Микроскопическое исследование ликвора

Микроскопическое исследование ликвора предусматривает определение цитоза, то есть количества лейкоцитов в единице объема и дифференциацию клеточных элементов. Микроскопию следует проводить как можно скорее после взятия жидкости (в течение 30 минут), так как клетки в ней быстро разрушаются.

Подсчет цитоза производится аналогично счету клеток крови в счетной камере. Но поскольку клеток в ликворе значительно меньше, для их счета пользуются камерой большего объема – Фукса-Розенталя (емкость 3,2мкл). По этой же причине жидкость не разводят, а только добавляют к ней 1/10 объема краски для разрушения эритроцитов и подкрашивания клеточных ядер.

Унифицированный метод подсчета количества форменных элементов в ликворе

Принцип. Подсчитывают количество лейкоцитов в счетной камере Фукса-Розенталя после разрушения эритроцитов.

Реактив: 10% раствор уксусной кислоты, подкрашенный метиловым фиолетовым (ледяная уксусная кислота 5мл, вода до 50мл + метиловый фиолетовый 0,1мл).

Специальное оборудование: микроскоп, камера Фукса-Розенталя, смесители для подсчета лейкоцитов (меланжеры).

Ход исследования. В меланжер (смеситель) для лейкоцитов набирают раствор уксусной кислоты до метки «I», затем до метки «II» набирают ЦСЖ. Раствор уксусной кислоты разрушает эритроциты, а метиловый фиолетовый подкрашивает лейкоциты в синий цвет, что облегчает их подсчет. Встряхивают меланжер, перемешивая содержимое. Предварительно выпустив первую каплю, заполняют содержимым меланжера счетную камеру Фукса-Розенталя и считают лейкоциты по всей сетке (в 256 квадратах) при малом увеличении микроскопа (окуляр 15 Х, объектив 8Х).

Расчет количества лейкоцитов в 1мкл ведется по формуле:

Х = , где А – количество подсчитанных лейкоцитов в камере Фукса-Розенталя.

Примечание. При отсутствии смесителя допускается смешивание ликвора с реактивом на часовом стекле: 10 капель ликвора и 1 капля реактива. После тщательного перемешивания полученной смесью заполняют камеру.

Подсчитывать количество форменных элементов в ликворе можно также с реактивом Самсона, который красит медленнее – 10-15 минут, но дает более отчетливую картину. Состав реактива Самсона: фуксин (спиртовой раствор 1:10) 2,5мл; ледяная уксусная кислота 30,0мл; карболовая кислота 2,0г; вода дистиллированная до 100мл. Ход исследования и расчет, как в унифицированном методе.

Цитоз в норме. Содержание лейкоцитов в ЦСЖ, полученной при люмбальной пункции, в норме составляет 0-5 клеток в 1мкл, или 0-5·106/л. Цитоз ликвора из желудочков мозга0-1/мкл. У детей цитоз выше, чем у взрослых. С возрастом он постепенно падает.

Клиническое значение. Увеличение количества клеточных элементов в ЦСЖ (плеоцитоз) наблюдается при воспалительных процессах мозговых оболочек и органических поражениях вещества мозга (опухоли, абсцесс, сифилис), а также при травмах, кровоизлияниях и др. Максимальный плеоцитоз – до 2000-5000·106/л бывает при гнойном менингите и абсцессе мозга.

Количество эритроцитов в ликворе подсчитывают в счетной камере Горяева так же, как в крови. Для этого ЦСЖ с примесью крови разводят в 10 раз 0,9% раствором хлорида натрия (0,2мл раствора + 0,02мл ликвора). Количество эритроцитов в 1мкл ЦСЖ определяют, умножая число эритроцитов, подсчитанных в пяти больших квадратах камеры Горяева, на 500. Эритроциты могут быть обнаружены и в прозрачной бесцветной жидкости - при содержании менее 700 эритроцитов в 1мкл спинномозговой жидкости её цвет не меняется. 900-1000 эритроцитов в 1мкл придают жидкости опалесценцию; при наличии 2000 эритроцитов появляется едва заметное розовое окрашивание; при наличии 4000-5000 эритроцитов жидкость приобретает явно красный цвет. Для диагностики внутричерепного кровотечения имеет значение не только количество эритроцитов, но и нарастание их числа при повторном исследовании спинномозговой жидкости.

ХИМИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ

Ликвор имеет сложный биохимический состав. Он содержит белки, аминокислоты, витамины, ферменты, гормоны, минеральные вещества. Спинномозговой жидкости свойственно постоянство химического состава с незначительным содержанием белка.

Белок. В норме содержание белка в ликворе, полученном при люмбальной пункции, составляет 0,2-0,3 г/л. Максимальное увеличение количества белка характерно для венозного застоя в ЦНС, особенно при сочетании застоя с нарушением циркуляции жидкости, что наблюдается при опухолях спинного мозга (до 20г/л и более). Значительное повышение белка в ликворе бывает при субарахноидальных кровоизлияниях. При воспалительном процессе оболочек мозга количество белка также увеличивается, но не в такой степени, как при застойной жидкости.

Для выявления повышенного содержания белка в ликворе используется реакция Панди (качественная проба на белок).

Определение глобулинов осаждением с карболовой кислотой (реакция Панди)

Принцип. Реакция основана на осаждении глобулинов насыщенным раствором карболовой кислоты.

Реактив: насыщенный раствор карболовой кислоты. 100г карболовой кислоты растворяют в 1л воды, встряхивают и оставляют стоять вначале в термостате при 37˚С на 6-8 часов, а затем при комнатной температуре 7 дней. Сливают надосадочную жидкость, которая используется в качестве реактива.

Ход исследования. На часовое стекло или стекло с лункой, помещенное на черную бумагу, наливают 1мл реактива и по краю наслаивают 1-2 капли ликвора.

Оценка результатов. В случае положительного результата в месте соприкосновения реактива с ликвором образуется молочно-белое облачко, переходящее в муть. Для обозначения результатов пробы Панди пользуются системой четырех плюсов: слабая опалесценция 1+, заметная опалесценция 2+, умеренное помутнение 3+, значительное помутнение 4+.

Количественное определение белка в ЦСЖ проводят унифицированным методом с 6% сульфосалициловой кислотой.