Использование физико-химических методов в анализе биофлавоноидов и фенолкарбоновых кислот в лекарственном растительном сырье
Островская А.М.
Белорусский государственный университет,
Минск, Беларусь.
Молодой ученый.
Научный руководитель: Бирюкова Н.М.
Определение содержания биофлавоноидов в растительном материале часто может быть сопряжено с определёнными трудностями. В зависимости от поставленных задач необходимо применение различных подходов на стадиях изучения состава лекарственного растительного сырья и его стандартизации, на этапе разработки состава новых препаратов, а также на всех стадиях технологического процесса производства готовых лекарственных форм. Целью данной работы был анализ биофлавоноидов и фенолкарбоновых кислот в лекарственном растительном сырье (ЛРС) с применением физико-химических методов анализа, таких как бумажная хроматография и спектрофотометрия, наиболее часто применяемых в анализе ЛРС, а также оценка возможности применения метода ВЭЖХ для решения поставленной задачи. В качестве объектов исследования были выбраны Bupleurum aureum (володушка золотистая) и Bupleurum rotungifolium L. (володушка крупнолистная). Данная работа является частью проводимых в НИИ ФХП БГУ совместно с ГНУ «Центральный ботанический сад НАН Беларуси» исследований по созданию новых отечественных фитопрепаратов для отоларингологии, офтальмологии и стоматологии на основе ЛРС.
Химический анализ образцов на содержание отдельных групп фенольных соединений проводился с использованием следующих методов: суммарное количество антоциановых пигментов – по методу [1]; суммарное количество катехинов – по методу [2] с использованием ванилинового реактива; суммарное количество флавонолов – по методу [3], модифицированному [4]; суммарное количество фенолкарбоновых кислот – по методу [5] (табл. 1).
Таблица 1. Содержание отдельных групп фенольных соединений в образцах володушки золотистой (образец №1) и володушки крупнолистной (образец №2).
| Показатели | Образец №1 | Образец №2 |
| Сумма антоциановых пигментов, % | 0,59±0,01 | 0,46±0,02 |
| Катехины, % | 0,41±0,01 | 0,31±0,02 |
| Флавонолы, % | 3,15±0,03 | 1,73±0,01 |
| Фенолкарбоновые кислоты, % | 0,68±0,04 | 0,77±0,02 |
Методом ВЭЖХ проводилась качественная и количественная идентификация состава агликонов флавоноидов и хлорогеновой кислоты [6]. В ходе исследования были подобраны оптимальные условия проведения анализа и достигнута высокая степень воспроизводимости результатов. Идентификация проводилась путём сопоставление времен удерживания сигналов веществ на хроматограммах анализируемых образцов со временем удержания сигналов стандартных образцов флавоноидов, а также по анализу УФ-спектров. Было достоверно идентифицировано четыре агликона флавонолов: кверцетрин (Rt = 4,977 мин), кверцетин (Rt = 7,34 мин), кемпферол (Rt = 12,509 мин), изорамнетин (Rt = 14,007 мин), а также хлорогеновая кислота (Rt = 4,204 мин). В УФ спектрах поглощения присутствовали полосы поглощения с λмакс.= 260 и 362 нм, характерные для кверцетрина; λмакс.=257 и 375 нм – для кверцетина; λмакс.= 218, 253, 266, 294, 322, 367 нм – для кемпферола; λмакс.= 253, 370 нм – для изорамнетина; λмакс.= 221, 247 и 370 нм – для хлорогеновой кислоты. Хроматограммы обоих образцов характеризовались одним и тем же флавоноидным составом, что свидетельствует в пользу того, что данные образцы относятся к одному виду Bupleurum. По площадям пиков было рассчитано количественное содержание кверцетина, кверцетрина, кемпферола, изорамнетина и хлорогеновой кислоты в обоих образцах. Максимальным было содержание кверцетина (1,16±0,01 и 0,45±0,02 для образцов №1 и №2 соответственно), а минимальным – содержание кверцетрина (0,28±0,01 и 0,17±0,01 для образцов №1 и №2 соответственно). Данные ВЭЖХ анализа позволили достоверно идентифицировать индивидуальные полифенольные соединения и установить их количественное содержание, что имеет большое значение на стадии детального изучения ЛРС и установления возможности включения его в состав лекарственных препаратов.
В данной работе для анализа одного и того же объекта были применены различные физико-химические методы анализа, которые позволили получить взаимодополняющую информацию об объекте исследования. Таким образом, при стандартизации данного ЛРС и на различных стадиях производственного процесса может быть применён один из вышеописанных физико-химических методов или же их комбинация в зависимости от поставленной аналитической задачи.
Литература:
[1] Swain T., Hillis W. J.Sci. Food Agric. 10 (1), 63-68 (1959)
[2] Запрометов М.Н. Биохимия катехинов. – М.: Наука, 1964, с. 325.
[3] Сарапуу Л. Мийдла Х. Уч. Зап. Тарт. Гос.ун-та, 111-113 (1971)
[4] Шапиро Д.К., Дашкевич Л.Э., Довнар Т.В. Интродукция растений и зеленое строительство. – Минск, 1974, с. 209-213.
[5] Мжаванадзе В.В., Таргамадзе И.Л., Драник Л.И. Сообщ. АН Груз СССР. 63, 205-210 (1971).
[6] Васильева М.С., Высочина Г.И. Растительный мир Азиатской России. 5(1), 87-94 (2010).