Макробиология газовой гангрены 6 страница

2. Бактеріологічний.

Для виявлення клостридій правця один флакон або про­бірку з матеріалом, що досліджується, прогрівають у водя­ній бані при 80°С 20 хвилин, внаслідок чого пригнічується ріст сторонньої неспорової мікрофлори. Потім висівають на сере­довище Кітта-Тароцці, вміщують в термостат при і° 35°С.

Роблять мазок з посіву, при позитивному результаті вияв­ляються клостридії правця,

пересівання на агар Цейслера: відбирають колонії і роб­лять посів на середовище Кітта-Тароцці.

При вивченні виділеної культури проводиться мікроско­пія, визначається біохімічна активність.

Ставиться дослід нейтралізації на мишах з метою вияв­лення токсину. Даний дослід проводиться з перевитою .куль­турою і чистою, отриманою на середовищі Кітта-Тароцці. Першій групі тварин вводиться культура, другій групі — культура з антитоксичною сироваткою. При наявності токси-ну перша група мишей гине при характерних явищах, друга група виживає, так як токсин нейтралізується антитоксином, що міститься в сироватці.

Лікування

Для терапії використовуються такі препарати:

1. Гамма-глобулін крові людей, імунізованих проти правця.

2. Антитоксична сироватка, яку вводять внутрішньом'язово в дозах 100 000 — 200 000 АО.

3. Антибіотики — пеніцилін, тетрациклін, цефалоспорини

4. Протисудорожні засоби: 25% розчин сірковокислої магнезії,, аміназин, піпольфен, андаксим, кондельфін, у кліз­мах — хлоралгідрат.

Імунітет

При правцю в основному антитоксичний, недостатньо на­пружений, можливе, повторне захворювані

Профілактика

Для активної імунізації – АДП, АКДП, КДП.

Пасивна імунізація полягає у введенні антитоксичної
протиправцевої сироватки у видадку наявного поранення. Частіше при травмах проводиться пасивно-активна профілакти­ка: вводиться протиправцева сироватки (обов'язкове вве­дення за Безрідка), потім анатоксин Якщо виявляється підвищена чутливість до сироватки, то вводиться лише ана­токсин.

Планові щеплення проводяться всім дітям від 6—7 місяців до 12 років.

У подальшому кожні 8—10 років проводяться ревакци­нації. Імунітет зберігається 2—3 роки.

Загальна профілактика здійснюється шляхом поперед­ження травм на виробництві і в побуті.

збудник Дифтерії

Збудник дифтерії — Corynebacterium diphteriae — па­личка Леффлера, належить до сімейства Corynebacteriaceae. Рід ко­ринебактерій включає і патогенних і непатогенних для лю­дини мікробів. В основі хвороби лежить дія мікробної отрути, що впливає на життє­во важливі системи: серцево-судинну, нервову, симпатико-адреналову (наднирники).

На слизовій носа і зіву, на кон'юнктиві ока зустрічають
ся також неііатогенні мікроби з роду Corynebacterium. Одні з них називаються псевдодифтерійними, наприклад, палички Гоффмана, інші — дифтероїдами, наприклад, Васt. xerosis. Збудник дифтерії вперше
описаний у 1883 р. Е. Клебсом, Він побачив у зрізах плівки,
знятої з зіву хворого, досить довгі, прямі або трохи зігну
палички. Через рік, І Леффлер виділив цей мікроб у чистій культурі, описав його властивості, запропонув, один із способів забарвлення, середовище для вирощуванії. , Мікроб став називатись поличкою Леффлера.

Морфологія

Паличка пряма або трохи зігнута зі стовщенням на одному або обох кінцях, Рпор і капсул не утворюють, Нерухомі.

Характерними морфологічними ознаками цих бактерій є дві; взаємне розташування, наявність включень у проти плазмі. Взаємне їх розташування гарно можна розглянути на тонкому мазку. Палички лежать під кутом одна до одної і нагадують цифри V, X або розчепірені пальці руки.Включення – зерна волютину, тільця Бабеша – Ернста, при забарвленні за Леффлером, палички жовті, зерна – коричневі. Грам+.

Культуральні властивості.

На спец.середовищах, що містять сироватку або кров тварин – краще та швидше, ніж інші.

Середовище Ру – зсіла сироватка крові коня

Середовище Леффлера ¾ сироватки ¼ МПБ, що містить 1% глюкози. Колонії блідо-жовті, випуклі, з блискучою гладенькою поверхнею. Консистенція колоній дуже густа. Завдяки густій консистенції колонії не зливаю­ться одна з іншою, навіть, якщо вони лежать дуже тісно і весь наліт здається зернистим, бугристим. Ці середовища не­замінні, так як при рості на них зберігаються всі морфо­логічні особливості дифтерійних бактерій — розташування, зернистість.

Друга група спеціальних середовищ: телуритові середо­вища.

Додання до середовища телуриту калію робить її диференіцально-діагностичною, тобто колонії дифтерійних бак­терій на таких середовищах набувають чорного або темно-сіро­го кольору.

Середовище Тинсдаля-Садикової (МПА ± нормальна коняча сироватка + цистин + телурит калію + гіпосульфіт натрію). До посіву середовище світле, жовтувато-сіре. Коло­нії дифтерійних паличок чорні з коричневим ореолом, від­бираються вони легко. Недолік цього середовища: при рості на ній мікроби втрачають характерну морфологію і слід їх пересівати на середовище Ру, щоб робити з неї мазки для виявлення зернистості та розташування дифтерійних пали­чок.

Кров'яний телуритовий агар (агар+дефібринована кров (замість сироватки)+телурит калію). На цьому се­редовищі дифтерійні бактерії утворюють неоднорідні колонії в залежності від типу бактерій.

Розрізняють три типи бактерій дифтерії; 1. Тип gravis — виділяється при тяжкій формі хвороби.

2. Тип mitis виділяється при легкій формі.

3. Тип intermedius — проміжний.

Тип gravis утворює великі колонії R-форми сірого кольо­ру (форма квітки маргаритки), без гемолізу.

Тип mitis — S-форма колонії; дрібні, гладенькі, чорні, оточені зоною гемолізу.

Тип intermedius займає проміжне положення; дрібні (R, S-форми), чорного кольору. На інших густих середовищах (Ру, Леффлера, Тинсдаля-Садикової) колонії дифтерійних
паличок різних типів не відрізняються. До рідких середовищ
належать: мартенівський бульйон. Типи gravis і mitis ростуть
по-різному тип gravis утворює плівку і зернистий осад, тип
mitis - рівномірне помутніння. Типи дифтерійної палички
відрізняються не лише культуральними властивостями, а й
деякими біохімічними.

Біохімічні властивості

Вивчення цих якостей має значення не лише для дифе­ренціації типів дифтерійного мікроба, але й для того, щоб відрізнити їх від інших коринебактерій, псевдодифтерійиих бактерій і дифтероїдів.

Враховується відношення до трьох цукрів: сахарози, глюкози, мальтози, крохмалю, сечовини і цистину.

Токсиноутворення

Токсин має дві властивості: токсичність і антигенність.

На місці проникнення екзотоксин викликає коагуляційний некроз епітелію, розширення судин, підвищен­ня проникливості їх стінок. Течія" крові в судинах уповіль­нюється, спостерігається, вихід з, судин, плазми крові, багатої фібриногеном. У результаті цього виникає набрякання ото­чуючих тканин, а фібриноген при контакті з некротизованою тканиною перетворюється на фібрин, утворюючи фібринозну плівку. На ділянках, покритих .багатошаровим епітелієм (зів, горло), виникає дифтерійне запалення, при якому фіб­ринозна плівка густо спання з нижньою тканиною. На слизо­вих оболонках, покритих одношаровим циліндричним епіте­лієм (гортань, трахея, бронхи), розвивається крупозне запа­лення.

Якщо токсин вже пов'язався з клі­тинами, дія його неповоротна. Захист повинен полягати в то­му, щоб у крові людини знаходились антитіла, здатні нейтра­лізувати токсин.

За антитоксичну (АО) беруть ту кількість сироватки, яка в досліді на морських свинках може нейтралізувати 100 dlm токсину. Вчені визначили, що людина буде захищена від дії дифтерійного токсину., якщо у неї в крові міститься не мен­ше 1/30 АО на мл. Якщо антитіл менше, то імунітету немає.

Чи можна визначити, сприйнятлива людина до дифтерії, або чи є в неї імунітет? Для вивчння наявності імунітету мо­же бути використана реакція Шіка. Це внутрішньошкірна проба, яка становить собою реакцію нейтралізації токсину антитоксином.

Створити антитоксичний імунітет можна штучно за до­помогою анатоксину і антитоксичної сироватки. Утворення мікробами токсину є важливою ознакою патогеїщості: дифте­рійні палички мають токсигенпість, псевдодифтерійні і дифтероїди — не мають. Це перевіряється на досліді РП в агарі, Для досліду використовується цистиновий агар, протидифтерійна антитоксична сироватка, досліджуваний матеріал. Проявлення реакції: утворення ліній преципітації в агарі між антитоксичною сироваткою і посівом токсичного мікроба.

Патогенез

Дифтерія належить до групи повітряно-краплишшх ін­фекцій. Хвора людина або носій при розмові, кашлі розбриз­кує дрібні крапельки слини або носового' слизу, які містять іікроби. Якщо такі краплини потрапляють на поверхню пред­метів (іграшки, посуд), вони можуть зберігатися на них від кількох годин до декількох днів.

Вхідними воротами інфекції найчастіше служать сли-юва зіву і носа, але можуть бути і слизові статевих органів, кон'юнктива ока, поверхня рани. Відповідно до цього роз­різняють дифтерію зіву, носа, дифтерію ока, дифтерію статвих органів і дифтерію шкіри. Мікроби, що потрапили в організм, розмножуються і розносяться кров'ю в різні органи. Екзотоксин уражає сердцево-судинпу, нервову і симпатико-адреналову системи. На цій особливості механізму розвитку інфекції і основана лабораторна діагностика.

Лабораторна діагностика

Основний метод — виділення культури збудника.

Перший посів роблять на диференціально-діагностичних іНіііх середовищах, бо па них виявляються за кольором колонії:-чорні, темно-сірі.

Для вивчення морфології підозрі­лих культур робиться пересів на сер. Ру з якого, го­тують мазки для забарвлення за Грамом, синькою, за Нейссером. Останній спосіб дозволяє найбільш чітко виявити включення — темпі, майже чорні, на світло-жовтому фоні тіла паличок. Для вивчення біохімічної активності з середо­вища Ру роблять посів на строкатий ряд і на рідке середови­ще для постановки проби на уреазу (2% водний розчин сечо­вини змішують з ршиим об'ємом рідкої культури — звичайно по 0,3 мл і додають декілька краплин фенолфталеїну). Справжній збудник дифтерії середовище не змінює, так як уреазу не утворює. Межовий строк спостереження 2 години. Визначення токсиногенності можна проводити на мор­ських свинках — токсин викликає некроз при внутрішньо-шкірному введенні культури. Але простіше й дешевше виз­начити цю властивість за допомогою РП на цистиновому ага­рі.

Прискорені методи

1. Бактеріоскопія з тампона робиться лише за вимогою лікаря. Для цього беруть матеріал двома тампонами, одним для посіву, іншим — для мазка.

2. Вирощування дифтерійних паличок прямо на сироватковому тампоні. Через 4 години цим тампоном роблять мазок. Вірогідність виявлення підвищується до 95 %, але морфологія часто не характерна: ще немає зернистості.

2. Люмінесцентна мікроскопія первинних мазків.

Специфічна терапія

1892 р. Берінг у Німеччині і Еміль Ру. у Франції запропонували лікувальну антитоксичну сироватку.

Специфічна профілактикаАД – анатоксин, АДП – анатоксин, АКДП – анатоксин.

Патогенные анаэробы

В отличие от аэробов и факультативных анаэробов, строгие (облигатные) анаэробы живут только в условиях либо полного отсутствия кислорода, либо при незначительном его содержании. Однако :-н> столь же широко распространены в природе, как и первые. Естественной средой их обитания являют­ся почва, особенно ее глубокие слои, ил различных водоемов, сточные воды, кишечный тракт млеко­питающих животных, птиц, рыб и человека. Анаэробы встречаются всюду, где есть органические клм неорганические вещества и нет кислорода. Им принадлежит важная роль в процессах круговорота веществ в природе, в особенности азота и углерода, так как они обусловливают процессы соответ­ственно гниения и брожения. Вместе с тем, строгие анаэробы составляют основную массу нормаль­ной микрофлоры кишечника человека и млекопитающих животных, играют важную роль в обеспече­нии их видового иммунитета и поддержании нормальной жизнедеятельности.

Строгие анаэробы можно разбить на 2 основные группы: спорообразующие и не образующие cnof Спорообразующие анаэробы относят к роду Clostridium семейства Васillaсеае, а не образующие грамотрицательные бактерии — к родам Bacteroides и Fusobacterium; грамположительные — к Bifidobacterium и к семейству Lactobacillaceae. Существуют строгие анаэробы и среди грампожи тельных (семейства Micrococcaceae и Streptococcaceae) и грамотрицательных (семейство Veillonellaceae} кокков.

К строгим анаэробам относятся также метанообразующие (Methanobacteriaceae) и некоторые Mfff-гие бактерии. В патологии человека и животных основную роль играют анаэробные спорообразующре бактерии, относящиеся к роду Clostridium, а также неспорообразующие бактерии, принадлежащие ж родам Bacteroides, Fusobacterium и Campylobacter.

Клостридии

Бактерии рода Clostridium образуют овальные или круглые споры, располагающиеся субтермина,№-но, центрально или терминально. Как правило, споры имеют диаметр больше диаметра вегета клетки, поэтому палочка со спорой приобретает сходство с веретеном, отсюда и произошло рода Clostridium (веретеноподобные). Клостридий чрезвычайно широко распространены в природе Естественной средой их обитания служит кишечник травоядных животных и человека, а также почвг куда они поступают с испражнениями. В кишечнике человека и животных клостридий появляются вскоре после рождения. Удобренная навозом земля полей, пастбищ, огородов и садов всегда содержи" споры клостридий, которые при благоприятных условиях могут прорастать, а клостридий — размно­жаться (в летнее время и при наличии в почве необходимых питательных веществ). Для некоторых видов клостридий именно почва, содержащая органические вещества, является естественной средо:-. обитания. Проникнув вместе с кормом и пищей, загрязненными почвой, в кишечник животных ■ человека, клостридий обычно не вызывают заболевания. Патогенные клостридий вызывают заболева­ние в тех случаях, когда они проникают в раны, т. е. являются возбудителями раневых инфекций — газовой гангрены и столбняка; или когда они попадают в пищевые продукты, размножаются в них выделяют экзотоксины и вызывают пищевые токсикоинфекции (например, ботулизм). В иных случаях клостридиальная инфекция может иметь эндогенную природу, например, псевдомембранозный колит возникает как следствие нерациональной антибиотикотерапии, в результате которой в кишечнике начинает интенсивно размножаться Clostridium difficile, вызывая эту тяжелую болезнь.

Ключевые признаки рода Clostridium: крупные палочки с закругленными концами, обыч-подвижные, с перитрихиальными жгутиками, иногда неподвижные. Они образуют овоидные или круглые споры, которые расширяют клетку; грамположительны, по крайней мере, в течение ранней стадии роста; хемоорганотрофы, не восстанавливают сульфаты. Некоторые виды обладают сахаролити-ческими, другие — протеолитическими свойствами; некоторые виды — обоими, некоторые — ни теми, ни другими. Ферментируют глюкозу и другие углеводы с образованием кислоты и газа, некото­рые штаммы не ферментируют глюкозу. Большинство штаммов является строгими анаэробами, хотя некоторые могут расти в присутствии воздуха. Некоторые виды фиксируют азот; каталазы обычно не образуют, а когда она есть, то в небольшом количестве. Содержание Г+Ц в ДНК варьирует б пределах 23-43 мол%.

Род Clostridium включает большое количество видов. Для удобства идентификации род поделен на 4 группы по локализации спор и способности разжижать желатин.

По крайней мере еще 36 видов клостридий были выделены из клинического материала от людей и 24 вида — от больных животных. Однако лишь для немногих доказана патогенность для человека и животных. К их числу относятся следующие виды: C.tetani — споры располагаются терминально, гидролизуют желатин — rpynnalV; C.botulinum, C.perfringens, C.novyi, C.septicum, C.sordellii, C.histolyticum, C.difficile, C.sporogenes (расположение спор субтерминальное, желатин гидролизуют, относятся к группе II). Основные различия между этими видами представлены в табл. 42.

Макробиология газовой гангрены

Газовая гангрена — тяжелая раневая инфекция, для которой характерны глубокая общая инток­сикация и прогрессирующее омертвение тканей, сопровождающееся их отеком и газообразованием. Классическое описание симптомов газовой гангрены дал в 1864г. Н. И. Пирогов. Газовая гангрена является полимикробной инфекцией. К ее возбудителям относят: C.perfringens, C.novyi, C.septicum, C.histolyticum, C.sordellii, C.difficile и C.sporogenes. Первое место в этиологии газовой гангрены принадлежит C.perfringens, второе — C.novyi, однако нередко анаэробы — возбудители газовой гангрены — обнаруживаются в ранах в стойких ассоциациях не только друг с другом, но и с аэробными гноеродными кокками и гнилостными анаэробными бактериями. Различные сочетания возбудителей газовой гангрены с аэробными и анаэробными гноеродными и гнилостными бактериями могут значительно усугубить тяжесть течения анаэробной инфекции.

Основные свойства возбудителей газовой гангрены. Clostridium perfringensоткрыт в 1892г. М. Уэлчем и Г. Натталом. Нормальный обитатель кишечника человека и животных. Толстую неподвижную грам+ палочку со слегка закругленными концами. Споры овальные, располагаются субтерминально или, чаще, центрально, образуются лучше в щелочной среде. В материале из ран и на среде с сыворот­кой образуют капсулу. На жидких средах C.perfringens быстро растет, вызывая помутнение и энергичную ферментацию глюкозы с образованием кислоты и газа; ферментирует также лактозу, мальтозу и сахарозу, но не ферментирует маннит; молоко створаживает через 3-5 ч с образованием рыхлого сгустка и с отделением прозрачной сыворотки; разжижает желатин; на кровяном агаре образует колонии диаметром 2-5мм с зоной гемолиза и приподнятым центром. В столбике агара образуются дисковидные колонии.

C.perfringens обладает высокой инвазивностью и сильной токсигенностью. Первая связана со способностью возбудителя вырабатывать гиалуронидазу и другие ферменты, которые оказывают также и разрушающее действие на клетки соединительной ткани и мышцы. Главным фактором патогенности C.perfringens является вырабатываемый им сложного состава экзотоксин. Гемотоксическое, некроток-сическое, нейротоксическое, лейкотоксическое и летальное действия связаны с различными компонен­тами экзотоксина. Отдельные штаммы C.perfringens синтезируют экзотоксины разного состава и разной антигенной специфичности, в соответствии с которой различают 6 серологических типов этого возбудителя: А, В, С, D, E, F.

Серотип А — один из главных возбудителей газовой гангрены у людей. При заражении животных C.perfringens наблюдается обширное отслоение кожных покровов, рас­пад мышечной ткани, кровянистый экссудат, пузырьки газа в подкожной клетчатке; мышцы дряблые, серого цвета, имеют вид вареного мяса. Некоторые серотипы C.perfringens (А, С, D, F) являются виновниками пищевых токсикоинфекций и тяжелых энтеритов, в патогенезе которых установлена ведущая роль некротоксинов и энтеротоксинов.

Clostridium novyiоткрыт в 1894г. Ф. Нови. Грам+ полиморфная толстая палочка с закругленными концами, в виде цепочек из 2-5 клеток. Капсулы не образует, подвижный перитрих. Споры овальные или круглые, располагаются субтерминально, редко — центрально. Наиболее строгий анаэроб, на жидких средах растет в виде легкого помутнения, дает большой осадок, наблюдается умеренная ферментация глюкозы с образованием газа. Молоко сверты­вает медленно, желатин разжижает. На кровяном агаре она образует серые бугристые колонии с приподнятым центром, отходящими отростками и зоной гемолиза; в столбике с агаром дает хлопье­видные колонии; ферментирует глюкозу, мальтозу, не ферментирует лактозу. Патогенность С.novyi обусловлена его способностью продуцировать очень сильный экзотоксин сложного состава, вызываю­щий при заражении животных характерный бесцветный или розового цвета отек желеобразной консистенции. Токсин обладает также гемолитическим и летальным свойствами.

Clostridium septicumвыделен в 1877г. Л. Пастером и Ж. Жубером из трупа коровы. С.septicum — тонкая длинная полиморфная палочка, нередко образует нити, грам+, перитрих, капсу­лы не образует. Споры овальные, располагаются субтерминально или центрально, образуются быстро, уже через 24 ч. На жидкой среде вызывает помутнение, молоко свертывает медленно, гидролизует желатин, ферментирует глюкозу, лактозу, мальтозу с образованием кислоты и газа, не ферментирует маннит и сахарозу. На кровяном агаре колонии окружены зоной гемолиза и имеют тонкие многочис­ленные отростки; в столбике агара колонии имеют вид пушинок с уплотненным центром.

C.septicum патогенна для человека и домашних животных. Продуцируемый экзотоксин обладает некротическим, гемолитическим и летальным действием. При заражении животных вызывает кровяни­сто-серозный отек, мышцы имеют темно-красный цвет, в подкожной клетчатке и в мышцах — пузырьки газа.

Clostridium histolyticumоткрыт в 1916г. М. Вейнбергом и Е. Сегеном. Прямая палочка, подвижна (перитрих), капсул не образует, спо­ры овальные, располагаются субтерминально, углеводы не ферментирует. Молоко быстро пептонизирует. На жидких средах дает общее помутнение. Колонии в столбике агара компактные, мохнатые, неправильной формы. На кровяном агаре колонии мелкие, прозрачные, как капельки росы, с узкой зоной гемолиза. C.histolyticum обладает сильными протеолитическими ферментами — быстро разжижает желатин; при заражении животных происходит протеолиз мягких тканей с обнажением костей и отпаданием конечностей. Продуцируемый экзотоксин при внутривенном введении животным вызывает быструю смерть. C.histolyticum в природе распространен сравнительно мало, встречается в почве, в сточных водах, иногда в кишечнике человека.

Особенности патогенеза газовой гангрены. Газовая гангрена — это своеобразный патологичес­кий процесс, который дает различные клинические проявления в зависимости от места локализации. Различают следующие формы этой болезни: анаэробная инфекция мягких тканей конечностей и туловища; анаэробная инфекция мозга; послеродовая или послеабортная анаэробная инфекция; анаэ­робная инфекция органов брюшной полости и брюшины; анаэробная инфекция органов грудной полости и анаэробный остеомиелит. Все они характеризуются единством патогенеза. Анаэробная инфекция в отличие от гнойных заболеваний, вызываемых аэробными бактериями, протекает без ярко выраженного воспаления. Для нее характерны: прогрессирующий некроз тканей, отек, газообразова­ние в тканях и отравление организма токсинами возбудителя и продуктами распада тканей. Газовая гангрена встречается как в мирное, так и, в особенности, в военное время. Во время Великой Отечественной войны 1941-1945 гг. она наблюдалась у 1-14% раненых. В военное время чаще всего наблюдается газовая гангрена мягких тканей конечностей, особенно нижних. Надо иметь в виду, что патогенные анаэробы очень часто обнаруживаются в ранах, но для развития анаэробной инфекции необходимы определенные условия. Клостридии — некропаразиты, благоприятной средой для их размножения служат мертвые или поврежденные ткани. Поэтому наиболее опасны тяжелые повреж­дения с обширной раневой поверхностью, нарушением кровообращения, гематомами, размозжением мышц, раздроблением костей, образованием слепых ходов и т. п. Попадая в такие раны, клостридии начинают быстро размножаться в глубине поврежденной ткани (анаэробные условия) и выделять экзотоксины. Обладая высокой инвазивностью, они проникают и в здоровую ткань, вначале повреж­дая ее, а затем и некротизируя своими токсинами и ферментами. Особенно бурно процесс протекает в мышечной ткани, содержащей гликоген и являющейся хорошей питательной средой для клостридии. В патогенном действии клостридии и их токсинов различают 2 стадии:

1) образование отека. Вследствие действия токсина повышается проницаемость кровеносных сосу­дов для плазмы и клеток крови. Развитие отека приводит к сдавливанию ткани; кроме того, с отечной жидкостью поступает токсин. Все это приводит к повреждению тканей и делает их доступными для размножения клостридии;

2) развитие газовой гангрены, т. е. некроз мышечной и соединительной тканей. Газообразование является результатом ферментативной активности клостридии, а некроз — следствием некротокси-ческого действия токсинов и ферментов. Токсины не только действуют местно, но и вызывают сильнейшую общую интоксикацию (нейротоксическое действие). К специфической бактериальной интоксикации присоединяется отравление продуктами тканевого разложения. Чем больше зона пора­жения, тем сильнее и разнообразнее интоксикация организма. Таким образом, клиника газовой гангрены определяется общим и местным действием токсинов и ферментов клостридий, а также отравлением продуктами тканевого распада.

Инкубационный период длится от нескольких часов до 5 дней, иногда дольше. В зависимости от свойств и ассоциации клостридий, вызвавших анаэробную инфекцию, клиника ее может быть разной: эмфизематозная, токсическая (отечная), смешанная и т. п. Анаэробная инфекция продолжа­ется 5-6 дней, и эти дни решают исход заболевания. Летальность во время первой мировой войны достигала 60%.

Постинфекционный и поствакцинальный иммунитет в основном опосредуется антитоксина­ми. Роль антимикробных антител второстепенна. Продолжительность и напряженность иммунитета после перенесенной инфекции изучены недостаточно.

Лабораторная диагностика. Материалом для исследования служат кусочки пораженных тканей (некротизированная и пограничные с ней участки) и отечная жидкость. Кроме того, исследованию в случае необходимости подвергают перевязочный и шовный материал (шелк, кетгут), одежду, образцы почвы; при пищевых интоксикациях, вызванных клостридиями, — испражнения и продукты. Микробио­логическая диагностика заключается в выделении из исследуемого материала возбудителя и его идентификации, основанной на изучении морфологических, культуральных, биохимических свойств и определении токсигенности. Исследование состоит из нескольких этапов:

1) бактериоскопия отделяемого раны или экссудата;

2) выделение возбудителя и его идентификация;

3) заражение белых мышей исследуемым материалом, фильтратом бульонной культуры или кровью больных для обнаружения токсина;

4) идентификация токсина клостридий с помощью реакций нейтрализации специфическими анти­токсическими сыворотками в биологических пробах на белых мышах или культурах клеток {С.difficile).

Для выделения клостридий используют следующие среды: А. Жидкие накопительные (казеиновые или мясные, содержащие 1 % глюкозы и кусочки печени, перед посевом кипятят и заливают вазелино­вым маслом для создания анаэробных условий), молоко. Б. Плотные — кровяной агар Цейсслера (15% дефибринированной крови + 2% глюкозы); кровяной агар с бензидином (колонии C.novyi на такой среде чернеют на воздухе); среда Вильсон-Блера в длинных стеклянных трубочках (C.perfringens в такой среде уже через 3-4 ч вызывает почернение в месте своего размножения за счет образования сернисто­го железа из Na2S и FeCl3 и бурное газообразование за счет ферментации глюкозы); среда Виллиса-Хоббса (содержит, кроме питательного агара, лактозу, индикатор, яичный желток и обезжиренное молоко). На этой среде колонии C.perfringens окрашены в цвет индикатора (ферментируют лактозу), имеют ореол опалесценции (наличие лецитиназы); колонии C.novyi бесцветные (не ферментируют лактозу), окружены зоной опалесценции (лецитиназа); колонии C.septicum окрашены в красный цвет (ферментируют лактозу), но не имеют зоны опалесценции; колонии C.histolyticum — бесцветны, окру­жены зоной просветления; колонии Материал для исследования делят на две части. Одну часть засевают на плотные дифференциаль­но-диагностические (Виллиса-Хоббса и др.) и жидкие среды без прогревания, а другую — после прогревания при 80 °С 15мин и при 100 °С (5 мин, 10 мин, 20 мин) засевают в жидкие мясные или казеиновые среды и инкубируют при 37 °С от 16 ч до 15 сут (для прогретых проб). Выросшие культуры, содержащие массу грамположительных палочек, пересевают на плотные дифференциально-диагностические среды (Виллиса-Хоббса, Вильсона-Блера и др.) для получения изолированных колоний, а затем чистых культур и их идентификации.

При посеве исходного материала на дифференциально-диагностические среды после инкубации при 37 °С в течение 1-7 сут колонии, вызвавшие соответствующие изменения на одной из этих сред и состоящие из грамположительных палочек, пересевают на мясные или казеиновые среды для дальней­шей идентификации. Для ускоренной диагностики газовой гангрены О. А. Комковой предложен следующий метод: посев производится в столбик полужидкого агара, к которому добавляется антиток­сическая сыворотка. В такой среде с гомологичной антитоксической сывороткой клостридий вместо диффузного помутнения образуют изолированные колонии, а в препаратах-мазках из них имеют вид стрептобацилл (располагаются цепочками). Лечение и профилактика. Главный метод предупреждения газовой гангрены — своевременная и правильная хирургическая обработка ран. В случае особо тяжелых ранений, которые могут повлечь развитие газовой гангрены, больному с профилактической целью вводят по 10 000 ME антитоксических сывороток против наиболее частых возбудителей — C.perfringens, C.novyi и C.septicum. С лечебной целью вводят те же сыворотки по 50 000 ME. При отсутствии эффекта сыворотки вводят повторно. Серотерапия должна обязательно сочетаться с эффективной антибиотикотерапией и соот­ветствующим общеукрепляющим лечением.