Определение содержания медиборола в масляном растворе методом вэжх

Шелехова В.А.,¹ Пустовойтов А.В.²,Мордвинова Н.М.³

¹Сибирский государственный медицинский университет,

Томск, Россия.

Аспирант 2г.

[email protected]

²ООО «Сибтест» Национального исследовательского Томского политехнического университета, Томск, Россия. Молодой ученый.

³ООО «Сибтест» Национального исследовательского Томского политехнического университета, Томск, Россия. Молодой ученый.

Научный руководитель: Краснов Е.А.

В настоящее время существуют методики определения содержания фармакологически активного вещества медиборола (2,6-диизоборнил-4-метилфенола) в масляных растворах с помощью УФ-спектрофотометрии, которые основаны на методе Фирордта и позволяют определять медиборол в присутствии компонентов масел персикового и оливкового [1, 2]. Но при их использовании погрешности в измерениях оптической плотности могут привести к значительному снижению точности анализа. Однако метод ВЭЖХ, объединяющий в одном эксперименте пробоподготовку и анализ, лишен этого недостатка. Поэтому цель данного исследования – разработать и провести валидацию методики количественного определения медиборола в масляном растворе с помощью ВЭЖХ.

В работе был использован высокоэффективный жидкостной хроматограф Милихром А-02 (Россия), снабженный УФ-детектором и колонкой ProntoSIL-120-5-С-18 AQ DB-2003 (размер 2×7,5 мм, 5 мкм). Температура термостата колонки – 40°С, скорость потока ‑ 100 мкл/мин. Подвижная фаза: изопропанол и вода. Объем вводимой пробы 20 мкл. УФ-детектирование осуществляли при длине волны 282 нм, которая соответствует максимуму поглощения медиборола в подвижной фазе. Приготовление образцов осуществлялось путем растворения точной навески масляного раствора медиборола в смеси изопропанола и воды 9:1.

Валидацию проводили согласно официальным рекомендациям [3, 4, 5]. Оценку разработанной методики осуществляли по следующим параметрам: специфичность, линейность, правильность, внутренняя (повторяемость) и промежуточная прецизионность, пригодность хроматографической системы и робастность.

Времена удерживания медиборола, возможных примесей медиборола (п-крезола и 2-изоборнил-4-метилфенола), компонентов масла не совпадают, что свидетельствует о высокой специфичности методики. Правильность находится в пределах от 98,44 до 102,05%. Относительная погрешность определения медиборола составляет от 0,81 до 0,94% в разные дни измерения. Зависимость истинного от найденного значения содержание медиборола в диапазоне концентраций 16,00 – 24,00 мг/мл имеет линейный характер с коэффициентами корреляции R²=0,99964 и уравнением регрессии y=1,0065*x-0,094. Поэтому данный интервал концентраций можно характеризовать как аналитическую область методики. Робастность оценивали путем изменения хроматографических параметров (скорости потока и температуры). На основании полученных экспериментальных данных было выявлено, что параметры системы практически не подвержены влиянию небольших изменений в хроматографических условиях, кроме времени удерживания и коэффициента емкости пика медиборола. Пригодность хроматографической системы соответствует требованиям FDA USA [3].

Таким образом, разработанная методика позволяет определять содержание медиборола в масляном растворе с малой погрешностью. Другими достоинствами методики являются доступность, простота и возможность определения медиборола без предварительного отделения компонентов масла.

Литература:

[1] Краснов Е.А., Шелехова В.А. Бюллетень сибирской медицины 10 (5), 145-149 (2011)

[2] Шелехова В.А., Плотников М.Б., Краснов Е.А. Журнал Сибирского федерального университета. Химия 2 (4), 183-190 (2011)

[3] FDA (1994) Center for Drug Evaluation and Research. Reviewer Guidance: Validation of Chromatographic Methods, Rockville, MD.

[4] ICH (1995) International Conference on Harmonization of Technical Requirements for Registration of Pharmaceuticals for Human Use, Guideline for Industry. Text on Validation of Analytical Procedures (Q2A).

[5] ICH (1996) International Conference on Harmonization of Technical Requirements for Registration of Pharmaceuticals for Human Use, Guideline for Industry. Validation of Analytical Procedures: Methodology (Q2B).