Проведение II этапа бак. метода выделения чистых культур анаэробов.

Системы для биохимической идентификации бактерий.

В современных условиях для изучения биохимической активности микроорганизмов, наряду с классическими варинтами “пестрого ряда”, применяют системы индикаторных бумажек (СИБ) и наборы мультимикротестов (ММТ).

Система индикаторных бумажек (СИБ) – это набор дисков, пропитанных различными субстратами, которые вносят в пробирки со взвесью бактерий, либо предварительно помещают в лунки пластиковых планшетов, куда затем вносят исследуемые бактерии. Например, СИБы для идентификации вибрионов, энтеробактерий (Россия).

Наборы мультитестов – пластиковые планшеты, в лунки которых помещены различные субстраты и индикаторы. Стандартную взвесь исследуемой культуры вносят в лунки и инкубируют при 37°. Существует два основных типа таких систем. Это индивидуальные системы, рассчитанные на идентификацию одной культуры. К ним относятся тест-системы ПБДЭ, ПБДС (Россия), системы API (Франция) и многие другие. Второй тип систем основан на использовании многорядных планшетов, позволяющих одновременно проводить идентификацию нескольких культур. К системам этого типа относятся тест-системы фирмы Lachema (Чехия), ММТ Е (Россия), Enterotube II (США) и др. Инкубация тест-систем проводится в обычных термостатах или в специальных термостатируемых устройствах, входящих в комплект автоматизированных систем, где учет результатов и их интерпретация осуществляется автоматически с помощью компьютера (“Vitek”, BioMerieux, Франция).

Идентифицируемые микроорганизмы	Тест-система	Время инкубации, ч	Фирма-производитель
Энтеробактерии	ПБДЭ ММТ Е-1, 2 Энтеротест 1, 2 API 20 Е Enterotube II	18-24 18-24 24-48 18-24	НПО «Диагностические системы», г. Н-Новгород НПО «Аллерген», г. Ставрополь Lachema, Чехия BioMerieux, Франция Becton Dickinson, США
Стафилококки	ПБДС Стафи-тест API Staph		НПО «Диагностические системы», г. Н-Новгород Lachema, Чехия BioMerieux, Франция
Стрептококки и энтерококки	Стрепто-тест API 20 Strep	4-24	Lachema, Чехия BioMerieux, Франция
Коринебактерии	API Coryne		BioMerieux, Франция
Анаэробы	Анаэро-тест API 20 А Rapid Anaerobe		Lachema, Чехия BioMerieux, Франция Bахter Diagnostics, США
Грибы	API 20 С		BioMerieux, Франция

Проведение II этапа бак. метода выделения чистых культур анаэробов.

Просмотрите среду для контроля стерильности с посевом почвенной болтушки. Обратите внимание на наличие роста и его характер. Приготовьте фиксированный препарат, используя материал из глубины питательной среды, окрасьте по Граму и промикроскопируйте. Полученные результаты внесите в протокол, сделайте вывод и наметьте тактику дальнейшего исследования.

Ожидаемый результат: рост основного возбудителя газовой гангрены Clostridium perfringens характеризуется помутнением и интенсивным газообразованием; возбудителя ботулизма C. botulinum – помутнением с последующим образованием осадка; возбудителя столбняка C. tetani – слабым помутнением и небольшим осадком.

При окраске по Граму:

- C. perfringens – грамположительные толстые палочки со слегка закругленными концами размером 4-8 х 1-1,5 мкм, располагаются одиночно. Споры, имеющие овальную форму, располагаются центрально или субтерминально, придавая клеткам вид “теннисной ракетки”;

- C. botulinum - грамположительные палочки размером 4-6 х 0,5-1,2 мкм со слегка закругленными концами, располагаются одиночно; клетки со спорой напоминают “теннисную ракетку”;

- С. tetani - грамположительные тонкие палочки размером 4-10 х 0,4-0,6 мкм, образующие споры, занимающие терминальное положение; клетки со спорами имеют характерный вид “барабанных палочек”.

В первичном посеве почвенной болтушки могут быть выявлены и другие микроорганизмы, в том числе факультативные анаэробы. Это возможно потому, что предварительное кратковременное прогревание исследуемого материала не дает абсолютной гарантии гибели сопутствующей микрофлоры. Но выявления характерных для рода Clostridium микроорганизмов свидетельствует о получении накопительной культуры, из которой возможно выделение чистой культуры Clostridium spp. и ее идентификация.

Вопросы для самоконтроля:

1. Что такое чистая культура микроорганизмов? Основной метод определения чистоты культуры.

2. Назовите принцип определения биохимической активности микроорганизмов.

3. «Пестрый ряд»: его состав и назначение.

4. К какой группе по типу питания относятся микроорганизмы, вызывающие инфекционные заболевания человека

5. Механизмы поступления питательных веществ в бактериальную клетку.

6. Что такое антибиотикограмма?

7. Обоснуйте необходимость определения антибиотикограмм в клинической практике.

Литература:

Учебники:

1. Борисов Л. Б. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология. – М.: ООО «МИА», 2002. – С. 46-58.

2. Поздеев О. К. Медицинская микробиология / Под ред. акад. РАМН В. И. Покровского. - М.: ГЭОТАР Медицина, 2001. – С. 54-73, 178.