перламутрового шару та зони редукції.

Напівсинтетичне середовище (Bonnel, Burgian, Raby, 1959). Використовують для культивування і швидкої селекції анаеробних бактерій. У 1000 мл дистильованої води розчиняють 15 г пептона, 5 г дріжджового екстракту, 2,5 г натрію хлориду, 1,3 г агар-агару і приймати Na2CO3. Суміш автоклавують при 120° С протягом 15 хвилин, фільтрують і додають 5,5 г глюкози, 0,5 г гідросульфіта натрію (попередньо розчинені в невеликій кількості води), встановлюють рН 7,1. Додають 0,001 г резазурина і суміш струшують протягом декількох хвилин. Середовище розливають у пробірки по 15 мл, стерилізують при 110°С 30 хвилин, охолоджують під холодною водою. При зростанні анаеробів середовище забарвлюється в нижній частині пробірки, факультативних анаеробів — весь стовпчик середовища. Середовище використовують 3 тижні при зберіганні в умовах кімнатної температури.

Натрію метабисульфат і залізо амонійно-цитратное є індикаторами редукції сульфіту, що впливає на формування колоній збудника чорного кольору діаметром 2-4 мм, Зростання інших сульфатредукуючих бактерій (сальмонели, протей, цитробактер, стафілококи, бацили) інгібується. На середовищі можуть рости ентерококи, але їх колонії по зовнішньому вигляду відрізняються від колоній С. perfringens.

Анаеробний агар Шадпера (пропис фірми «Дифко», 1982). У 1000 мл дистильованої води розчиняють 10 г триптического соєвого бульйону, 5 г пептона, 5 г дріжджового екстракту, 5 г декстрози, 0,4 г цистеїну гідрохлориду, 0,01 г геміну, 0,75 м трис-буфера, 13,5 г агару. Встановлюють рН 7,6, стерилізують автоклавуванням при 121°С 15 хвилин.

Триптозо-сульфітний циклосериновый агар (TSC-агар). В основній перфрінгенс-агар вносять D-циклосерин з розрахунку 400 мг/л та 50 мл/л желточной емульсії. Компоненти перемішують і готове середовище розливають у чашки Петрі.

Перфрінгенс-агар Шахиди—Фергусона (SFP-агар, пропис фірми «Дифко», 1982). В основній перфрінгенс-агар вносять наступні антибіотики: 12 мг/л канаміцин-сульфат, 30000 ОД/л поліміксин В сульфату і 50 мл/л желточной емульсії. Готове середовище розливають у чашки Петрі. На обох вказаних середовищах навколо чорних колоній С. perfringens утворюється опалесцююча зона, яка вказує на лецитиназную активність мікроорганізму.

Анаеробний бульйон Шадлера (пропис фірми «Дифко», 1982). За складом середовище аналогічна анаеробного аґару Шадлера, але з неї виключений агар. Використовують для вирощування патогенних анаеробів, для визначення антибіотикостійкості анаеробів методом розведень з виразом результату у вигляді МІК.

Тиогликолевый бульйон (пропис фірми «Дифко», 1982). У 1000 мл дистильованої води розчиняють 0,5 г L-цистину, 2,5 г натрію хлориду, 5,5 г декстрози, 5 г дріжджового екстракту, 15 г панкреатичного перевара казеїну, 0,5 г натрію тиогликолята. Встановлюють рН 7,1, розливають по ємностей і стерилізують при 121°С 15 хвилин. Перед використанням середу кип'ятять і охолоджують.

Анаеробний агар Уілкінс-Чангрена (пропис фірми «Дифко», 1982). У 1000 мл дистильованої води розчиняють 10 г триптона, 10 г желатинового пептона, 5 г дріжджового екстракту, 1 г декстрози, 5 г натрію хлориду, 1 г L-аргініну, 1 г натрію пірувату, 0,0005 г менадіона, 0,005 г геміну, 10 г агару. Встановлюють рН 7,1, стерилізують при 121°С 15 хвилин.

Середа рекомендується для ізоляції анаеробних мікроорганізмів з клінічних матеріалів, є стандартною для визначення анткбиотикочувствительности анаеробних бактерій. При виключенні агару середовище може бути використана як поживний бульйон.

Збагачений клостридиальный агар (RCM-агар, пропис фірми «Дифко», 1982). У 1000 мл дистильованої води розчиняють 3 г дріжджового екстракту, 10 г м'ясного екстракту, 10 г пептона, 5 г декстрози, 1 г розчинного крохмалю, 5 г натрію хлориду, 3 г натрію ацетату, 0,5 г цистеїну гідрохлориду, 15 г агару. Встановлюють рН 6,8, стерилізують при 121°С 15 хвилин.

Середа рекомендується для дослідження кишкової мікрофлори. Perry et al. (1955) використовували її для вивчення рубцевих стрептококів, Bornes, Goldberg (1962), внісши до складу хлортетрацикліну гідрохлорид або натрію азид, застосовували середовище для дослідження фецес курей. З домішками крові вона придатна для виявлення в фецес тварин і людей лактобацил, з домішками крові та неоміцину — бактероїдів.