Опыт 7. Осаждение белков спиртом

Опыт 1.Высаливание белков сульфатом аммония

Мутную жидкость фильтруют через сухой складчатый фильтр. Часть прозрачного фильтрата нагревают до кипения и наблюдают свертывание альбуминов, находящихся в растворе. К другой части фильтрата добавляют при перемешивании избыток сульфата аммония в порошке до прекращения его растворения. Появляется муть или хлопья выпадающего в осадок альбумина (сравнить с исходным фильтратом). Осаждение белков солями являет­ся обратимым процессом, и при добавлении воды белки снова растворяются.

Ход работы. Наливают в пробирки 1—1,5 мл раствора белка, добавляют равный объем насыщенного- раствора сульфата аммония и слегка встряхивают смесь. Появляется муть от выпадающего осадка глобулинов.

Опыт 2. Свертывание белков при нагревании

Выпадение белков в осадок при нагревании характерно почти для всех белков (исключение составляет желатина, не свертывающаяся при нагревании). Особенно легко и более полно происходит осаждение белка в слабокислой среде, вблизи от изоэлектрической точки. В нейтральной и сильнокислой средах осаждение белков идет значительно хуже, а в щелочной среде вовсе не наблюдается .

В щелочной среде понижается диссоциация белка по радикалам диаминокислот, и молекулы его приобретают отрицательный заряд, вследствие чего остаются в растворе даже при нагревании до кипения.

Добавление к раствору белка нейтральных солей облегчает и ускоряет свертывание белков при кипячении вследствие наступающего дегидратирования белковых частиц.

Ход работы. В пять пробирок наливают по 2 мл раствора белка.

а) Нагревают содержимое первой пробирки. Быстро появляется осадок.

б) Добавляют во вторую пробирку одну каплю 1%-ного раствора уксусной кислоты и нагревают. Хлопьевидный осадок белка выпадает скорее и полнее вследствие того, что в результате подкисления рН раствора приблизился к изоэлектрической точке белка.

в) Добавляют в третью пробирку около 0,5 мл 10%-ного раствора уксусной кислоты и нагревают. Осадок белка не образуется даже при кипячении.

г) Добавляют в четвертую пробирку около 0,5 мл 10%-ного раствора уксусной кислоты, несколько капель насыщенного раствора хлорида натрия и нагревают. Образуется осадок белка.

д) Добавляют в пятую пробирку около 0,5 мл раствора гидроксида натрия и нагревают. Осадок белка не образуется даже при кипячении.

Опыт 3. Осаждение белков концентрированными минеральными кислотами

Концентрированные минеральные кислоты вызывают необратимое осаждение белков. Желатина не осаждается минеральными кислотами.

Ход работы. В три сухие пробирки наливают по 1—2 мл концентрирован­ной азотной, серной и соляной кислот. Затем, наклонив каждую пробирку, осторожно по стенке приливают в нее из пипетки по 0,5 мл исследуемого раствора белка так, чтобы он не смешивался с кислотой. В месте соприкосновения двух жидкостей появ­ляется белый аморфный осадок белка. При встряхивании оса­док, выпавший при действии азотной кислоты, увеличивается, а осадки, выпавшие при действии соляной и серной кислот, раст­воряются в их избытке.

Опыт 4. Осаждение белков органическими кислотами

Сульфосалициловая и трихлоруксусная кислоты являются специфическими реактивами на белок.кислота

Ход работы. В две пробирки наливают по 2—3 мл раствора белка и добавляют в одну из них несколько капель 5%-ного раствора трихлоруксусной кислоты, в другую—несколько капель 20%-ного раствора сульфосалициловой кислоты. В обоих случаях наблю­дается выпадение осадка белка.

Опыт 5. Осаждение белков солями тяжелых металлов

Соли тяжелых металлов вызывают необратимое осаждение белков, образуя с ними нерастворимые в воде соединения. Но некоторые из таких осадков (например, с солями меди, свинца, цинка) растворяются в избытке осадителя вследствие адсорбции ионов поверхностью белковых частиц: в результате этого белковые частицы приобретают заряд и вновь растворяются. Растворение осадков денатурированных белков в избытке солей тяжелых металлов называется адсорбционной пептизацией.

Ход работы. В две пробирки наливают 1—1,5 мл исследуемого раствора белка и медленно, по каплям при встряхивании прибавляют в одну из них раствор сульфата меди, а в другую — раствор аце­тата свинца. Выпадает хлопьевидный осадок вследствие образования малорастворимого солеобразного соединения (с солью меди — голубого цвета, с солью свинца — белого цвета). При избытке реактива осадок снова растворяется.

Опыт 6. Осаждение белков фенолом и формалином

Ход работы. В две пробирки, содержащие по 1—2 мл раствора белка, до­бавляют: в первую — равный объем насыщенного водного раст­вора фенола, а во вторую —равный объем формалина. В обеих пробирках выпадает осадок белка. От действия фенола осадок выпадает быстрее.

Опыт 7. Осаждение белков спиртом

Спирт вызывает дегидратацию белковых молекул.

Ход работы. В пробирку наливают 1—1,5 мл раствора белка и добавляют немного кристаллического хлорида натрия. Приливают постепенно туда же 5—6 мл этилового спирта.

Результаты опытов оформить в виде таблицы. Сделать выводы.

	Наблюдения
№опыта	Яичный альбумин	Желатина	Белки мяса	Растительный белок