РСК с целью раздельного определения IgM и IgG

Серодиагностика

Исследуемый материал: сыворотка больного - АТ

Диагностический препарат: диагностикумы (взвесь убитых м\о в физ. растворе) – АГ

Серотипирование

Исследуемый материал: возбудитель - АГ

Диагностический препарат: диагностическая иммунная сыворотка - АТ

+ реакция: выпадение осадка, просветление осадка

- реакция: помутнение

Применение: реакция Видаля — при брюшном тифе и паратифах, р. Вейгеля — при эпидемическом сыпном тифе, р. Райта — при бруцеллезе, сыпной тиф и др.; серотипирование возбудителя

2) Титрование агглютинирующей сыворотки

Тип реакции: р. Агглютинации

Исследуемый материал: сыворотка жив-го, гипериммунизированного бактериальной взвесью - АТ

Диагностический препарат: взвесь убитых бактерий для гипериммунизации - АГ

Принцип: к серийным разведениям агглютинирующей сыворотки добавляют равные количества взвеси убитых бактерий

+ реакция: обр-е хлопьев, просветление жидкости

- реакция: помутнение

Применение: определение титра агглютинирующей сыворотки

3) Реакция Грубера на стекле (ориентировочная)

Тип реакции: р. Агглютинации

Исследуемый материал: чистая культура – АГ

Диагностический препарат: адсорбированная и неадсорбированная сыворотка – АТ

Принцип: к капле сыворотки добавляют петлю чистой культуры м\о. При соответствии АГ х-культуры антителам в известной сыворотке образуются хлопья и жидкость просветляется.

+ реакция: образование хлопьев

Применение: ориентировочная РА, с целью определения антигенного состава х-культуры

4) Реакция преципитации

Исследуемый материал: сыворотка больного - АГ

Диагностический препарат: преципитирующая сыворотка – АТ

Типы: кольцепреципитация по Асколи, встречная иммунодиффузия, радиальная иммунодиффузия, встречный иммуноэлектрофорез

РП по Оухтерлони:

иссл. материал: метриал от больного – АГ

диагн. препарат: преципитирующая сыворотка - АТ

Принцип: в агаре вырезают лунки, в которые вносят ингредиенты реакции. При соответствии АГ и АТ в зоне эквивалентных соотношений образуется линия преципитата

+ реакция линия преципитата

РП по Асколи:

Исследуемый материал: материал от больного – АГ

Диагностический препарат: преципитирующая сыворотка – АТ

Принцип: в пробирку на преципитирующую сыворотку наслаивают экстракт из иссл. материала

+ реакция: появления мутного кольца

Применение: индикация сибиреязвенного АГ

5) РНГА

Серодиагностика

Исследуемый материал: сыворотка – АТ

Диагностический материал: эритроцитарный диагностикум – АГ

Принцип: к каждому разведению сыв-ки прибавляют равное кол-во эритроцитарного диагностикума

Серотипирование

Исследуемый материал: сыворотка – АГ

Диагн. препарат: антительный эритроцитарный диагностикум(иммунодиагностикум) – АТ

Принцип: к последовательным 2хкратным разведениям исследуемого мат-ла добавляют иммунодиагностикум.

+ реакция: зонтик

- реакция: пуговка

Наличие заболевания – превышение титра АТ в 4 раза (диагн. титр = 1\8)

6) РСК

Серодиагностика

Исследуемый материал: парные сыворотки от больного – АТ

Диагностический препарат: сыпнотифозный диагностикум для РСК – АГ

Комплемент – 9 фракций в неактивной форме

Эритроциты барана - АГ

Гемолитическая сыворотка – АТ

Серотипирование

Исследуемый материал: сыворотка от больно – АГ

Диагн. препарат: диагностическая сыворотка – АТ, комплемент – 9 фракций, эритроциты барана – АГ, гемолитическая сыворотка – АТ

+ реакция: задержка гемолиза

- реакция: гемолиз

Диагноз – нарастание титра АТ (дианг. титр = 1\8)

Р. Вассермана

Тип: РСК

Исследуемый материал: сыворотка больного

Диагностический препарат: кардиолипиновый АГ, ультраозвученный трепонемный АГ, комплемент, гемолитическая сыворотка, эритроциты барана

+ реакция: задержка гемолиза

- реакция: гемолиз

РСК с целью раздельного определения IgM и IgG

Тип: РСК

Исследуемый материал: сыворотка крови больного (нативная IgM, G и обработанная меркапэтанолом IgM)

Диагностический препарат: АГ для РСК, комплемент, эритроциты барана - АГ, гемолитическая сыворотка – АТ

Принцип: меркаптэтанол разрушает IgM.Если с обработанной сыв-кой реакция идет в том же титре, то она содержит больше IgG. Если в обработанной сыв-ке титр АТ снизился в 4 раза или более, то она содержит больше IgM

7) РИФ (реакция иммунофлюоресценции )

Серодиагностика (в непрямой 2хэтапной РИФ)

Исследуемый материал: сыворотка больного – АТ

Диагностический препарат: диагностикум из живых штаммов, сыворотка против Ig человека, меченная ФИТЦ

Серотипирование (экспресс-диагностика) в прямой РИФ

Исследуемый материал: материал, содержащий возбудителя – АГ

Диагностический препарат: люминисцирующая сыв-ка против искомого АГ, меченная ФИТЦ, кроличья сыв-ка(АТ), ослиная антикроличья сыв-ка(АТ), комплемент, люм. сыв-ка против комплемента(АТ)

Серотипирование ( экспресс-диагностика) в непрямой РИФ

Исследуемый материал: материал, содержащий возбудителя – АГ

Диагностический препарат: люминисцирующая сыв-ка против искомого АГ, кроличья сыворотка(АТ), ослиная антикроличья сыв-ка(АТ), комплемент, люм. сыв-ка против комплемента(АТ)

Принцип: АТ, соединенные с ФИТЦ, фиксируются на соотв. АГ.Промывают, после этого в люминисцентном микроскопе виден искомый м\о или пораженная клетка, светящиеся на фоне.

8) ИФА(иммуно-ферментный анализ)

Серодиагностика

Исследуемый материал: сыворотка больного – АТ

Диагностический препарат: АГ в твердой фазе(вирусный лизат) – АГ, конъюгат – АГ сферментом, хромогенный субстрат

Принцип: АГ фиксируется на носителе. Вносят сывоторку, добавляют АТ против Ig человека, меченные ферментом (конъюгат) и хромогенный субстрат.

+ реакция: окрашивание содержимого пробирки

Серотипирование (экспресс-диагностика)

Исследуемый материал: сыворотка больного – АГ

Диагностический препарат: АТ в твердой фазе , АТ против искомого АГ с ферментом

Принцип: АТ к искомому АГ фиксируются на носителе, вносят иссл. материал, добавляют конъюгат и хромогенный субстрат.

+ реакция: окрашивание

9) Иммуноблоттинг для диагностики ВИЧ-инфекции

Принцип: разделенный с помощью электрофореза комплекс АГ наносят на полоску из нитроцеллюлозы. АГ фиксируюся в различных участках полоски. Далее исследования проводят по схеме ИФА

10) РИА (радио-иммунный анализ)

Принцип: отличается от ИФА тем, что диагностические сыв-ки метят радиоактивной меткой и результат учитывают при помощи счетчика радиоактивности.

11) Реакция нейтрализации токсина антитоксической сыв-кой

Исследуемый материал: фильтрат продукта – АГ (экзотоксин)

Диагностический препарат: антитоксические сыв-ки – АТ

Принцип: 2м мышам вводят материал экзотоксина, одной ещё и антитоксическую сыв-ку.

+ реакция: животное остается живым

- реакция: животное погибает, тк. сыв-ка не соотв. Экзотоксин

12) РТГА

Тип: р. Нейтрализации вируса

Серодиагностика

Исследуемый материал: парные сыворотки от больного

Диагностический препарат: вирусный диагностикум

Доп. ингредиенты: эритроциты

+пуговка

Серотипирование

Исследуемый материал: вируссодержащая жидкость

Диагностический препарат: противовирусные сыворотки – АТ к вирусам гриппа типа А и В.

Доп. ингредиенты: эритроциты курицы

Принцип: к серийным разведениям диагностических сывороток добавляют вирус в рабочей дозе.

+ реакция пуговка

13) Цветная проба Солка

Принцип: рост культуры клеток в пит. среде сопровождается накоплением кислых продуктов и изменением рН → изменение цвета среды. Если вирус присутствует, то изменения среды не происходит, тк клетки погибают.

14) Бактериоцинотипирование

Исследуемый материал: чистая культура

Диагностический материал: бактериоциногенный штамм

Принцип: на чашку с МПА уколом засевают эталонные бактериоциногенные штаммы. После инкубации в термостате, выросшие м\о убивают парами хлороформа. В чашку заливают растопленный полужидкий МПА с внесенной в него суспензией исследуемой культуры. Стерильные зоны появляются вокруг тех колоний, к бактериоцинам которых чувствительна иссл. культура.

15) Метод стандартных дисков

Принцип: на поверхность плотной питательной среды засевают «газоном» исследуемую культуру. Накладывают диски из фильтрованной бумаги, пропитанные АБ. После инкубации учитыают диаметр зон отсутсвия

16) Метод серийных разведений

Принцип: на чашки с МПА, содержащим возрастающие концентрации антибиотиков, с помощью штампа-репликатора проводят посев испытуемых культур. Результаты учитывают по наличию или отсутствию роста культуры на чашке с определенной концентрацией АБ.

МПК- минимальная подавляющая концентрация

17) Определение концентрации АБ в биосубстратах

Принцип: В пит. агаре, на котором газоном засеян эталонный чувствительный к данному АБ штамм, вырезают лунки. В них вносят исследуемые биосубстраты и определенные разведения АБ. После инкубации измеряют зоны задержки роста тест-штамма вокруг лунок и по калибровочной кривой определяют концентрацию АБ в биосубстрате.

18) Идентификация бактериофага по Отто

Принцип: на пит. среду засевается известная культура в виде стекающей капли, наносится фильтрат фаголизата. При + результате видна стерильная полоса

19) Метод Фюрта

Принцип: В агар вносят фильтрат фаголизата, на поверхность секторально засевают разные культуры. Где роста нет, там подействовал бактериофаг.

20) Титрование бактериофага по Аппельману

Принцип: в ряд пробирок с МПБ вносят индикаторную культуру и по 1 мл соотв. разведения фагосодержащего материала. После инкубации учитывают результат: + лизис культуры (просветление среды)

21) Метод агаровых слоев Грациа

Принцип: в пробирки с растопленным агаром вносят индикаторную культуру и по 1 мл соотв.разведения фагосодержащего материала, перемешивают и выливают на чашки с МПА. После инкубации подсчитывают число негативных колоний на чашках.

22) Фагодифференцировка

Исследуемый материал: чистая культура неизвестная

Диагностический препарат: индикаторный бактериофаг

Принцип: неизвестная культура засевается на МПА. Наносятся капли индикаторных бактериофагов. Происходит лизис соотв. Бактериофагом.

23) Фаготипирование

Исследуемый материал: известная чистая культура

Диагностический препарат: набор типовых бактериофагов

Принцип: исследуемую культуру засевают газоном на МПА Наносят по 1 капле типовых бактериофагов. Учет результатов производят после инкубации по наличию стерильных пятен.

24) ПЦР (полимеразная цепная реакция)

Принцип: иссл. материал подвергается специальной обработке, при которой происходит лизис клеток с выходом ДНК. Чась материала переносится в пробирку, содержащую смесь мононуклеотидов, ДНК-полимеразу и прймер.Циклическое изменение температуры позволяет осуществить репликацию определенного гена возбудителя – амплификация