Этап. Описание характера развития продуцента антибиотика на плотной (агаризованной) питательной среде.

Микроорганизмы, развиваясь на поверхности агаризованных сред, могут расти в виде колонии, штриха или сплошного газона.

Колония (клон)-изолированное скопление клеток одного вида, выросшее в большин­стве случаев из одной клетки. В зависимости от того, где развивались клетки (на поверхности плотной питательной среды, в толще ее или на дне сосуда), различают поверхностные, глубинные и донные колонии.

Колонии, выросшие на поверхности среды, отличаются большим разно­образием и являются наиболее существенной особенностью роста мик­роорганизмов на плотном субстрате. По­этому описание характера колоний — один из признаков, кото­рый необходим для идентификации микроорганизма. При их описании учитывают сле­дующие признаки:

Форму колонии — округлая, амебовидная, неправильная, ризоидная и т. д. (слайд 1);

Размер (диаметр) колонии измеряют в миллиметрах; если размеры колонии не превышают 1 мм, то их называют точечными;

Поверхность колонии — гладкая, шероховатая, бороздча­тая, складчатая, морщинистая, с концентрическими кругами или радиально исчерченная (слайд 2);

Профиль колонии — плоский, выпуклый, кратерообразный, конусовидный и т. д. (слайд 3);

Блеск и прозрачность — колония блестящая, матовая, туск­лая, мучнистая, прозрачная;

Цвет колонии — бесцветная (грязно-белые колонии относят к бесцветным) или пигментированная — белая, желтая, золотистая, оран­жевая, сиреневая, красная, черная. Особо отмечают выделение пигмен­та в субстрат. При описании колоний актиномицетов отмечают пигмен­тацию воздушного и субстратного мицелия, а также выделение пигмен­тов в среду;

Край колонии — ровный, волнистый, зубчатый, бахромчатый и т. д. (слайд 4);

Структуру колонии — однородная, мелко- или крупнозерни­стая, струйчатая и т. д. (слайд 5). Край и структуру колонии определя­ют под микроскопом при малом увеличении. Для этого чашку помещают на столик микроскопа крышкой вниз;

Консистенцию колонии определяют, прикасаясь к ее по­верхности петлей. Колония может легко сниматься с агара, быть плот­ной, мягкой или врастающей в агар, слизистой (прилипает к петле), тя­гучей, пленчатой (снимается целиком), хрупкой (легко ломается при прикосновении петлей).

Глубинные колонии, напротив, довольно однообразны. Чаще всего они по виду похожи на более или менее сплющенные чечевички, в про­екции имеющие форму овалов с заостренными концами. Лишь глубин­ные колонии немногих бактерий напоминают пучки ваты с нитевидными выростами в питательную среду. Образование глубинных колоний часто сопровождается разрывом плотной среды, если развивающиеся мик­роорганизмы выделяют углекислоту или другие газы.

Донные колонии самых разнообразных микроорганизмов имеют вид тонких прозрачных пленок, стелющихся по дну.

Рост по штриху. Отмечают следующие особенности: скуд­ный, умеренный или обильный, сплошной с ров­ным или волнистым краем, четковидный (от «четки»), напо­минающий цепочки изолированных колоний, диффузный, перистый, древовидный или ризоидный (слайд 6). Характеризуют оптические свойства налета, его цвет, поверхность и кон­систенцию.

Характеристика субстратного мицелия.Субстратный мицелий (нитевидные отростки клетки) у актиномицетов — продуцентов антибиотиков - как правило, развивается в глубине питатель­ной среды. Бактериологической петлей прикоснитесь к поверхности культуры и убедитесь, что она плотно врастает в агар и не снимается петлей с поверхности агара. Обратите внимание на цвет субстратного мицелия (бесцветный, белый, темно-песочный, буровато-желтый и т.д.).

Микроскопия продуцента.Приготовьте препараты «раздавленная капля» и «отпечаток», рассмотрите под микроскопом.

Препарат «раздавленная капля»

На предметное стекло нанести 1 каплю метиленого синего (1:40). В каплю поместить небольшое количество продуцента из пробирки, воспользовавшись шприцом или микробиологической петлей. Размешать и покрыть покровным стеклом, слегка притирая его к поверхности предметного стекла и вытесняя воздух. Избыток жидкости убрать фильтровальной бумагой. Рассмотреть под микроскопом и зарисовать клетки продуцента.

Приготовление препарата «отпечаток»

Из плотной среды, на которой микроорганизмы растут сплошным газоном или в виде отдельных колоний, вырезают скальпелем небольшой кубик и переносят его на предметное стекло так, чтобы поверхность с микроорганизмами была обращена вверх. Затем к газону или колонии прикладывают чистое покровное стекло, слегка надавливают на него петлей или пинцетом и тотчас же снимают, стараясь не сдвинуть в сторону. Полученный препарат помещают отпечатком вниз в каплю метиленового синего (1:40) на предметное стекло. Рассматривают под микроскопом.

Отработанные препараты погружают в дезинфицирующий раствор.

Оформление результатов

Описание поверхностной культуры на плотной (агаризованной) сре­де необходимо для оформления паспорта культуры, проводится по следующей схеме:

А. Название продуцента;

Б. Состав среды;

В. Возраст культуры (подсказка: 7 суток), температура выращивания;

Г. Характеристика колоний или роста по штриху

Д. Характеристика мицелия.

Е. Результаты изучения культуры под микроскопом