Робота 1. Вплив t ° на активність амілази слини.

Принцип: Про залежність амілази від t ° свідчить різна ступінь розщеплення крохмалю в різних температурних умовах. Ступінь розщеплення крохмалю виявляють реакцією з йодом або реакцією Фелінга.

Техніка роботи.

Набирають у пробірку 1 мл слини, додають 9мл Н₂О, змішують. Отримують розведення слини в 10 разів.

У 2 окремі пробірки відбирають по 1 мл цієї суміші. Одну з них кип'ятять і потім охолоджують проточною водою. У третю пробірку замість слини наливають 1 мл Н₂О (контроль). У всі три пробірки вливають по 1 мл 0,5% крохмалю і поміщають у водяну баню (37 °) на 10 хвилин. Потім додають в усі пробірки по 2-3 краплі йоду. Спостерігають фарбування в пробірках, пояснюють результати, роблять висновки. Навести графік залежності активності ферменту від температури.

Висновок:______________________________________________________

_______________________________________________________________

________________________________________________________________

Графік залежності активності ферменту від температури

Робота 1. Вплив t ° на активність амілази слини. - student2.ru

tº,C

Робота 2. Дослідження специфічності дії амілази і сахарази.

Принцип: Про специфічності амілази і сахарази свідчить їхнє виборче дію на субстрати. Продукти розщеплення субстратів визначаються реакцією Фелінга.

Техніка роботи.

Джерело амілази - слина, а сахарази - витяжка з дріжжів. Слину попередньо розводять у 5 разів (1 мл слини + 4 мл Н₂О). Відбирають реактиви в 4 пробірки згідно схеми:

Пробірки	Фермент	Субстрат
	Амілаза (1 мл слини 1: 5)	1 мл 1% крохмаль
	Амілаза (1 мл слини 1: 5)	1 мл 0,5% сахароза
	сахарази (1 мл витяжки з дріжджів)	1 мл 0,5% сахароза
	сахарази (1 мл витяжки з дріжджів)	1 мл 1% крохмаль

Всі пробірки поміщають на 15 хвилин у водяну баню (37 °).

З кожної пробірки проробляють реакцію Фелінга. Додають по 1 мл реактиву Фелінга і нагрівають до кипіння. За результатами роблять висновок про виборчу дії ферментів на субстрат.

Висновок:______________________________________________________

_______________________________________________________________

________________________________________________________________

Робота 3. Вплив рН середовища на активність амілази.

Принцип: Оптимум рН для амілази визначається по максимальному розщепленню крохмалю, яке визначається реакцією з йодом.

Техніка роботи.

Спочатку готують буферні розчини за схемою:

Пробірки	мл 0,2 М Na₂HPO₄	мл 0,1 М лимонної кислоти	рН розчинів
	0,63	0,37	6,0
	0,69	0,31	6,4
	0,77	0,23	6,8
	0,87	0,13	7,2
	0,94	0,06	7,6
	0,97	0,03	8,0

У кожну пробірку вносять по 1 мл 0,5% крохмалю і по 1 мл слини, розведеної в 50 разів (в циліндр внести 1 мл слини і 49 мл Н2О). Вміст пробірок перемішують і ставлять на водяну баню на 10 хв (37 °). Потім у всі проби додають по 1-2 краплі йоду, перемішують. Спостерігають фарбування і відзначають значення рН, при якому відбулося розщеплення крохмалю. Навести графік залежностіактивності ферменту від pH

Висновок:______________________________________________________

_______________________________________________________________

________________________________________________________________

Графік залежності активності ферменту від pH

Робота 4. Вплив активаторів та інгібіторів на активність амілази. Принцип: Вплив факторів (активаторів або інгібіторів) на активність амілази визначається за ступенем розщеплення крохмалю в їх присутності (по реакції з йодом).

Техніка роботи.

У три пробірки вносять по 1 мл розведеної слини (1:50, попередній досвід). У 1-у додають 2 краплі Н₂О (контроль), в 2-у - 2 краплі 1% NaCl, в 3-ю - 2 краплі 1% CuSO4. У кожну пробірку додають по 5 крапель 1% розчину крохмалю. Всі три пробірки поміщають у водяну баню (37 °) на 5 хв. Потім в кожну пробірку додають по 1-2 краплі йоду, перемішують. Відзначають пробірку, в якій відбулося максимальне розщеплення крохмалю, роблять висновок про вплив ефекторів на активність амілази.

Висновок:______________________________________________________

_______________________________________________________________

________________________________________________________________