К ПРАКТИЧЕСКОМУ ЗАНЯТИЮ № 23
(для студентов)
Факультеты: лечебно-профилактический, медико-профилактический, педиатрический
Курс: 2
1. Тема занятия: Биохимия нервной системы и соединительной ткани.
2. Учебная цель занятия: Ознакомиться с особенностями химического состава и обмена веществ в нервной и соединительной тканях в норме и при патологии, биохимической диагностикой их основных патологических состояний.
3. Задачи занятия:
1. Получить представления:
· О химическом составе и обмене веществ в нервной ткани.
· Биохимических основах возникновения и проведения нервного импульса
· Обмене нейромедиаторов и механизмах синаптической передачи
· Биохимических причинах и механизмах возникновения патологических состояний в нервной ткани и их диагностике.
2. Изучить:
· Клеточный и химический состав соединительной ткани, особенности её организации и функционирования.
· Строение и обмен коллагена, эластина, фибронектина, протеогликанов, в норме в возрастном аспекте и при патологии (при заживлении ран, коллагенозах, недостаточности витамина С и др.)
· Роль биохимических маркеров в диагностике дегенеративных процессов в соединительной ткани.
4. Продолжительность занятия: 3 акад. часа.
5. Задание студентам:
1. Определение уровня сиаловых кислот в сыворотке крови по реакции с резорцином (по Свеннерхольму)
2. Качественный анализ аминокислотного состава желатина и яичного белка.
6. Методические указания к выполнению самостоятельной работы на занятии.
Работа № 1. Определение сиаловых кислот по реакции с резорцином (по методу Свеннерхольма).
Принцип метода. При кипячении гликопротеином плазмы крови с ТХУ отщепляются сиаловые кислоты, которые подвергаются мягкому гидролизу с образованием нейраминовой и уксусной кислот. Резорцин в присутствии солей меди дает с нейраминовой кислотой хромоген синего цвета.
Ход работы:
- Сыворотку крови смешивают с 5% раствором ТХУ, ставят на 7 минут на кипящую водяную баню, затем охлаждают и фильтруют через бумажный фильтр.
- В пробирку помещают 1 мл фильтрата, добавляют 1 мл резорцинового реактива, закрывают фольгой и кипятят 15 минут на водяной бане. Охлаждают.
- Добавляют 3 мл бутилацетата, встряхивают, отставляют на 15 минут для расслоения фаз.
- Верхний окрашенный слой отделяют пипеткой и колориметрируют на ФЭКе с желтым светофильтром (длина волны 575-590 нм).
- Для сравнения колориметрируют заранее приготовленный стандартный раствор нейраминовой кислоты, с концентрацией 40 мг%.
- Расчет: С опыт = Е опыт / Е стандарт • 40 мг%,
Диагностическое значение: Содержание нейраминовой кислоты в крови увеличивается при деструктивных процессах в соединительной ткани: при инфаркте миокарда, остеомиелите, коллагенозах, туберкулезе, лейкемии, раковых опухолях и др. В норме содержание нейраминовой кислоты в сыворотке крови 62-73мг% или 2,00-2,36 ммоль/л. При туберкулезе ↑ до 178 мг%, при раковых опухолях в стадии распада – до 142 мл%. Кроме того, определение нейраминовой кислоты используется для характеристики динамики патологического процесса и эффективности лечения.
Снижение уровня нейраминовой кислоты может наблюдаться при патологических процессах сопровождающихся нарушениями биосинтеза белково-углеводных комплексов, при дегенеративных изменениях в печени, ЦНС, пернициозной анемии и др.
Работа № 2. Качественный анализ аминокислотного состава желатина и яичного белка.
Желатин – белковый материал, полидисперсная смесь полипептидов (М = 50-70 •103) и их агрегатов (М = 300•103). Образуется из коллагена при длительной обработке хрящей, костей, дермы кипячением в щелочи и экстракцией водой при температуре 50-100˚С. Сохраняет способность к образованию трехспиральной структуры коллагена и образует плотные коллоидные растворы – студни.
Принцип метода. С помощью качественных реакций обнаруживают аминокислоты, входящие в состав желатина и пептидную связь, присущую всем белкам.
Ход работы:
Таблица 1
Качественный анализ аминокислотного состава белков
| Название реакции | Предмет обнаружения | Условия опыта | Изменение цвета | Результат | ||
| V р-ра белка | V реактива | Желатин | Яичный белок | |||
| Биуретовая | Пептидная связь | 0,5 мл | Биуретовый 0,5 мл | Сине-розово-фиолетовый | ||
| Перемешивают при комнатной температуре | ||||||
| Нингидриновая | α-аминогруппы белков, пептидов | 0,5 мл | Нингидрин 0,5 мл | Сине- или сине-фиолетовый | ||
| Нагревают до кипячения | ||||||
| Ксантотеиновая (Мульдера) | Ароматические аминокислоты (фен, тир, три) | 0,5 мл | Конц. HNO3 5 капель | Желтый | ||
| Нагревают до кипения, охлаждают, по каплям добавляют раствор щелочи | ||||||
| Нитропруссидная | Серосодержащие аминокислоты | 1 мл | Р-р щелочи 0,5 мл | Красно-фиолетовый | ||
| Кипятят, охлаждают | ||||||
| - | Нитропруссид 5 капель |
Диагностическое значение: Качественные (цветные) реакции часто используются в клинико-биохимических исследованиях, фармацевтической практике для обнаружения присутствия белков, аминокислот в препаратах, подтверждения подлинности препарата, «проявления следов» аминокислот и белков при хроматографическом и электрофоретическом исследованиях.
Рекомендации по оформлению результатов работы написанию выводов.
Перенесите в лабораторную тетрадь таблицу №1 и отметьте в графе «результаты работы», какие качественные реакции для желатина и яичного белка дали положительные или отрицательные пробы.
7. Контрольные вопросы по теме занятия (см. задание к занятию).
8. Литература для подготовки (см. задание к занятию).
9. Обсуждено на заседании кафедры 18. 04. 2011 г.
10. Учебное задание подготовлено ст. преп. Каминской Л.А., асс. Гавриловым И.В.
ГОУ ВПО «Уральская государственная медицинская академия
Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»
кафедра биохимии
Утверждаю
Зав. каф. проф., д.м.н.
Мещанинов В.Н.
_____‘’_____________2011 г
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ