Построение градуировочного графика

В 6 конических колб вместимостью 100 см³ вносят пипеткой по 25 см³ щелочного раствора гексацианоферрата (III) калия по 7,0; 7,5; 8,0; 8,5; 9,0; 9,5 см³ стандартного раствора глюкозы. Дистиллированной водой из бюретки доводят объем жидкости в каждой колбе до 41 см³. Содержимое колб доводят до кипения за 3 мин и кипятят в течение 1 мин, закрыв каждую часовым стеклом. Затем охлаждают и измеряют оптическую плотность на ФЭК со светофильтром, имеющим lэф = 440 нм (синий светофильтр). Раствором сравнения служит дистиллированная вода. Кювету подбирают такого размера, чтобы оптическая плотность была в пределах 0,3-0,6 для раствора, содержащего 8,5 см³ раствора глюкозы (10, 20 или 30 мм). Оптическую плотность определяют в каждом растворе не менее 3 раз и из полученных данных берут среднее арифметическое значение. Строят график зависимости величины оптической плотности от концентрации глюкоза в растворе. Полученный график используют для определения содержания общего сахара, восстанавливающих сахаров и сахарозы.

Определение восстанавливающих сахаров

В коническую колбу вместимостью 100-150 см³ вносят 10 см³ раствора пробы, 6 см³ дистиллированной воды и затем 25 см3 щелочного раствора гексацианоферрата калия. Колбу нагревают до кипения за 3 мин, кипятят 1 мин, охлаждают и измеряют оптическую плотность при l=440 нм. Раствор сравнения – дистиллированная вода. Кювету берут размером, аналогичным взятому для построения градуировочного графика. Если оптическая плотность раствора не попадает в интервал 0,3-0,6, необходимо взять меньшую пробы или поменять разведение, сохраняя постоянный объем жидкости в реакционной колбе, равным 41 см³. Результаты вычисляют, пользуясь градуировочным графиком и приведенной формулой.

Определение общего сахара

Для определения общего сахара проводят гидролиз сахарозы. В реакционную коническую колбу вместимостью 100-150 см³ отмеряют пипеткой 10 см³ приготовленной вытяжки объекта и 4 см³ 1М раствора хлороводородной кислоты. Колбу ставят на плитку, жидкость доводят до кипения и кипятят 1 мин, охлаждают до комнатной температуры, затем в колбу вносят 2 см³ 2М раствора гидроксида натрия (или калия) для нейтрализации кислоты и 25 см³ щелочного раствора гексацианоферрата (III) калия. Содержимое колбы доводят до кипения и кипятят 1 мин. После охлаждения заполняют полученным раствором кювету и определяют оптическую плотность. Так как при значении оптической плотности в интервале 0,3-0,6 получаются более точные результаты, то при других значениях оптической плотности анализ повторяют, изменив объем вводимой водной вытяжки объекта исследования, добавив такое количество воды, чтобы общий объем составлял 10 см³.

Содержание сахара (Х_рс) в процентах, выраженное в глюкозе, вычисляют по формуле:

Х_рс = , (4.11)

где М – количество глюкозы, найденное по градуировочному графику, мг; V– объем исследуемого раствора, приготовленного из навески. м³; V₁ – объем раствора, взятый для реакции с гексацианоферратрм калия, см³; m – масса навески объекта исследования, мг.

Для определения содержания общего сахара, выраженного в сахарозе, результат полученный по формуле, умножают на 0,95. Если калибровку проводят с использованием раствора гидролизованной сахарозы, результат сразу вычисляют в % сахарозы. Для расчета содержания сахарозы из данных анализа общего сахара, выраженного в глюкозе, вычитают результат анализа содержания восстанавливающих сахаров и разницу умножают на коэффициент 0,95.