Определение баклофена хроматографическими методами
Азнаева М.Р.,1 Дукова О.А.2
1Сибирский федеральный университет,
Красноярск, Россия.
Аспирант 2г.
2Сибирский федеральный университет, Красноярск, Россиия. Аспирант 3г.
Научный руководитель: Калякина О.П.
Проблема злоупотребления наркотическими веществами, а также средствами, оказывающими подобное действие на организм, приобретает все большие масштабы и начинает угрожать государственной безопасности Российской Федерации [1]. Особую озабоченность в последнее время вызывает злоупотребление лекарственными препаратами, оказывающими обезболивающее, а также снотворное и седативное действие. Одним из таких веществ является баклофен [2].
Баклофен по своей химической структуре сходен с производными γ-аминомасляной кислоты. Активным действующим веществом в препарате «Баклофен» является 4-амино-3-(пара-хлорфенил)-маслянная кислота [3].
Существующие методики определения предусматривают использование дорогостоящих и труднодоступных реагентов и детекторов и сложны для рутинного анализа.
В судебной и клинической токсикологии для рутинного скрининга (нецелевого поиска) наркотических и лекарственных веществ в биологических жидкостях широко используют метод газовой хроматографии с масс-селективным детектором, но при использовании стандартных методик скрининга баклофен не определяется.
Целью данной работы являлась разработка экспрессных, чувствительных и простых методик идентификации и количественного определения баклофена.
В качестве объектов исследования были выбраны таблетки баклофена «POLPHARMA SA» (10 мг), а так же образцы мочи, предварительно проверенные на отсутствие лекарственных веществ, предоставленные КГБУЗ «Красноярское краевое бюро судебно-медицинской экспертизы».
Исследование проводили на газовом хроматографе Agilent Technologies 6890N (USA) с масс-селективным детектором с использованием кварцевой капиллярной колонки EVDX-5MS, 0,2 мм × 25 м × 0,33 мкм.
Ионохроматографическое определение проводили на высокоэффективном жидкостном хроматографе LC-20 Prominence (Shimadzu, Japan) с разделяющей колонкойКанК-Аст (120×5 мм, зернение 14 мкм, емкость 2,5 мэкв/мл) и подавительной колонкойКУ-2 (200×6 мм, зернение 100-200 мкм, емкость 12 мкэкв/мл).
При хромато-масс-спектрометрическом определении баклофена в модельном растворе минимально определяемая концентрация составила 100 мкг/мл. Для уменьшения полярности функциональных групп в молекуле баклофена была проведена дериватизация с уксусным ангидидом. При определении баклофена в виде ацетилированного производного минимально определяемая концентрация составила 2,0 мкг/мл. Установлено, что для ацетилированного производного характеристическими являются ионы со значениями m/z 138, 103, 237.
При определении баклофена в моче после дериватизации с уксусным ангидридом, обнаружено, что баклофен ацетилируется не полностью, и на хроматограмме наблюдается два пика: 4-(пара-хлорфенил)-пирролидин-2-он и ацетат 4-(пара-хлорфенил)-пирролидин-2-она. Минимально определяемая концентрация баклофена в моче составляет 50 мкг/мл.
Рассмотрена возможность применения метода ионной хроматографии для количественного определения баклофена, так как по литературным данным при высоких значениях рН (>10) большинство молекул баклофена находятся в виде аниона (рК=9,6) [4].
Для увеличения чувствительности ионохроматографического определения предложено предварительно перевести 4-амино-3-(пара-хлорфенил)-масляную кислоту в натриевую соль. При определении баклофена в виде натриевой соли наблюдается увеличение аналитического сигнала, предел обнаружения при кондуктометрическом детектировании составляет 120 мкг/мл, при спектрофотометрическом – 30 мкг/мл.
Показана возможность качественного определения баклофена в моче при скрининге в виде ацетилированного 4-(пара-хлорфенил)-пирролидин-2-она методом газовой хроматографии с масс-селективным детектором. Характеристические ионы ацетилированного производного баклофена: m/z 138, 103, 237.
Методом ионной хроматографии возможно количественное определение баклофена. Предел обнаружения составляет 30 мкг/мл.
Литература:
[1] Веселовская, Н.В., Ковалекко Н.И. Наркотики - М.: Триада-Х, 2000, 204 с.
[2] Киреева А.В., Зеленцова А.Б., Сайгушкин Н.В., Ваталев А.А., Волченко С.В., Куклин В.Н. Ж. Судебно-медицинская экспертиза 51, 23–26 (2008)
[3] Мюллер, Р.К. Токсикологический анализ. – M.: Наука, 1995, 562 с.
[4] European Pharmacopoeia 6th Edition, Supplement 6.1. – Strasbourg: European Directorate for the Quality of Medicines, 2007, 310 p.