Метод перфузии изолированных органов

РАСПРЕДЕЛИТЕЛЬНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ

Хроматография на бумаге: образец помещается на одном конце бумажной полосы, и этим же концом бумагу погружают в смесь органических растворителей и дают возможность растворителю в силу полярности двигаться по бумаге. Проявленную хроматограмму высушивают и местонахождение каждого из разделяемых веществ определяют химическим путем.

разделительные вещества

Х ---------- образец

растворитель

ИОННООБМЕННАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ

В зависимости от ряда разделимых белков используют неуходящую или обменную смолу, с функциональными группами которой обменивается часть белков и задерживается на ионах, в то время как другие беспрепятственно вытесняются из колонии.

ХРОМАТОГРАФИЯ ПО СРОДСТВУ

Основана на принципе избирательного взаимодействия белков (или других макромолекул) с лигандами, закреплёнными на носителе. Достоинство этого метода в том, что он позволяет выделить заданный белок с высокой степенью чистоты.

ГЕЛЬ – ФИЛЬТРАЦИЯ

При обработке дестрана эпихлорэнгидридом образуются гидрофильные зёрна (сефадексы). Благодаря большому сродству к воде, они сильно набухают, образуя гель. Зёрна сефадекса в этом состоянии непроницаемы для веществ с большой М, в то время как небольшие молекулы легко дифундируют.

МЕТОД ДВОЙНЫХ ОБРАТНЫХ ВЕЛИЧИН

Если существует равенство между двумя какими-либо величинами, то и обратные величины тоже будут равны. Этот метод применяется в энзимологии.

МЕТОД ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОГО ЦЕНТРИФУГИРОВАНИЯ

Для этого сначала разрушают клеточную структуру с помощью дезинтегратора и полученную гомогенную массу подвергают дифференциальному центрифугированию.

При этом выделяют несколько фракций:

1. при низкой скорости - фракция ядер

2. при средней скорости - фракция митохондрий

3. при высокой скорости - фракция рибосом

4. оставшаяся жидкость - фракция цитоплазмы

С помощью этого метода была установлена внутриклеточная локализация ферментов.

МЕТОД МЕЧЕНЫХ АТОМОВ

Обычно используются либо стабильные изотопы элементов, которые отличаются по массе от элементов организма, либо радиоактивные изотопы.

Пометив при помощи стабильного или радиоактивного изотопов молекулу исследуемого соединения введя его в организм определяют затем меченые атомы и сканируют их в определенных соединениях, делают заключение путем превращения меченого вещества в организме. С помощью этого метода мож – но определить время пребывания вещества в организме по времени полураспада радиоактивного про – тона. Изотопы применяются так, чтобы установить, является ли данное вещество или продуктом ра – спада другого соединения. Например, при существовании нескольких путей обмена веществ можно оп –

ределить, какой из них преобладает.

МЕТОД ПЕРФУЗИИ ИЗОЛИРОВАННЫХ ОРГАНОВ

При удалении органов имеется два объекта исследования: доступные органы и изолированный орган. В частности путем изучения перфузанта в опытах с изолированными органами было установлено, что печень служит главным местом образования кетоновых тел и мочевины.

МЕТОД ТКАНЕВЫХ СРЕЗОВ

Получив тонкие срезы, их помещают в жидкофазную среду, содержащую те или иные соеди –

нения и при определенной температуре и составе газовой среды исследуют образующиеся при этом продукт. С помощью этого метода можно изучать тканевое дыхание.

МЕТОД “ ОТПЕЧАТКОВ ПАЛЬЦЕВ “

Используют при определении соседства или различия гомологичных белков в первичной струк – туре. Белок инкубируют с помощью протеолитического фермента. При этом образуется смесь коротких пептидов, легко различимых методом хроматографии в одном направлении, и путем электрофореза - в другом. Затем определяют последовательность аминокислот в каждом выделенном пептиде.