Качественные реакции на жирорастворимые витамины
ПРИНЦИП РАБОТЫ:
Витамин А.Если рыбий жир содержит витамин А, то при добавлении серной кислоты, обладающей водоотнимающим свойством, возникает фиолетово-красное окрашивание, быстро переходящее в бурое.
Витамин D. Витамин D при взаимодействии с анилиновым реактивом при нагревании окрашивается в красный цвет.
Витамин Е. Спиртовой раствор витамина Е в присутствии концентрированной азотной кислоты окисляется в хиноидное соединение, окрашенное в красный цвет.
Витамин К. Витамины этой группы обладают группы выраженным антигеморрагическим действием. Обнаруживают по цветной реакции с щелочным раствором цистеина.
РЕАКТИВЫ и ОБОРУДОВАНИЕ:
1) раствор рыбьего жира в обезвоженном хлороформе; 2) масляный раствор эргокальциферола - 1,25 г/л; 3) витамин Е, 0,1 % спиртовой раствор; 4) викасол, 0,1 % спиртовой раствор; 5) H2SO4, конц.; 6) НNO3, конц.; 7) сахароза в порошке; 8) анилиновый реактив (15 частей анилина и 1 часть концентрированной соляной кислоты); 9) хлороформ; 10) цистеин, 0,025 %; 11) NaOH, 10 %; 12) часовое стекло или чашка Петри; пробирки; пипетки обычные и глазные; держатели; спиртовки.
ХОД РАБОТЫ:
1. Качественная реакция на витамин А. На сухое стекло наносят 5 капель раствора рыбьего жира в хлороформе и 1 каплю концентрированной серной кислоты. Образуется красно-фиолетовое окрашивание.
Результат занести в таблицу 18.
2. Качественная реакция на витамин D. В сухую пробирку вносят 2 капли масляного раствора эргокальциферола, 10 капель хлороформа и 1-2 капли анилинового реактива, осторожно нагревают при постоянном помешивании. Отмечают результат реакции.
Результат занести в таблицу 18.
3. Качественная реакция на витамин Е. В сухую пробирку вносят 6 капель 0,1 % раствора витамина Е. Затем туда добавляют несколько крупинок сахарозы и 10 капель концентрированной HNO3 (осторожно по стенке пробирки!). Пробирки слегка встряхивают. Через 1-2 мин наблюдают развитие окрашивания.
Результат занести в таблицу 18.
4. Качественная реакция на витамин К. В сухую пробирку наливают 1мл 0,1% спиртового раствора викасола, добавляют 2 капли 0,025 % раствора цистеина и 2 капли 10 % раствора NaOH. Наблюдают за развитием окрашивания.
Результат занести в таблицу 18.
Таблица 18
| Определяемый витамин | Используемые реактивы | Цветовое окрашивание |
| А | ||
| D | ||
| Е | ||
| К |
Лабораторная работа №22
КАЧЕСТВЕННЫЕ РЕАКЦИИ НА ВИТАМИНЫ ГРУППЫ В
ПРИНЦИП РАБОТЫ:
Витамин В1. В щелочной среде тиамин с диазореактивом образует сложное комплексное соединение оранжевого цвета.
Витамин В2. Окисленная форма витамина В2 представляет собой желтое флюоресцирующее в ультрафиолетовых лучах вещество. Реакция на витамин В2 основана на его способности легко восстанавливаться; при этом раствор витамина В2, имеющий желтую окраску, приобретает сначала розовый цвет (за счет образования промежуточных соединений), а затем обесцвечивается (восстановленная форма витамина В2 бесцветна).
Витамин В5 (РР). Витамин РР при нагревании с раствором ацетата меди образует плохо растворимый синий осадок медной соли никотиновой кислоты.
Витамин В6.Витамин В6 при взаимодействии с раствором хлорного железа образует комплексную соль типа фенолята железа красного цвета.
РЕАКТИВЫ и ОБОРУДОВАНИЕ:
1) витамина В1, 5 %; 2) витамин В2, 0,025 % раствор (перед определением раствор можно развести в 5 раз); 3) витамин РР, 3 % раствор в 10 % растворе уксусной кислоты; 4) витамин В6, 1 %; 5) сульфаниловая кислота, 1 %; 6) NaNО2, 5 %; 7) Na2CO3, 10 %; 8) HCl, конц.; 9) металлический цинк; 10) FeCl3, 1 %; 11) (CH3COO)2Cu, 5 %; 12) сухие пробирки, держатели, спиртовки; 13) флуороскоп.
ХОД РАБОТЫ:
1. Качественная реакция на витамин В1. В пробирку к 5 каплям 1 % раствора сульфаниловой кислоты добавляют 5 капель 5 % раствора NaNО2. К полученному диазореактиву добавляют 2 капли 5 % раствора витамина В1 и 5-7 капель 10 % раствора Na2СО3 (осторожно по стенке пробирки !). На границе двух жидкостей появляется кольцо оранжевого цвета.
Результат занести в таблицу 19.
2. Качественная реакция на витамин В2. В пробирку приливают 10 капель раствора витамина В2, добавляют туда 5 капель концентрированной HCl. В пробирку опускают 1 горошинку металлического цинка. Начинается выделение пузырьков водорода, жидкость постепенно розовеет, затем обесцвечивается. Сравнивают обе формы витамина В2 по флюоресценции, поместив пробирки у флуороскопа.
Результат занести в таблицу 19.
3. Качественная реакция на витамин В5 (РР). Перед определением раствор витамина РР взбалтывают! В пробирку вносят 20 капель витамина РР. Нагревают до кипения. Взбалтывают раствор ацетата меди (!) и прибавляют 20 капель его к нагретому раствору. Содержимое пробирки доводят до кипения и охлаждают под струей холодной воды. Наблюдают выпадение осадка медной соли никотиновой кислоты.
Результат занести в таблицу 19.
4. Качественная реакция на витамин В6. В пробирку вносят 5 капель 1 % раствора витамина В6 и добавляют 5 капель 1 % раствора хлорного железа. Пробирки встряхивают. Наблюдают развитие окрашивания.
Результат занести в таблицу 19.
Таблица 19
| Определяемый витамин | Используемые реактивы | Цветовое окрашивание |
| В1 | ||
| В2 | ||
| В5 (РР) | ||
| В6 |
Лабораторная работа №23
КАЧЕСТВЕННЫЕ РЕАКЦИИ НА ВИТАМИН С
ПРИНЦИП РАБОТЫ:
Витамин С. Обнаружение аскорбиновой кислоты основано на ее способности вступать в окислительно-восстановительные реакции. Окисляясь, аскорбиновая кислота восстанавливает такие вещества, как железосинеродистый калий, метиленовый синий, молекулярный йод.
РЕАКТИВЫ и ОБОРУДОВАНИЕ:
1) аскорбиновая кислота, 1 %; 2) NaOH, 10 %; 3) HCl, 10 %; 4) железосинеродистый калий, 5 %; 5) FeCl3, 1 %; 6) метиленовый синий, 0,01 %; 7) Na2CO3, 10 %; 8) раствор Люголя (0,1 % раствор йода в растворе йодистого калия); 9) пробирки, держатели, спиртовки.
ХОД РАБОТЫ:
1. Реакция с железосинеродистым калием. В пробирку приливают 1 каплю 10 % раствора NaOH, добавляют 1 каплю 5 % раствора железосинеродистого калия. Затем прибавляют 5 капель раствора аскорбиновой кислоты. Пробирку встряхивают и добавляют в нее 3 капли 10 % раствора HCl и 1 каплю 1 % раствора FeCl3. В пробирке образуется осадок берлинской лазури.
В другой пробирке проделывают эту же реакцию с водой. Наблюдается бурое окрашивание, обусловленное образованием железосинеродистой соли окиси железа.
Результат занести в таблицу 20.
2. Реакция с метиленовым синим. В пробирку вносят 1 каплю 0,01 % раствора метиленового синего и 1 каплю 10 % раствора Na2СО3. Затем добавляют 3-5 капель раствора аскорбиновой кислоты. Нагревают на спиртовке. Происходит обесцвечивание метиленового синего. В другой пробирке проделывают эту же реакцию с водой.
Результат занести в таблицу 20.
3. Реакция с раствором Люголя. В пробирку приливают 10 капель дистиллированной воды, добавляют 2 капли раствора Люголя и 10 капель раствора аскорбиновой кислоты. Раствор Люголя обесцвечивается в результате восстановления йода до йодисто-водородной кислоты. В другой пробирке проделывают эту же реакцию с водой.
Результат занести в таблицу 20.
Таблица 20
| Аскорбиновая кислота | Вода | |
| Наблюдаемое окрашивание |
Лабораторная работа №24