Определение содержания витамина Р
В растительной продукции
Вещества, обладающие Р-витаминной активностью, впервые были выделены из лимона, поэтому получили название цитрина. Действие этих веществ на биохимические процессы в организме тесно связано с аскорбино-вой кислотой. К комплексу витамина Р относят флавоноидные соединения, относящиеся к катехинам, флаванонам и флавонолам. Наиболее высокой Р-витаминной активностью обладают катехины, относящиеся к группе восстановленных флавоноидных соединений.
 |
Катехины благодаря наличию двух асимметрических атомов углерода в составе кислородсодержащей циклической группировки присутствуют в растениях в виде четырёх пространственных изомеров, содержащих в качестве заместителей гидроксильные группы. Строение катехинов можно представить следующей формулой:
(R₁ – Н, R₂ – Н или ОН)
В растениях наиболее распространены катехин (правовращающий) и эпикатехин (левовращающий), у которых радикалы R1 и R2 замещены на водород. В меньшем количестве содержатся галлокатехин (правовращаю-щий) и эпигаллокатехин (левовращающий), у них радикал R1 замещается на Н, R2 – на гидроксил. Значительная часть катехинов связывается в виде эфиров с галловой кислотой, которая взаимодействует с гидроксилом циклической кислородсодержащей группировки (R1 замещается на остаток галловой кислоты).
Довольно высокой Р-витаминной активностью обладают также флаво-ноидные соединения, содержащиеся в растениях в виде гликозидов, – гесперидин и рутин. Молекулы гесперидина образованы из остатков a-L-рамнозы, b-D-глюкозы и метоксифлаванона – гесперетина, соединенных О-гликозидными связями:
Рутин представляет собой a-L-рамнозил-b-D-глюкозилпроизводное флавонола кверцетина:
Вещества, относящиеся к комплексу витамина Р, принимают участие в окислительно-восстановительных реакциях. Благодаря их легкой окисля-емости они предохраняют от окисления другие соединения. Вследствие недо-статка витамина Р понижается упругость кровеносных сосудов и проницае-мость капилляров, что является причиной точечных кровоизлияний. Суточ-ная потребность человека в витамине Р – 25-50 мг.
Много этого витамина содержится в растительных продуктах, богатых аскорбиновой кислотой – чёрной смородине, сладком перце, плодах цитрусо-вых. Однако известны растительные продукты с низким содержанием аскорбиновой кислоты, но богатые цитрином – чайный лист, некоторые сор-та яблок, зерно гречихи. При хранении и переработке плодоовощной продук-ции потери веществ, обладающих Р-витаминной активностью, существенно ниже, чем аскорбиновой кислоты.
Содержание витамина Р в некоторых растительных продуктах находится в следующих пределах, мг%:
| Яблоки | 20-45 | Капуста и корнеплоды | 30-50 |
| Баклажаны, красный перец, листовые овощи | 50-250 | Вишня | 100-250 |
| Черная смородина | до 1000 | Клюква | 200-300 |
Катехины содержатся во многих плодах и ягодах – яблоках, грушах, айве, персиках, абрикосах, вишне, землянике, смородине, малине, бруснике и др. Особенно много катехинов накапливается в молодых побегах чайного растения (до 30% от сухой массы).
Гесперидина очень много содержится в плодах цитрусовых – лимонах, апельсинах, мандаринах, причём наиболее богата гесперидином кожура цитрусовых плодов. Рутин в большом количестве найден в коре дуба, чайном листе, листьях яблони, листьях и плодах гречихи, хмеле, ягодах винограда. По витаминной активности гесперидин и рутин уступают катехинам.
Принцип метода.Определение флавоноидных веществ, обладающих Р-витаминной активностью, основано на окислении их перманганатом калия с использованием в качестве индикатора индигокармина, который после окисления флавоноидов даёт с перманганатом калия жёлтое окрашивание.
Оборудование.Весы лабораторные, фарфоровые ступки с пестиками диаметром 6-8 см; колбы конические термостойкие на 150 мл; воронки диаметром 6-8 см; дозирующие пипетки на 10 мл; мерные цилиндры на 10 мл; фильтры бумажные; мерные колбы на 1 л.
Реактивы.Дистиллированная вода; перманганат калия (в виде фиксанала); индигокармин; концентрированная серная кислота.
Приготовление растворов.0,01 М раствор перманганата калия: в мерной колбе на 1 л готовится из фиксанала 0,1 М водный раствор перманганата калия, из которого при разбавлении дистиллированной водой получают 0,01 М раствор.
Раствор индигокармина: 1 г индигокармина помещают в стакан из термостойкого стекла и растворяют в 50 мл концентрированной серной кислоты, затем полученный раствор количественно переносят в мерную колбу на 1 л, заполненную на 0,7 объёма дистиллированной водой; после перемешивания и охлаждения объём раствора в колбе доводят до метки дистиллированной водой, перемешивают и фильтруют через бумажный фильтр.
Ход определения.Навеску растительного материала 1 г (вегетативная масса растений, овощи, плоды, ягоды) растирают в фарфоровой ступке с небольшим количеством кварцевого песка до получения однородной массы и количественно переносят в коническую колбу из термостойкого стекла с использованием 50 мл дистиллированной воды. Полученную смесь кипятят в течение 5 минут, охлаждают и фильтруют через бумажный фильтр в другую коническую колбу.
Для титрования берётся 10 мл фильтрата, к которому в конической колбе на 150 мл добавляют 10 мл дистиллированной воды и 5 капель раствора индигокармина, дающего синее окрашивание титруемого раствора. Полученный раствор титруют из бюретки 0,01 М раствором перманганата калия до появления устойчивой жёлтой окраски, не исчезающей в течение 30 секунд.
Обработка и оценка результатов.Содержание витамина Р вычисляют по следующей формуле:
0,0064 ∙ V ∙ 50 ∙ 100
Х = ¾¾¾¾¾¾¾¾¾ ,
10 ∙ Н
где Х – содержание витамина Р в пересчёте на рутин, мг%;
0,0064 – количество мг флавоноидов в пересчёте на рутин, которое окисляется при добавлении 1 мл 0,01 М раствора перманганата калия;
V – объём 0,01 М раствора перманганата калия, затраченный на титрование, мл;
50 – общий объём раствора витамина Р, полученного из растительной пробы, мл;
100 – коэффициент пересчёта содержания витамина Р в мг%;
10 – объём раствора витамина Р, взятый для титрования раствором перманганата калия, мл;
Н – навеска растительного материала, г.
Полученный результат сравнивают с литературными данными и результатами анализа других образцов, представляющих собой разные растительные продукты. На основе выполненного анализа даётся оценка качества данного растительного продукта по содержанию витамина Р.
Контрольные вопросы
1. Какие флавоноидные соединения относятся к комплексу витамина Р?
2. Какова биологическая роль витамина Р?
3. В каких растительных продуктах содержится много катехинов?
4. Какие растительные продукты богаты гесперидином и рутином?
5. В чём состоят особенности метода определения в растительных продуктах витамина Р?
6. По какой методике проводится выделение из растительных проб флавоноидных веществ, обладающих Р-витаминной активностью, и титрование витаминного экстракта раствором перманганата калия?
7. Как выполняется расчёт содержания витамина Р в растительной продукции?
Словарь терминов
Активаторы ферментов –вещества или ионы, повышающие катали-тическую активность ферментов.
Активность ферментов –способность ферментных молекул осуществлять каталитическое действие.
Активный (каталитический) центр фермента– участок молекулы фермента, с которым взаимодействует субстрат в ходе ферментативной реакции.
Алкалоиды –продукты обмена веществ большой группы раститель-ных организмов, обладающие сильным физиологическим действием на орга-низмы человека и животных и включающие в своём составе азотистые гетероциклические, а в отдельных случаях ароматические (горденин, эфедрин) и стероидные (соланидин, соласодин) группировки.
Альбумины –водорастворимые белки.
Амилазы – ферменты, катализирующие гидролиз гликозидных связей в молекулах крахмала.
Амилоза –полисахарид крахмала, имеющий неразветвлённую цепь моносахаридных остатков α-D-глюкозы, соединённых α(1→4)-связями.
Амилопектин – полисахарид крахмала, имеющий разветвлённую цепь моносахаридных остатков α-D-глюкозы, которые в линейной цепи соединя-ются α(1→4)-связями, а в точках ветвления α(1→6)-связями.
Аминопептидазы –протеолитические ферменты, катализирующие гидролитическое отщепление аминокислотных остатков от N-концов полипептидов.
Аскорбиновая кислота(витамин С) –водорастворимый витамин, проявляющий биологическую активность в виде L-формы и участвующий в реакциях гидроксилирования, в ходе которых происходит включение кислорода воздуха в различные органические субстраты. Витамин С не синтезируется в организме человека и поэтому должен поступать в организм с пищей. При его недостатке наблюдается нарушения обмена веществ, связанные с ослаблением реакций гидроксилирования, которые вызывают повышенную утомляемость организма, головную боль, кровоизлияния и расшатывание зубов. Длительное отсутствие в пище человека аскорбиновой кислоты приводит к заболеванию цингой.
Аскорбиногены –химические вещества, в которых аскорбиновая кислота содержится в связанной форме и может высвобождаться при их гидролизе.
Ацилглицерины –сложные эфиры глицерина и жирных кислот.
Белки –биополимеры, молекулы которых образуются из остатков протеиногенных аминокислот, соединённых пептидными связями.
Белковые ингибиторы ферментов – белковые молекулы, способные образовывать с ферментами неактивные комплексы.
Биологическая ценность белков –показатель, выражающий сбалансированность белков по содержанию незаменимых аминокислот.
Вещества вторичного происхождения (вторичные метаболиты) –органические вещества в основном растительного происхождения, которые синтезируются в специальных ответвлениях биохимических путей, не подвергаются интенсивным превращениям, но определяют специфику обмена веществ у определённых групп растений.
Витамины –биологически активные вещества, строго необходимые для жизнедеятельности организмов в небольших количествах. Биологическая активность витаминов заключается в том, что они входят в качестве активных группировок в состав ферментов.
Газоудерживающая способность теста –способность хлебопекарного теста удерживать диоксид углерода, выделяющий при спиртовом брожении, за счёт упруго-эластичных свойств клейковины и обеспечивать нормальную пористость хлебного мякиша.
Гемы – простетические группы, включающие железо-порфириновые группировки.
Гесперидин –флавоноидный гликозид, обладающий Р-витаминной активностью и включающий в качестве агликона флаванон гесперетин, а в составе углеводной группировки дисахарид, который образован из остатков α-L-рамнозы и β-D-глюкозы, соединённых α(1→6)-связью, и присоединён О-гликозидной связью к 7 углеродному атому гесперетина.
Гидролазы – ферменты, катализирующие расщепление химических связей с участием молекул воды.
Гликозидазы – ферменты, катализирующие гидролиз гликозидных связей в молекулах гликозидов, олиго- и полисахаридов.
Гликозиды –производные моно- и олигосахаридов, образующиеся в результате присоединения к полуацетальному гидроксилу вещества неуглеводной природы (агликона).
Глютатион –биологически активный пептид, образующийся из остатков аминокислот глутаминовой кислоты, цистеина и глицина.
Дегидроаскорбиновая кислота –продукт окисления аскорбиновой кислоты.
Дегидрогеназы – окислительно-восстановительные ферменты, катализирующие отщепление водорода от органических субстратов.
Декстрины –промежуточные продукты гидролиза крахмала под действием амилолитических ферментов.
Денатурация белков –необратимое изменение пространственной структуры белковых молекул, которое сопровождается потерей их нативных свойств.
Дипептидазы –протеолитические ферменты, катализирующие гидро-лиз пептидных связей в молекулах дипептидов.
Дубильные вещества –полимерные фенольные соединения, дающие при гидролизе мономерные вещества фенольной и нефенольной природы (галловую и эллаговую кислоты, моносахариды, катехины и лейкоанто-цианы, хинную кислоту и др.).
Жиры –запасные липиды, представляющие собой смесь сложных эфиров глицерина и жирных кислот.
Зимогены (проферменты) – белковые предшественники при синтезе ферментов, которые превращаются в каталитически активные молекулы под воздействием специфических протеаз, восстановителей дисульфидных связей или в результате ковалентных модификаций.
Изоферменты –множественные молекулярные формы фермента, которые катализируют одну и ту же биохимическую реакцию, обладают одним типом субстратной специфичности, но различаются по первичной структуре и физико-химическим свойствам их белковых молекул.
Ингибиторы ферментов – вещества или ионы, подавляющие каталитическую активность ферментов.
Индуцибельные ферменты –ферментные белки, синтез которых осуществляется (индуцируется) при поступлении в организм субстратов данных ферментов.
Йодное число жира –химический показатель, выражающий содержание в ацилглицеринах жира остатков ненасыщенных жирных кислот.
Карбоксипептидазы –протеолитические ферменты, катализирующие гидролитическое отщепление аминокислотных остатков от С-концов полипептидов.
Каротиноиды –жирорастворимые пигменты. включающие каротины и их кислородсодержащие производные – ксантофиллы.
Каротины –тетратерпены, входящие в состав пигментных комплексов фотосистем растений и водорослей, являющиеся биохимическими предшест-венниками (провитаминами) витамина А₁.
Катал –единица активности ферментов. За 1 катал принимается каталитическая активность, способная катализировать превращение 1 моля субстрата за 1 секунду в заданной системе определения активности фермента.
Каталаза –фермент, катализирующий разложение пероксида водорода на кислород и воду.
Катехины –флавоноидные соединения, содержащиеся в растениях в виде четырёх пространственных изомеров (катехина, галлокатехина, эпика-техина, эпигаллокатехина) и обладающие Р-витаминной активностью.
Кислотное число жира –химический показатель, выражающий содержание в жире свободных жирных кислот.
Клейковина –белковый сгусток, образующийся при отмывании водой замешанного из измельчённого зерна или муки теста.
Кодоны генетического кода –последовательности из трёх нуклеотидных остатков в структуре генов, кодирующие остатки протеиногенных аминокислот в белковых полипептидах.
Коферменты –активные группировки в составе каталитических центров двухкомпонентных ферментов.
Крахмал –запасной полисахарид растений, молекулы которого образуются из остатков α-D-глюкозы.
Липазы –ферменты, катализирующие гидролиз сложноэфирных связей ацилглицеринов жира с образованием глицерина и свободных жирных кислот.
Липопротеиды –разновидности белков, содержащие в своём составе липидные группировки.
Липиды –органические вещества, включающие жиры, фосфолипиды, гликолипиды, стероидные липиды, воски и их производные.
Макроэргические соединения –специализированные формы органи-ческих веществ, имеющие сильно поляризованные связи, при гидролизе которых происходит большое изменение свободной энергии (при стандарт-ных условиях более 30 кДж/моль).
Меланины –химические вещества, образующиеся в свежих растительных продуктах при окислении ароматических аминокислот и фенольных соединений и обусловливающие потемнение этих продуктов.
Меланоидины –химические вещества, образующиеся в растительных продуктах при взаимодействии аминокислот с редуцирующими сахарами и вызывающие потемнение этих продуктов.
Молярная активность фермента – каталитическая активность в расчёте на 1 моль фермента.
Моносахариды –органические вещества, представляющие собой линейные или замкнутые цепочки из 3-7 углеродных атомов и имеющие гидроксильные, а также альдегидные или кетонные группы.
Мультиферментные комплексы – объединённые в единый комплекс ферментные системы, катализирующие последовательные превращения промежуточных продуктов в процессе синтеза различных веществ в организме.
Нативная конформация белковой молекулы – термодинамически наиболее устойчивая в физиологической среде пространственная структура белковой молекулы, обеспечивающая выполнение свойственной данному белку биологической функции.
Незаменимые аминокислоты –аминокислоты, которые не синтезируются в организмах человека и животных, но необходимы для образования белковых молекул в этих организмах.
Незаменимые жирные кислоты –полиненасыщенные жирные кислоты, имеющие две или три двойные связи и не синтезирующиеся в организмах человека и животных.
Нитратредуктаза –фермент растений и микроорганизмов, катализиру-ющий восстановление нитратов в нитриты.
Нитритредуктаза –фермент растений и микроорганизмов, катализи-рующий восстановление нитритов в аммонийную форму азота.
Оксигеназы –ферменты, катализирующие присоединение к различным субстратам кислорода.
Олигосахариды – органические вещества, включающие остатки двух или нескольких моносахаридов.
Пептидазы – ферменты, катализирующие гидролитическое расщепле-ние пептидных связей в молекулах пептидов с образованием аминокислот.
Пероксидазы– ферменты, катализирующие реакции окисления различных субстратов с участием пероксида водорода.
Полисахариды – линейные или разветвлённые полимеры, включаю-щие остатки многих моносахаридов (от 10 до 10 тыс.)
Прогоркание жиров –химический процесс распада и окисления жиров, в ходе которого образуются продукты окисления в виде альдегидов и кетонов, приводящие к порче жира.
Простетическая группа – коферментная группировка, прочно связанная с ферментным белком.
Протеазы (протеолитические ферменты) – ферменты, катализирую-щие гидролитическое расщепление пептидных связей в молекулах белков.
Протеиды –белки, содержащие, кроме аминокислотных остатков, другие группировки не аминокислотной природы.
Протеиназы – ферменты, катализирующие гидролитическое расщеп-ление пептидных связей в молекулах белков с образованием пептидов и аминокислот.
Протеиногенные аминокислоты –аминокислоты, участвующие в синтезе белков; остатки этих аминокислот в структуре белков кодируются кодонами генетического кода.
Протеины –белки, молекулы которых включают только аминокислот-ные остатки, соединённые пептидными связями, и не содержат других группировок не аминокислотной природы.
Растительные масла – растительные жиры, имеющие жидкую консистенцию вследствие того, что их ацилглицерины образуются преимущественно с участием ненасыщенных жирных кислот.
Редуцирующие сахара –моносахариды и олигосахариды, имеющие свободные альдегидные или кетонные группы и способные вступать в окислительно-восстановительные реакции.
Рутин –флавоноидный гликозид, обладающий Р-витаминной активностью и включающий в качестве агликона флавонол кверцетин, а в составе углеводной группировки дисахарид, который образован из остатков α-L-рамнозы и β-D-глюкозы, соединённых α(1→6)-связью, и присоединён О-гликозидной связью к 3 углеродному атому кверцетина.
Самосогревание зерна –накопление тепла во влажной зерновой массе в результате усиления процесса дыхания.
Сахара – растворимые в воде моносахариды и олигосахариды, имеющие сладкий вкус.
Сахароза –дисахарид, молекулы которого образуются из остатков α-D-глюкозы и β-D-фруктозы.
Сивушные масла –побочные продукты спиртового брожения, которые представляют собой смесь спиртов (амилового, изоамилового, изобутилового и др.), образующихся в результате окислительного дезаминирования аминокислот и придающие пищевому спирту, вину и пиву неприятный вкус и запах.
Солод –высушенное проросшее зерно, которое используется как источник активных амилолитических ферментов.
Стероидные липиды –класс липидов, являющихся производными циклопентанопергидрофенантрена.
Субстраты ферментов –химические вещества, которые подвергаются превращениям под действием ферментов.
Сырой протеин –показатель химического состава растительных продуктов, выражающий содержание белков и небелковых азотистых веществ, определяемых по количеству общего азота.
Сырой жир –показатель химического состава растительных продуктов, выражающий содержание жира и других несвязанных форм липидов, растворяющихся в диэтиловом эфире.
Терпены –органические вещества в основном растительного происхождения, построенные из остатков изопрена.
Тиоловые протеиназы –протеолитические ферменты, имеющие в активном центре тиоловые группировки (HS-группы).
Токоферолы –биологически активные вещества, относящиеся к комплексу витамина Е и включающие в своём составе группировки гидрохинона и фитола.
Углеводы – органические вещества, включающие моносахариды, олигосахариды, полисахариды и их производные.
Удельная активность фермента – каталитическая активность фермента в расчёте на единицу массы ферментного препарата.
Фенольные соединения –органические вещества, содержащие ароматические группировки, в которых один или больше атомов водорода замещены на гидроксильные группы.
Ферменты –специализированные формы белковых молекул, обладающие каталитической активностью.
Флавоноидные соединения –полициклические соединения, которые являются производными флавана.
Фосфолипазы –гидролитические ферменты, катализирующие гидро-лиз сложноэфирных связей в молекулах фосфолипидов.
Фосфолипиды –липиды, включающие остатки глицерина, жирных кислот, ортофосфорной кислоты и специфических азотистых или других соединений.
Цитрин (витамин Р) –комплекс флавоноидных соединений (катехи-ны, гесперидин, рутин), обладающих Р-витаминной активностью.
Эфирные масла – легколетучие жидкости, обусловливающие аромат многих растительных продуктов, характерный вкус и запах овощей, плодов и ягод. В состав эфирных масел входят представители монотерпенов и сесквитерпенов и их кислородсодержащие производные, а также нетерпеновые спирты, альдегиды, некоторые карбоновые кислоты и углеводороды, сложные эфиры, кетоны.
Список сокращений
КоА – кофермент А
НАД – никотинамидадениндинуклеотид
НАДФ – никотинамидадениндинуклеотидфосфат
ФАД – флавинадениндинуклеотид
ФМН – флавинмононуклеотид
ТХУ – трихлоруксусная кислота
ДОФА – диоксифенилаланин
Приложения
Атомные массы некоторых химических элементов
| Название элемента | Символ | Атомная Масса | Название элемента | Символ | Атомная масса |
| Азот Алюминий Аргон Барий Бор Бром Водород Вольфрам Гелий Железо Золото Йод Кадмий Калий Кальций Кислород Кобальт Кремний Лантан Литий Титан Углерод Уран Фосфор | N Al Ar Ba B Br H W He Fe Au I Cd K Ca O Co Si La Li Ti C U P | 14,01 26,98 39,95 137,34 10,81 79,91 1,01 183,85 4,00 55,85 196,97 126,90 112,40 39,10 40,08 16,00 58,93 28,09 138,91 6,94 47,90 12,01 238,03 30,97 | Магний Марганец Медь Молибден Мышьяк Натрий Никель Олово Палладий Платина Радий Ртуть Рубидий Свинец Селен Сера Серебро Стронций Сурьма Фтор Хлор Хром Цезий Цинк | Mg Mn Cu Mo As Na Ni Sn Pd Pt Ra Hg Rb Pb Se S Ag Sr Sb F Cl Cr Cs Zn | 24,31 54,94 63,54 95,94 74,92 22,99 58,71 118,69 106,40 195,09 226,00 200,59 85,47 207,19 78,96 32,06 107,87 87,62 121,75 19,00 35,45 52,00 132,91 65,37 |
Буферные растворы
0,2 М ацетатный буфер (рН=3,6-5,8)
0,2 М раствор СН₃СООNa∙3Н₂О: в 1 л дистиллированной воды растворяют 27,22 г СН₃СООNa∙3Н₂О; 0,2 М раствор уксусной кислоты (СН₃СООН): в 1 л дистиллированной воды растворяют 11,49 мл концентрированной уксусной кислоты. Для получения буферных растворов с заданными значениями рН смешивают растворы СН₃СООNa∙3Н₂О и СН₃СООН в указанных в таблице соотношениях.
| рН при 18°С | 0,2 М раствор СН₃СООNa, мл | 0,2 М раствор СН₃СООН, Мл | рН при 18°С | 0,2 М раствор СН₃СООNa, мл | 0,2 М раствор СН₃СООН, мл |
| 3,6 | 4,8 | ||||
| 3,8 | 5,0 | ||||
| 4,0 | 5,2 | ||||
| 4,2 | 5,4 | ||||
| 4,4 | 5,6 | ||||
| 4,6 | 5,8 |
0,05 М фосфатный буфер (рН = 5,8-8,0)
0,05 М раствор Na₂HPO₄: в 1 л дистиллированной воды растворяют 17,911 г Na₂HPO₄∙12Н₂О; 0,05 М раствор NaН₂РО₄: в 1 л дистиллированной воды растворяют 7,802 г NaН₂РО₄∙2Н₂О. Для получения буферных растворов с заданными значениями рН смешивают растворы Na₂HPO₄ и NaН₂РО₄ в указанных в таблице соотношениях.
| рН | 0,05 М раствор Na₂HPO₄, мл | 0,05 М раствор NaН₂РО₄, мл | рН | 0,05 М раствор Na₂HPO₄, мл | 0,05 М раствор NaН₂РО₄, мл |
| 5,8 | 7,0 | ||||
| 6,0 | 7,2 | ||||
| 6,2 | 7,4 | ||||
| 6,4 | 7,6 | ||||
| 6,6 | 7,8 | ||||
| 6,8 | 8,0 |
1/15 М фосфатный буфер (рН = 4,8-8,0)
1/15 М раствор Na₂HPO₄: в 1 л дистиллированной воды растворяют 11,866 г Na₂HPO₄∙2Н₂О; 1/15 М раствор КН₂РО₄: в 1 л дистиллированной воды растворяют 9,073 г КН₂РО₄. Для получения буферных растворов с заданными значениями рН смешивают растворы Na₂HPO₄ и КН₂РО₄ в указанных в таблице соотношениях.
| рН | 1/15 М раствор Na₂HPO₄, мл | 1/15 М раствор КН₂РО₄, мл | рН | 1/15 М раствор Na₂HPO₄, мл | 1/15 М раствор КН₂РО₄, мл |
| 4,8 | 3,5 | 996,5 | 6,6 | ||
| 5,0 | 9,5 | 990,5 | 6,8 | ||
| 5,2 | 7,0 | ||||
| 5,4 | 7,2 | ||||
| 5,6 | 7,4 | ||||
| 5,8 | 7,6 | ||||
| 6,0 | 7,8 | ||||
| 6,2 | 8,0 |
0,05 М фосфатный буфер (рН = 5,8-8,0)
0,2 М раствор NaОH: в 1 л дистиллированной воды растворяют 8 г NaОH; 0,2 М раствор КН₂РО₄: в 1 л дистиллированной воды растворяют 27,218 г КН₂РО₄. Для получения буферных растворов с заданными значениями рН смешивают 50 мл раствора 0,2 М раствора КН₂РО₄ с соответствующим объёмом 0,2 М раствора NaОН, указанным в таблице, и доводят объём буферной смеси до 200 мл дистиллированной водой (свободной от диоксида углерода).
| рН | 0,2 М раствор NaОH, мл | 0,2 М раствор КН₂РО₄, мл | рН | 0,2 М раствор NaОH, мл | 0,2 М раствор КН₂РО₄, мл |
| 5,8 | 3,6 | 7,0 | 29,1 | ||
| 6,0 | 5,6 | 7,2 | 34,7 | ||
| 6,2 | 8,1 | 7,4 | 39,1 | ||
| 6,4 | 11,6 | 7,6 | 42,4 | ||
| 6,6 | 16,4 | 7,8 | 44,5 | ||
| 6,8 | 22,4 | 8,0 | 46,1 |
Важнейшие кислотно-основные индикаторы
| Наименования индикаторов | Изменение цвета | Интервал рН перехода окраски | Рабочие растворы | |
| кислая среда | щелочная среда | |||
| Фенолфталеин | бесцветный | красный | 8,0-9,6 | 0,1% в 50%-ном этиловом спирте |
| Тимолфталеин | бесцветный | Синий | 9,3-10,5 | 0,1% в 80%-ном этиловом спирте |
| Тимоловый синий | жёлтый | Синий | 8,0-9,6 | 0,1% водный р-р |
| Бромтимоловый синий | жёлтый | Синий | 6,0-7,6 | 0,1% водный р-р |
| Метиловый красный | красный | жёлтый | 4,2-6,2 | 0,2% водный р-р |
| Метиловый оранжевый | красный | оранжевый | 3,1-4,4 | 0,1% водный р-р |
Объёмы концентрированных кислот для приготовления
процентных растворов этих кислот, мл/л
| Кислоты | Удельная плотность при 15˚С, г/см³ | Массовая доля исходного вещества, % | 25 % | 20 % | 10% | 5 % | 2 % | 1 % |
| НСl | 1,19 | 37,23 | 634,8 | 496,8 | 236,4 | 115,4 | 45,5 | 22,6 |
| Н2SO4 | 1,84 | 95,60 | 167,7 | 129,9 | 60,6 | 29,3 | 11,5 | 5,6 |
| CH3COOH | 1,05 | 99,50 | 247,8 | 196,7 | 97,1 | 48,2 | 19,2 | 9,5 |
Содержание
Введение …………………………………………………………………. 3
Техника безопасности при выполнении лабораторных
работ по биохимии ……………………………………………................. 4
Определение сахаров в растительной продукции
фенольным методом …………………………………………………….. 6
Определение кислотного числа растительных жиров…………………16
Определение йодного числа растительных жиров по Ганусу ………. 21
Определение свободных аминокислот в растительной
продукции методом формольного титрования ………………………. 27
Определение белков биуретовым методом …………………………… 36
Спектрофотометрический метод определения белков ……………….. 42
Определение активности каталазы по А.Н. Баху и А.И. Опарину……. 46
Определение активности амилаз в прорастающих зерновках
злаковых культур ……………………………….………………………. 52
Определение активности липаз в семенах масличных
и злаковых культур ………………………………………………………59
Определение активности нитратредуктазы в растительной
продукции …………………………………………………………………63
Определение активности протеолитических ферментов ……………… 70
Определение активности пероксидаз в растительной продукции …… 78
Определение аскорбиновой кислоты в растительной продукции
йодатным методом……………………………………..……………….. 82
Определение содержания каротина в растительной продукции
колориметрическим методом …………………………………………… 89
Определение содержания витамина Р в растительной продукции …… 94
Словарь терминов………………………………………………….......... ..99
Список сокращений ………………………………………………………108
Приложения ………………………………………………………………109
Библиографический список ……………………………………………...113