Лабораторная работа 5. Ксантопротеиновая реакция

Ксантопротеиновая реакция открывает наличие в белках циклических аминокислот — фенилаланина, тирозина, трипто­фана, содержащих в своем составе бензольное кольцо.

Большинство белков при нагревании с концентрирован­ной азотной кислотой дает желтое окрашивание, переходя­щее в оранжевое при подщелачивании. Например:

Примечание. В зависимости от количества прибавленной азотной кислоты может образовываться и смесь динитро- и нитротирозина.

Реакция обусловле­на нитрованием бензольного кольца этих аминокислот с об­разованием нитросоединений желтого цвета.

Далее продукты нитрования реагируют с едким натром или гидроксидом аммония с образованием натриевой со­ли или аммонийной соли, имеющей желто-оранжевую окраску.

Ксантопротеиновую реакцию, кроме белков, пептидов и циклических аминокислот, дают также многие простые аро­матические соединения (бензол).

1 Цель работы – провести качественную реакцию на циклические аминокислоты

Приборы и материалы

Водяная баня

Электроплитка

Белок 1 %

Гидролизат белка

Триптофан

Фенол

Азотная кислота (конц.)

Едкий натр 10 %

Порядок проведения работы

В 1-ю пробирку наливают пять капель 1 % раствора белка. В следующие три пробирки соответственно по пять капель гидролизата белка, пять капель фенола и две капли раствора триптофана. Во все пробирки добавляют по три капли концентрированной азотной кислоты. Все пробирки нагревают на водяной бане, появляется желтое окрашива­ние. После охлаждения в 1-ю, 2-ю и 4-ю пробирки прили­вают по каплям 10 % раствор едкого натра (10 капель) до появления оранжевого окрашивания.

Контрольные вопросы

1. Что выявляет данная реакция?

2. Какие циклические аминокислоты вам известны?

Лабораторная работа 6. Реакция на гистидин (Паули)

При взаимодействии кислого раствора сульфаниловой кислоты с нитритом натрия осуществляется реакция диазотировапия и образуется диазобензолсульфоновая кислота:

сульфаниловая п-сульфобензол

кислота диазоний

Последний, взаимодействуя с гистидином, дает соединение вишнево-красного цвета:

гистидин

2,5-бис-п-сульфобензолазогистидин

1 Цель работы – провести качественную реакцию на гистидин

Приборы и материалы

Сульфаниловая кислота 1 %

Соляная кислота 5 %

Нитрит натрия 0,5 %

Гистидин 0,01 %

Белок 1 %

Гидролизат белка

Карбонат натрия 10 %

Порядок проведения работы

В три пробирки наливают по 1 мл 1 % раствора суль­фаниловой кислоты в 5 % растворе соляной кислоты. За­тем приливают по 2 мл 0,5 % нитрита натрия, сильно встряхивают и немедленно приливают в 1-ю пробирку 2 мл 0,01 % раствора гистидина, во 2-ю – 2 мл 1 % раствора белка, в 3-ю – 2 мл гидролизата белка.

После перемешива­ния содержимого в пробирках сразу приливают по 6 мл 10 % раствора соды (карбонат натрия). Развивается интенсивная вишнево-красная окраска.

Контрольные вопросы

1. Какую аминокислоту выявляет реакция Паули?

2. В чем состоит принцип метода?