Освобождение крови от белков
При клинических и биохимических анализах крови белки могут препятствовать определению низкомолекулярных веществ, таких как, например, глюкозы, хлоридов и др. Поэтому в клинической практике часто приходится освобождать биологические жидкости от протеинов.
Ход определения
В 5 пробирок налейте по 2 мл сыворотки. В первый сосуд добавьте 1-2 мл 10%-го раствора трихлоруксусной кислоты и встряхните; во вторую – 1 мл 10% метафосфорной кислоты, в третью – 1-2 капли концентрированной H2SO4, в четвёртую – 1-2 капли 3%-го раствора СН3СООН и кипятите 1-2 минуты, в пятую прилейте 5 мл 4,5%-го ZnSO4 и 1 мл 4% NaOH.
После чего отфильтруйте содержимое каждой пробирки. С каждым фильтратом проделайте пробу Геллера (на 1-2 мл концентрированной HNO3 осторожно по стенке наслоите исследуемую жидкость) и пробу с сульфосалициловой кислотой (к 1-2 мл фильтрата добавьте 3-4 капли 20%-ной сульфосалициловой кислоты).
Отрицательные реакции на белки в фильтрате свидетельствуют о полноте освобождения от них исследуемой жидкости.
Доказательство присутствия гемоглобина в моче
Гемоглобин в моче может появляться при усиленном гемолизе эритроцитов или реже – у лиц с ослабленной синтетической функцией печени (угнетение генеза гаптоглобина).
Бензидиновая проба на гемоглобин
Гемоглобин, как все соединения, полифункционален, поэтому при определённых условиях может проявлять свойства пероксидазы, то есть способен окислять бензидин с помощью кислорода из пероксида водорода.
Ход определения
В пробирку налейте 3-4 мл прокипячёной мочи, 0,5 мл раствора бензидина в уксусной кислоте и 3-4 капли 3%-го раствора Н2О2. После перемешивания жидкость окрашивается в сине-зелёный цвет, указывающий на присутствие Hb в моче.
Определение наличия Hb с помощью комбинированных тест-полосок
Комбинированными тест-полосками в моче можно доказать наличие глюкозы, кетоновых тел, белка, уробилиногена, гемоглобина.
Ход определения
Возьмите нецентрифугированную мочу. Тест-полоску опустите на 1 минуту в сосуд с мочой, после чего получившуюся окраску сравните со стандартной шкалой. Равномерный зелёный цвет свидетельствует о наличии гемоглобина, при его малых примесях в моче реакция может наступить через 1-2 минуты.
Контроль выполнения лабораторной работы
1. Почему в биохимических лабораториях, прежде чем провести анализ крови, вызывают осаждение белков?
2. Почему осаждение уксусной кислотой будет более полным после кипячения?
3. Объясните механизм осаждения протеинов.
4. Какой реактив более полно осаждает белки?
5. С помощью каких реакций можно доказать наличие гемоглобина в моче?
6. Объясните механизм бензидиновой пробы.
Темы рефератов:
1. Плазменные белки, особенности строения, биологическая роль.
2. Аутоиммунные болезни, краткая характеристика.
3. Трансплантационная несовместимость.
4. Железо, экология, пищевые источники, механизмы всасывания.
5. Роль железа в системе ПОЛ-АРЗ.
6. Факторы риска в развитии Fe-дефицитных анемий.
7. Основные звенья патогенеза гемохроматоза.
8. Гемофилии, причины, патогенез.
9. Причины и патогенез приобретённых коагулопатий.
10. Наследственные порфирии, патогенез.
Лабораторно-практическое занятие № 30
Тема: Биохимия крови (часть 2). Гемолиз эритроцитов. Метаболизм билирубина в норме и патологии
Цель:Изучить основные этапы распада эритроцитов, их основного белка - гемоглобина. Сформировать представление о механизмах развития желтух. Научиться определять наличие билирубина в моче.
Значение:Распад гемоглобина – основного белка эритроцитов – завершается образованием билирубина – потенциально токсического соединения. Гипербилирубинемия может развиваться под действием самых разных причин, отсюда знание патогенеза желтух имеет важное значение для врача любого профиля.
Исходный уровень:
1. Ферменты; классификация, механизм действия.
2. Понятие о метаболизме, анаболизме, катаболизме.
3. Углеводы, классификация, роль. Процессы катаболизма и анаболизма
глицидов.
4. Обмен холестерола, биологическая роль, патология.
5. Стадии синтеза белка, регуляция, патология.
6. Витамины, роль; классификация гиповитаминозов.
7. Химический состав крови в норме.
8. Особенности строения эритроцитов. Роль системы «ПОЛ-АРЗ».
9. Строение гемоглобина, других гемопротеидов. Их роль в организме.
10. Основные этапы гемостаза.
11. Морфология клеток РЭС (печени, селезенки, костного мозга).
12. Малый и большой круги кровообращения.
13. Строение и функции отделов желудочно-кишечного тракта.
14. Моча, основные составные части; этапы образования.
Вопросы для самоподготовки
1. Строение эритроцитов, основные особенности старения.
2. Распад гемоглобина; ключевые ферменты процесса. Пути утилизации же-
леза, глобина.
3. Происхождение билирубина (распад гемоглобина, других гемопротеидов, неэффективный синтез гема).
4. Формула билирубина, его физико-химические и биологические свойства.
5. Три фазы обмена билирубина в норме, их характеристика.
6. Роль УДФГК в метаболизме билирубина.
7. Судьба конъюгированного билирубина, роль в ней нормальной микрофлоры.
8. Преобразование билирубина, пути выведения продуктов.
9. Показатели обмена желчных пигментов в крови, моче, кале в норме.
10. Желтухи как следствие гипербилирубинемий; классификация.
11. Гемолитические желтухи. Причины, примеры наследственных, врожденных, приобретенных гемолитических желтух; основные биохимические признаки.
12. Причины физиологической желтухи новорожденных. Особенности ее протекания у недоношенных младенцев. Ядерная желтуха.
13. Паренхиматозная желтуха; причины развития приобретенной формы.
14. Варианты наследственной паренхиматозной желтухи (синдромы Жильбера, Криглера-Найяра, Ротора, Дабина-Джонсона), причины, особенности патогенеза.
15. Механическая желтуха; определение, виды (врожденная, приобретенная), причины. Патохимия процесса (картина крови, мочи, кала).
16. Дифференциальная диагностика желтух.
Литература
Основная:
1. Лекции «Биохимия крови. Катаболическая фаза обмена гемоглобина. Патология обмена билирубина».
2. Березов Т.Т. Биологическая химия: Учебник. – 3-е изд., перераб. и доп. /Т.Т. Березов, Б.Ф.Коровкин. - М.: Медицина, 1998.-С.506-508, 561-565.
3. Никитина Л.П. Биохимия эритроцитов / Л.П. Никитина, З.Ц. Ринчинов. - Чита, 2006.- С.25-43.
4. Ситуационные задачи по биохимии: Учебное пособие для студентов лечебного и педиатрического факультетов // Л.П.Никитина, А.Г.Гомбоева, Н.В.Соловьева и др. – 2-е изд., испр. и доп. - Чита, 2003.- С.29-30.
5. Патохимия наследственных болезней. Учебное пособие для студентов лечебного и педиатрического факультетов // Никитина Л.П., Гомбоева А.Ц., Соловьева Н.В. – Чита, 2008. – С.74-81.
Дополнительная:
1. Биохимия / Под ред. Е.С. Северина.- М.: ГЭОТАР-МЕД, 2005 (2003).- С.645-655.
2. Биохимия (в вопросах и ответах) (Учебное пособие для студентов мед. вузов в вопросах и ответах) / Т.П.Вавилова, О.Л.Евстафьева. – М.: ВЕДИ, 2005.- С.98-105.
3. Биохимия. Тесты и задачи: Учеб. пособие для студ. мед. вузов / Под ред.
Е.С.Северина. – М.: ВЕДИ, 2005. – С.305-317.
4. Биохимия. Тестовые вопросы: Учебное пособие/ Под ред. Д.М.Зубаирова. – М.: «ГЭОТАР-Медиа», 2008. – С.254-274.
5. Биохимия. Краткий курс с упражнениями и задачами / Под ред. член-корр.
Е.С.Северина, А.Я.Николаева. – М.: ГЭОТАР-МЕД, 2001. – С. 309-331.
6. Клиническая биохимия / Под ред. В.А. Ткачука.- М.: ГЭОТАР-МЕД, 2002.- С.19-23.
7. Биохимия человека / Р. Марри, Д. Греннер, П. Мейес и др.- Пер. с англ.- М.: Мир, 2004.- Т.1.-С.356-372.
8. Маршалл В.Дж. Клиническая биохимия/В.Дж.Маршалл. - Пер. с англ.- М.: СПб: БИНОМ-Невский Диалект, 2000.- С.90-95.
9. Эллиот В.Биохимия и молекулярная биология / В.Эллиот, Д.Эллиот. - Пер. с англ.- М.: Изд-во НИИ биомед. химии РАМН, 1999.- С.314-315.
Лабораторная работа