Определение массовой доли небелкового азота

Метод основан на отделении небелковых азотистых веществ от белковых путем осаждения последних трихлоруксусной кислотой и определении небелкового азота в фильтрате, полученном после осаждения окислением органического вещества, содержащегося в фильтрате при сжигании его в концентрированной серной кислоте в присутствии катализатора, отгонке образующегося аммиака паром, улавливании его раствором серной кислоты и определении содержания азота методом обратного титрования.

Оборудование и реактивы: весы аналитические класса 2 с пределами измерения от 0 до 200 г; электроплитка бытовая или газовые горелки; баня водяная; холодильник шариковый; воронка капельная; бюретка вместимостью 50 см³ с делениями на 0,1 см³; каплеуловитель; марля медицинская; бумага фильтровальная; колбы для сжигания, вместимостью 100 см³; колбы плоскодонные или круглодонные вместимостью от 500 до 700 см³; колбы плоскодонные вместимостью от 250 до 300 см³; колбы мерные вместимостью 200 или 250 см³; капельница; пипетка вместимостью 10 см³; ступка фарфоровая с пестиком вместимостью 250 см³; вода дистиллированная; кислота трихлоруксусная 200 г/ дм³ (20 %-ная); кислота серная концентрированная и раствор 0,05 моль/ дм³ (0,1 н); натрия гидроксид, раствор 330 г/ дм³ (33 %-ный) прокипяченный и раствор 0,1 моль/ дм³ (0,1 н); медь сернокислая 5-водная; калий сернокислый; метиловый красный, раствор 0,2 г/ дм³ (0,02 %-ный); растворяют 0,02 г метилового красного в 100 см³ спирта 600 г/ дм³ (60 %-ного); индикатор смешанный (Таширо).

Проведение анализа:

Навеску исследуемого продукта 50 г, взвешенную с погрешностью не более 0,01 г, растирают в ступке со 100 г дистиллированной воды, переносят количественно в мерную колбу вместимостью 250 см³, настаивают 0,5 часа при периодическом взбалтывании, после чего доводят объем жидкости в колбе до метки дистиллированной водой и фильтруют через четыре слоя марли.

В коническую колбу отбирают 100 см³ полученного фильтрата и небольшими порциями при взбалтывании жидкости приливают к ней 25 см³ 20 %-ного раствора трихлоруксусной кислоты. Для интенсификации осаждения пробу осторожно подогревают на водяной бане. После 30-минутного отстаивания жидкость отфильтровывают через сухой складчатый фильтр.

В колбу для сжигания (колбу Кьельдаля) вместимостью 100 см³ отбирают пипеткой 10 см³ фильтрата и ведут минерализацию. С этой целью добавляют в колбу Кьельдаля несколько кристаллов медного купороса (от 0,2 до 0,3 г) и приливают от 10 до 20 см³ концентрированной серной кислоты плотностью 1840 кг/ м³.

Затем колбу с содержимым осторожно нагревают в вытяжном шкафу, не допуская разбрызгивания жидкости. Когда содержимое колбы станет однородным, прекращают нагревание, дают остыть, после чего добавляют 0,5 г сернокислого калия и продолжают нагревание до тех пор, пока жидкость в колбе не станет прозрачной, зеленовато-голубой окраски без бурого оттенка. Внутренние стенки колбы должны быть совершенно чистыми. Это достигается осторожным взбалтыванием содержимого колбы для смывания со стенок темных обугленных частиц пробы.

По окончании сжигания содержимое колбы охлаждают и осторожно количественно переносят в отгонную колбу вместимостью от 500 до 700 см³ (рис.2.1). Колбу для сжигания тщательно ополаскивают, проверяя полноту смывания добавлением 1-2 капель раствора метилового красного.

Общий объем колбы должен быть не более 250 до 300 см³.

Приемником служит коническая колба вместимостью от 250 до 300 см³, в которую из бюретки налито 25-30 см³ раствора серной кислоты 0,05 моль/ дм³ (0,1 н). Конец трубки холодильника должен быть погружен в раствор серной кислоты.

В отгонную колбу осторожно, по стенкам, избегая смешивания жидкостей, приливают от 50 до 70 см³ раствора гидроксида натрия 330 г/ дм³, бросают кусочек лакмусовой бумаги и быстро закрывают ее пробкой, соединенной посредством каплеуловителя с холодильником, осторожно перемешивают содержимое и нагревают. Реакция жидкости в колбе должна быть резко щелочной.

После закипания жидкости в отгонной колбе приемник опускают так, чтобы конец трубки холодильника находился на некотором расстоянии от поверхности раствора, и продолжают отгонку до тех пор, пока не отгонится не менее 2/ 3 жидкости.

Конец отгонки определяют по лакмусовой бумаге. Если отгонка закончена, капля дистиллята не должна вызывать посинения красной лакмусовой бумаги. При появлении в конце отгонки при кипении толчков отгонку прекращают.

По окончании отгонки конец трубки холодильника обмывают водой в приемную колбу и содержащейся в ней избыток серной кислоты оттитровывают раствором гидроксида натрия 0,1 моль/ дм³ в присутствии метилового красного.

Одновременно проводят контрольный анализ без навески исследуемой пробы.

Массовую долю небелкового азота в процентах вычисляют по формуле:

, (3.5)

где - объем раствора гидроксида натрия 0,1 н, пошедший на титрование серной кислоты в контрольном анализе, см³; - объем раствора гидроксида натрия 0,1 н, пошедший на титрование серной кислоты в рабочем анализе, см³; - объем водной вытяжки в мерной колбе, см³; - объем водной вытяжки, взятый для осаждения белков, см³; - объем водной вытяжки, взятый для осаждения белков с учетом объема трихлоруксусной кислоты, см³; - объем фильтрата, взятый для минерализации, см³; - коэффициент пересчета на точный раствор гидроксида натрия, 0,1 н, г; - количество азота эквивалентное 1 см³ гидроксида натрия 0,1 н, г; - навеска исследуемой пробы, г.

Вычисление проводят до второго десятичного знака.