Технология селекционного процесса
Техника скрещивания и получения семян. Наибольший процент удачи дают скрещивания при обильном количестве пыльцы, которую необходимо по возможности заготовить перед опылением или заранее. Для этого цветки с созревшими пыльниками собирают утром, подсушивают в течение 5—6 ч, затем пыльцу из них ссыпают на черное стекло или глянцевую бумагу, постукивая препаровальной иглой по колонке пыльников. При большом объеме скрещиваний для выделения пыльцы используют механические вибраторы (например, электрозвонок). Пыльцу ссыпают в пробирку, закрывают пробкой, этикетируют и хранят в холодильнике при 3—6°С.
В жаркую погоду опыление проводят в утренние и вечерние часы, в пасмурную — в любое время суток. Вечером процент удачных скрещиваний возрастает в 2 раза по сравнению с утренними часами.
Скрещивание с предварительной кастрацией пыльников применяют при генетических исследованиях, изоляцию кастрированных цветков — при работе с дикими видами. В практической селекции опыление проводят без кастрации и изоляции полураскрытых цветков, в день их раскрытия и на следующий день. В соцветии оставляют пять—семь цветков. Опыляют по 50— 100 цветков каждой комбинации несколькими способами: с помощью ученического пера, окуная рыльце пестика в пыльцу, с помощью стеклянной трубки или отрезка гусиного пера с поршнем внутри для выталкивания пыльцы
Для увеличения процента завязывания ягод используют метод декапитации стеблей, состоящий в следующем: в поле срезают верхушки стеблей высотой 50—70 см с цветоносами, помещают их в проточную воду или питательную смесь в специальном домике (затененном, но хорошо освещенном, обтянутом марлей для создания повышенной влажности) и опыляют. На завязавшиеся ягоды, чтобы не потерять их, надевают марлевый мешочек, туда же кладут этикетку с номером комбинации. Дозаривают ягоды в помещении при 10—15 °С и влажности 50— 50%, затем семена извлекают вручную, отмывают, подсушивают и ссыпают в пакеты.
Все результаты скрещивания заносят в специальный журнал-, где отмечают порядковый номер, комбинацию скрещивания, число опыленных цветков, завязавшихся ягод, дату, место скрещивания (поле, марлевая теплица, декапитационный домик), время (утро, вечер). На этикетке, которую привязывают к цветоносу, пишут только номер скрещивания и число опыленных цветков.
Выращивание сеянцев. Селекционные учреждения выращивают ежегодно большое количество сеянцев (40—45 тыс.). В связи с этим часть семян высевают уже в зимнее время в специально подготовленные торфоперегнойные кубики размером IXlXlсМ либо наклеивают на фильтровальную или другую тонкую бумагу на расстоянии 0,7 см в ряду и 4 см между рядами. Все образцы соответствующим образом этикетируют по комбинациям и хранят до весны при температуре 3—5°С.
Весной кубики переносят в теплицу, увлажняют и через 10 дней вместе с растениями пересаживают в обычные торфоперегнойные кубики размером 7X7X7 см (при выращивании в поле) или пластмассовые горшочки (при горшечной культуре).
Бумагу с наклеенными семенами весной укладывают в кювету с увлажненной смесью земли и торфа, сверху присыпая слоем торфа 0,3— 0,5 см.
Большую часть семян высевают в третьей декаде апреля в посевные ящики или пластмассовые кюветы с почвой на глубину 0,5 см. Рассаду сеянцев для полевой культуры пикируют в торфоперегнойные кубики 7x7x7 см, затем высаживают в поле. -
Оптимальный срок высадки рассады в поле — перед появлением у них пяти—семи настоящих листьев (через 45—55 дней после посева). Посадку проводят рассадопосадочной машиной по схеме 70X70 см с поливом. За сеянцами ведут соответствующий уход (рыхление, уничтожение сорняков, окучивание и т. д.).
Схема селекционного процесса. Она предусматривает использование имеющеюся и создание нового исходного материала, проведение оценок и отбор лучших родительских форм, сеянцев, гибридов, клонов в питомниках
Питомник родительских форм. Здесь в горшечной культуре выращивают дикие и культурные виды картофеля в поле или теплице, селекционные и местные сорта, лучшие гибриды. В ноле родительские формы высаживают с площадью питания 70x70 или 70x35 см по 20—40 клубней каждой формы. В летней пленочно-марлевой теплице размещают 100— I 10 образцов по 10 растений каждого в рядке. В теплице достаточно влажно, растения там вытягиваются, их подвязывают к кольям. Обязательно проводят прочистку от больных растений и примесей. В питомнике родительских форм выполняют все скрещивания. В теплице процент завязывания ягод выше, чем в поле.
Питомник сеянцев первого года. В нем выращивают сеянцы из семян. Каждый сеянец изучают отдельно. Ведут негативный отбор. Весной перед пикировкой сеянцы оценивают на полевую устойчивость к фитофторе путем массового заражения и отбора невосприимчивых форм. В период выкопки клубней проводят их браковку по следующим признакам: длинные столоны, синяя окраска клубней, поражение фитофторой и паршой. Лучшие кусты иногда отбирают полностью или от всех берут по одному клубню, плохие бракуют. Отобранные гибриды поступают в следующий питомник.
Питомник одноклубневок. Каждый гибрид здесь представлен одним клубнем, их высаживают по комбинациям ярусами по 10 в рядке. В период вегетации проводят фенологические наблюдения (всходы, цветение, отмирание ботвы), учет поражения листьев болезнями. Гибриды оценивают по типу куста, форме, окраске кожуры и мякоти клубня, глубине глазков, числу клубней, компактности гнезда, пораженности клубней болезнями. От сомнительных гибридов отбирают по одному клубню для повторного испытания в этом питомнике, а лучшие поступают в питомник гибридов второго года. Бракуют до 90 % образцов.
Питомник гибридов второго года (клоны первого года). Гибриды высаживают однорядковыми делянками с числом клубней, кратным 5 (10, 15 и т. д. в зависимости от наличия материала). Через каждые 20—50 гибридов размещают делянки стандартных сортов. К оценкам, проводимым в предыдущем питомнике, добавляют следующие: урожайность, скороспелость (выкапывают по два куста через 60— S5 дней после посадки), содержание крахмала, размер клубня. .Бракуют до 70 % гибридов.
Питомник предварительного испытания. Гибриды высаживают одно-двухрядковыми делянками по 60— 180 клубней в одно-трехкратном повторении.
Гибриды и стандартные сорта располагают по группам спелости. Учеты и наблюдения те же, что и в предыдущем питомнике. Дополнительно оценивают гибриды по товарности клубней, их столовым качествам (вкус, потемнение мякоти), содержанию сырого протеина {-*при селекции на этот признак), устойчивости ботвы к фитофторе методом искусственного заражения, устойчивости к раку, нематоде.
П игом н и к о с п о в п о г о и спит а н и я. Испытание проводят 1—2 года. Гибриды высаживают на одно-четырехрядко- вых делянках по 30—60 клубней в рядке в четырехкратном повторении. Стандартные сорта и гибриды размещают по группам спелости через 8—10 номеров. Наблюдения и учеты те же, что и в предыдущем питомнике. Гибриды дополнительно оценивают по полевой устойчивости листьев и клубней к фитофто- розу (лабораторным методом, при развитии болезни до размера эпифитотин — в поле), через 2 года дают среднюю оценку степени поражения. Материал из этого питомника поступает в конкурсное сортоиспытание, питомник селекционного размножения, экологическое и динамическое испытания.
Конкурсное испытание. Перспективный селекционный материал испытывается в течение 3 лет по методике государственного сортоиспытания. Делянки четырехрядковые по 50 клубней в рядке в четырехкратном повторении (всего 800 клубней). Семенной материал для конкурсного испытания берут в течение двух следующих лет в питомнике селекционного размножения. Повторяют учеты и наблюдения, проводимые в питомнике основного испытания, кроме оценки на ракоустойчи- вость. Дополнительно гибриды оценивают на фитофтороустой- чивость на инфекционном фоне (на Сахалинском опорном пункте), в лабораторных условиях определяют Д'-гепы (разовое определение, при сомнительной реакции — повторное), определяют устойчивость клубней к механическим повреждениям, их лежкость в период зимнего хранения. Параллельно с конкурс-' ным проводят динамическое, экологическое и производственное испытания.
Динамическое испытание. Длится в течение 3 лет. Его основная задача — определить группу спелости гибридов по сравнению со стандартными районированными сортами. Для этого за период вегетации берут четыре пробы по 15 кустов в четырехкратном повторении (всего 240 кустов): первую — в начале образования клубней у скороспелого стандарта, последующие— через каждые 10 дней. Гибриды оценивают но урожаю клубней и массе ботвы, товарности, средней массе товарного клубня, содержанию крахмала, вкусу.
Для экономии земельной площади рекомендуют объединять питомники конкурсного и динамического испытания, высаживая в каждом повторении по 260 клубней (4 рядка по 50 клубней конкурсного и в продолжение по 15 клубней динамического испытания в каждом рядке). Ко времени уборки конкурсного испытания пробы динамического испытания уже взяты и в питомнике на их месте остаются широкие разворотные полосы для уборочных машин.
Экологическое испытание. Его проводят для выявления пластичности гибридов в течение 3 лет: в первый год —
4.42 по методике предварительного, во второй и третий год — основного испытания. Материал учреждение-оригинатор рассылает на опытные станции, в селекцентры зоны, лаборатории по первичному семеноводству, где его используют в первый год. В последующие годы оценивают материал, выращенный в пункте испытания.
Питомник селекционного размножения. Служит для размножения гибридов, находящихся в конкурсном испытании. Повторность однократная, размер делянки от 65 мг до 1 га (в зависимости от наличия материала). Проводят фенологические наблюдения, учет болезней (3—4 раза), прочистки, предварительный учет урожая. Питомник размещают на изолированном участке, материал для него отбирают по результатам индексации и серологического анализа.
Производственное испытание. Этот вид испытания проводят в условиях ОПХ, колхозов или совхозов. Высаживают перспективные формы, прошедшие двухлетнее конкурсное испытание, на площади от 0,25 до 0,5 га. В качестве стандартов используют районированные сорта одной с испытуемым материалом группы спелости. Технология посева общепринятая для данной культуры в хозяйстве 'или интенсивная. Проводят учет урожая.
Перспективные сорта, начиная с питомника основного испытания, размножают в селекционном питомнике, чтобы после окончания всех испытаний и итоговой оценки сорта иметь для передачи в государственное сортоиспытание 5 т семенного материала.
методы оценки селекционного материала
Большое значение для селекции картофеля имеет оценка устойчивости гибридного материала к болезням, вредителям, экстремальным условиям среды, а также качества их клубней.
Оценка устойчивости к болезням. Устойчивость к вирусным болезням может быть выявлена в самый ранний период роста сеянцев. Для этого их заражают с помощью пи- столета-распылителя с расстояния 10—15 см инокулюмом вирусов X иY,в который добавлен абразив (карборунд, целит) для нарушения целостности листьев и повышения эффективности приема. После инокуляции сеянцы опрыскивают водой, чтобы на листьях не оставалось высохшего инокулюма, а через 7— 10 дней выносят из теплицы наружу. Выбраковку по внешним признакам проводят неоднократно в течение 1,5—2 мес после инокуляции, затем все внешне здоровые растения проверяют серологически и давшие с сывороткой положительные реакции удаляют.
Устойчивость картофеля к фитофторозу выявляют с помощью лабораторных и полевых методов. Полевую устойчивость сеянцев к болезни оценивают в фазе четырех — шести листьев путем заражения их суспензией расы 1, 2, 3, 4 (инфекционная нагрузка !0—12 конидий в поле зрения микроскопа Х120) и на 5. 9, 15-й день удаляют пораженные растения.
Полевую устойчивость в селекционных питомниках оценивают методом искусственной инокуляции отделенных листьев (по шесть каждого образца из среднего яруса), нанося на них суспензию повышенной (18—20) и пониженной (15—16 в поле зрения микроскопа) концентрации конидий расы 1, 2, 3, 4. Оценку проводят через 3—4 дня после заражения, а затем дважды последовательно через двое суток по девятибалльной шкале СЭВ, вычисляя средний балл поражения образца. Контролем служат хорошо изученные по полевой устойчивости сорта. При развитии эпифитотии фитофтороза полевую устойчивость листьев и клубней оценивают визуально в поле.
Сверхчувствительность (/?-гены) листьев и клубней определяют путем ^заражения отделенных листьев и ломтиков клубней суспензией определенных рас гриба и последующей оценки. В качестве контролей используют сорта с известными /^-генами в листьях и клубнях.
Оценку устойчивости к бактериальным болезням проводят в полевых и лабораторных условиях. Лабораторные методы включают искусственное заражение клубней (ломтиков) и срезанных стеблей (при оценке устойчивости к черной ножке) или клубней (при оценке устойчивости к кольцевой гнили) чистыми культурами возбудителей болезней, выдерживание их в условиях определенной температуры и влажности и последующую оценку степени заражения.
Полевой метод оценки селекционного материала также основан на искусственном заражении клубней перед посадкой чистыми культурами возбудителей, которые вводят в них с помощью шприца. Развитие болезни контролируют в период вегетации и при уборке. Полевой метод оценки применяют на последних этапах селекционного процесса
Оценка устойчивости к механическим повреждениям. Такую оценку нужно проводить ежегодно, начиная с питомника гибридов второго года. Первоначально применяют лабораторный метод оценки устойчивости клубней к потемнению мякоти с помощью прибора динамической" прочности (ПДП), а для гибридов в основном и конкурсном испытаниях — механизированную уборку в поле. Их убирают комбайном или картофелекопателем КСТ-1,4, которые сильно повреждают клубни. В день уборки учитывают внешние (обдирание кожуры, вырывание мякоти, трещины), а через 10—20 дней хранения при температуре 16— 18°С и внутренние (потемнение мякоти) повреждения. По результатам учета вычисляют процент поврежденных клубней, в том числе по видам механических повреждений.
Качество клубней. Данный признак определяется многими показателями— формой, глубиной глазков, окраской кожуры и мякоти, вкусовыми достоинствами, содержанием крахмала, белка, витаминов. Первые пять признаков оценивают визуально. Содержание крахмала, белка, витаминов устанавливают известными лабораторными методами.
Степень однородности клубней (пробы по сухому веществу) определяют в солевых растворах, потемнение мякоти — на разрезе сырых клубней.
Столовые качества клубней — целостность кожуры, плотность мякоти после варки, мучнистость (рассыпчатость), клеклость, водянистость, вкус, запах, потемнение мякоти после варки — оценивают при дегустации. Клубни варят без соли, отмечая продолжительность варки. Все указанные показатели определяют по внешнему виду, органолептически и выражают в баллах. Общая оценка столовых качеств представляет сумму баллов.
Оценку сортов на продолжительность хранения без снижения столовых качеств клубней нужно проводить 2 раза: первый—в течение 1—2 мес после уборки, второй — в конце зимы—начале весны до прорастания клубней.
Пригодность клубней для переработки на чипсы. Этот показатель оценивается в лабораторных условиях по содержанию редуцирующих Сахаров и качеству чипсов. Содержание Сахаров определяют известными методами, например хроматографиче- ским экспресс-методом БелНИИКПО( контроль—цветовая шкала на основе стандартных растворов глюкозы).
Пригодность к переработке на чипсы определяют после двухнедельного рекопдиционирования образцов при 23°С. Ломти нарезают толщиной 1,1 —1,2 мм, жарят 2 мин при 160—180°С. Качество готовых чипсов оценивают по девятибалльной цветовой шкале.
Высокую пригодность гибридов для переработки на чипсы на ранних этапах селекции выявляют методом «жареных дисков», в основу которого положена идентичность протекания реакции Майларда при жарении ломтей и жарении дисков из фильтровальной бумаги, пропитанных выжатым на них соком разрезанного пополам кл'убня. Диски сравнивают с цветовой шкалой. Половинки ценного материала используют в дальнейшем в селекционной работе.
Практическое занятие № 15