К ПРАКТИЧЕСКОМУ ЗАНЯТИЮ № 10
(для студентов)
Факультеты: лечебно-профилактический, медико-профилактический, педиатрический
Курс: 2
1. Тема занятия: Пентозофосфатный шунт и глюконеогенез, регуляция обмена углеводов.
2. Учебная цель занятия: Знакомство с пентозофосфатным путем обмена моносахаридов, глюконеогенезом, уровнями и механизмами регуляции обмена углеводов.
3. Задачи занятия:
1. Получить представления о возрастных и тканевых особенностях функционирования реакций пентозофосфатного шунта и глюконеогенеза, об их интеграции с другими видами обмена, о номенклатуре и классификации ферментов катализирующих эти процессы и их коферментном составе, об уровнях и механизмах регуляции обмена углеводов.
2. Подробно разобрать регуляцию и написание ключевых реакции глюконеогенеза и окислительной стадии пентозофосфатного шунта.
3. Ознакомиться с распространенными ферментопатиями пентозофосфатного шунта, глюконеогенеза и обмена фруктозы.
4. Научиться самостоятельно выполнять исследование содержания глюкозы в сыворотке крови – ключевого диагностического показателя углеводного обмена.
4. Продолжительность занятия: 3 акад. часа.
5. Задание студентам:
1. Исследовать содержание глюкозы в сыворотке крови.
6. Методические указания к выполнению самостоятельной работы на занятии.
Практическая работа выполняется группами по 2 человека.
Работа № 1. Определение содержания глюкозы в сыворотке крови.
Принцип метода: Глюкоза при нагревании с о-толуидином в растворе уксусной кислоты дает зеленое окрашивание, интенсивность которого пропорциональна содержанию глюкозы.
Ход работы.
1. Центрифугирование.
В центрифужную пробирку внести 0,9 мл 3% р–ра ТХУ и по стенке 0,1 мл крови, смешать и центрифугировать при 5 тыс. об/мин., полученный супернатант слить в чистую пробирку.
2. Проведение цветной реакции.
В три чистые, маркированные пробирки внести реагенты, как указано в таблице.
| Пробирки | |||
| Опыт | Контроль | Стандарт | |
| Супернатант | 0,1 | - | - |
| Физраствор | - | 0,1 | - |
| Р – р глюкозы | - | - | 0,1 |
| О-толуидин | 4,5 | 4,5 | 4,5 |
Пробирки плотно закрыть крышками из фольги и поставить точно на 8 минут в кипящую водяную баню, по истечении этого времени осторожно остудить под струей холодной воды и использовать для колориметрического анализа. Если жидкость после нагревания мутна, ее необходимо вновь центрифугировать.
3. Колориметрирование окрашенных растворов провести при длине волны 600 – 650 нм - красном светофильтре в кюветах с ходом луча 10мм.
4. Расчет по формуле: Соп ммоль/л = Сст х Еоп/Ест,
где Сст = 5,5 ммоль/л
В нормальной капиллярной крови, взятой натощак, концентрация глюкозы находится в пределах: У детей 4,1 – 5,6 ммоль/л. У взрослых до 40 лет 3,3 – 5,5 ммоль/л. В 40 – 59 лет 4,1 – 5,9 ммоль/л. В 60 – 90 лет 4,4 – 6,4 ммоль/л. Концентрация глюкозы в сыворотке крови определяется выше примерно на 0,5 ммоль/л.
Клинико-диагностическое значение.
Концентрация глюкозы крови находится под контролем многих органов и систем и поэтому отражает их функциональное состояние, но в первую очередь функциональное состояние инсулярного аппарата и обмена инсулина, затем функциональное состояние эндокринных систем, вырабатывающих антиинсулярные гормоны и метаболизм этих гормонов. В меньшей степени уровень глюкозы отражает состояние внутренних органов прежде всего печени и почек, а также глюкозозависимых (головной мозг), интенсивно гликолизирующих тканей (опухолевая, жировая) и др. Вот почему при патологических состояниях указанных органов и систем исследуется концентрация глюкозы крови как диагностического и прогностического биохимического показателя, помогающего уточнить или установить диагноз, проследить динамику течения болезни и эффективность лечения, документировать выписку больного.
7. Контрольные вопросы по теме занятия (см. задание к занятию).
8. Литература для подготовки (см. задание к занятию).
9. Обсуждено на заседании кафедры 18. 04. 2011 г.
10. Учебное задание подготовлено доц. Трубачевым С.Д.
ГОУ ВПО «Уральская государственная медицинская академия
Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»
кафедра биохимии
Утверждаю
Зав. каф. проф., д.м.н.
Мещанинов В.Н.
_____‘’_____________2011 г
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ