Методы исследования гемостаза

Методы исследования коагуляционного гемостаза значительно различаются по принципу исследования и возможностям визуальной и автоматизированной оценки результатов. Современная аппаратура для исследования свертывания крови основана, как правило, на 4 основных методах.

Турбидиметрический метод.

Образование фибрина под действием тромбина проявляется повышением мутности исследуемого образца, что детектируется фотометром.

Кинетический метод.

Конечный результат определяется по скорости изменения оптической плотности. Исследуемая плазма инкубируется с ферментом, и остаточная ферментативная активность определяется в реакции с хромогенными субстратами. Концентрация исследуемого вещества прямо или косвенно пропорциональна скорости гидролиза субстрата и выражается средним изменением плотности в минуту.

Метод конечной точки.

В этом методе гидролиз хромогенного субстрата останавливается уксусной кислотой. В момент такой остановки оптическая плотность пропорциональна концентрации исследуемого вещества и выражается в единицах экстинции.

Метод фиксированной оптической плотности.

Тромбин, участвуя в реакции гидролиза субстрата, обуславливает изменение цвета исследуемого образца. Результатом является время между началом исследования и моментом, когда оптическая плотность образца достигает 0,1 единицы оптической плотности.

Преаналитический этап исследований гемостаза.

Для исследования системы гемостаза в биохимических исследованиях используют плазму, получаемую из венозной крови.

Подготовка обследуемых:

· Забор крови делают утром с 8 до 10 часов и натощак.

· Исключить физическое перенапряжение и эмоциональное возбуждение (дать обследуемому 15 минут отдохнуть).

· Исключить курение и прием алкоголя непосредственно перед обследованием.

· Первые 5-6 капель выпускают на ватный тампон, т.к. они могут содержать тканевой тромбопластин.

· До центрифугирования пробирки ставят в ледяную баню (кроме исследования функции тромбоцитов).

· Интервал времени между забором крови и исследованием существенно сказывается на многих параметрах коагулограммы (1-3 часа), поэтому в результатах анализа указываю время забора крови и начала исследования.

· Пробирки лучше использовать стеклянные силиконированные (для уменьшения контактной активации гемостаза) или пластиковые.

· Если гематокритный показатель близок к нормальному (40 - 45 %), то соотношение крови и антикоагулянта должно составлять 9 : 1. Если гематокрит не в норме, то соотношение расчитываю по формуле:

Р_X = Р (100 – Н) : (595 – Н), мл.

Р – нужное количество крови.

Н – гематокритный показатель в %.

· Взятие крови целесообразно проводить не в одну пробирку, а дробно – в несколько пробирок с соответствующей расфосовкой антикоагулянта – стабилизатора.

· В качестве антикоагулянта используют 3,8 % раствор цитрата натрия или тринатрийцитрата, т.к. в цитратной крови (плазме) лучше сохраняются лабильные факторы свертывания крови и тромбоциты.

· Ацетилсалициловая кислота, нестероидные противовоспалительные средства, пенициллин, стрептокиназа, урокиназа увеличивают время кровотечения.

Получение биологического материала для гематологических исследований.

Получение стабилизированной крови.

В пробирку набирают антикоагулянт и кровь в рассчитанном соотношении. Немедленно перемешивают, не допуская образования воздушных пузырей. Ставят пробирку до центрифугирования в ледяную баню.

Получение плазмы крови богатой тромбоцитами (тромбоцитарная).

Стабилизированную кровь центрифугируют при 1000 – 1500 об/мин в течении 5-7 минут и собирают супернатант.