Цепные свободнорадикальные реакции

Свободным радикалом – называется молекула (или ее часть), содержащая неспаренный электрон. Такая молекула реакционноспособная – она легко вступает в реакцию с белками, нуклеиновыми кислотами, липидами.

Процесс свободнорадикального окисления ненасыщенных липидов клеточных мембран называется перекисным окислением липидов (ПОЛ). Активируется перекисное окисление липидов свободными радикалами кислорода: супероксидным (Ó₂^¯), пероксидным (Ó₂), гидроксильным (ОН^¯), гидроперекисным (НÓ₂). Эти радикалы образуются в клетке при многих реакциях, в которых используется молекулярный кислород воздуха.

Кислород – мощный окислитель, химические реакции с его участием – источник энергии для всех биологических процессов в организме, но побочным эффектом этих реакций являются «оксиданты» – свободные радикалы – агрессивные обломки молекул, которым не хватает электрона. А раз на хватает, то они его отбирают – у ДНК, жиров, белков, ферментов и др. Потеряв свой электрон, эти молекулы тоже становятся агрессивными и вступают в противоестественные химические связи. В клетке наступает хаос. К высокореакционным соединениям относятся альдегиды, кетоны, которые реагируя с биомолекулами, могут привести к полному распаду клеточных мембран и клетки в целом. Чтобы этого не случилось, свободные радикалы необходимо вовремя найти и обезвредить, что и делают антиоксиданты.

Существуют ферментные и неферментные защитные механизмы. Ферментные вырабатываются в самом организме – женские половые гормоны, коэнзим Q, каталаза, глутатионпероксидаза и т.д. Неферментные – поступают с пищей, например витамин «С», селен, флавоноиды, витамин Е. важнейшим неферментным антиоксидантом является токоферол (витамин Е). этот витамин способен реагировать со свободными радикалами кислорода (Ó₂, ОН^¯, НÓ₂) и свободными радикалами жирных кислот. В реакции принимает участие ОН-группа фенольного ядра, которая способна окисляться, т.е. отдавать электрон, с образованием малоактивного свободного радикала. Чтобы вернуть витамин Е в рабочее состояние, его нужно снова восстанавливать. Этот процесс выполняет витамин «С».

Когда антиоксидантов становится слишком много, они превращаются в прооксиданты, так прооксидантное действие витамина «С» в присутствии ионов Fе²⁺ устраняется токоферолом. Следовательно, оба эти витамина следует назначать всегда вместе.

В числе известных источников антиоксидантов являются фрукты, овощи, чай. Антиоксиданты чая называются флавоноиды. В нашем организме имеется собственная система борьбы с излишним количеством свободных радикалов, однако она ослабляется под воздействием загрязнения среды, курения, прямых солнечных лучей и нуждается в поддержке. Следует также следить за питанием. Скорость производства свободных радикалов в митохондриях возрастает при переедании, когда организм должен переработать гораздо больше питательных веществ, чем ему необходимо.

_{ферментов является пиридоксальфосфат, который участвует в катализе реакций обмена аминокислот.жка роста, что обус}

Лекция № 15.

ТЕМА «ТКАНЕВОЕ ДЫХАНИЕ».

1. Состав и локализация дыхательной цепи:

а/ цитохромы, состав их молекул;

б/ роль убихинона в работе дыхательной цепи.

1. Состав и роль АТФ.
2. Окислительное фосфорилирование, его биологическая роль. Отличие от субстратного фосфорилирования.
3. Сущность хемиосмотической теории Митчелла.
4. Разобщение окислительного фосфорилирования.

ТКАНЕВОЕ ДЫХАНИЕ – это последовательность окислительно-восстановительных реакций, в результате которых происходит последовательный перенос водорода и электронов от субстрата к кислороду.

Всю систему реакций и ферментов тканевого дыхания называют дыхательной цепью.

Процесс дыхания протекает в митохондриях, которые в связи с этим называют «энергетическими станциями» клеток. Дыхательная цепь у человека и высших животных состоит из трех основных звеньев.

Первое звено – процессы дегидрирования субстратов, катализируемые преимущественно никотинамидными ферментами НАД и НАДФ.

Второе звено – процессы окисления восстановленных форм никотинамидных ферментов (НАД · Н + Н⁺ и НАДФ · Н + Н⁺), катализируемые главным образом флавиновыми ферментами.

Третье звено – процессы окисления восстановленных форм флавиновых ферментов, катализируемых системой цитохромов.

Переносчиками электронов и протонов водорода являются ферменты дыхательной цепи – оксидоредуктазы. Направление переноса протонов и электронов определяет окислительно-восстановительный потенциал – редокс-потенциал. Дыхательная цепь включает последовательно звенья с нарастающим значением окислительно-восстановительного потенциала. Для пары (НАДН + Н⁺)/НАД⁺ редокс-потенциал равен 0,32 В. Следовательно, электроны будут легко отщепляться и переносится на комплексы, имеющие меньшую отрицательную и большую положительную величину редокс-потенциала.

Соединения, последовательно принимающие и отдающие протоны и электроны, играют роль промежуточных переносчиков. Окислительные реакции протекают с высвобождением энергии, т.е. они экзэргоничные. Для биологических реакций характерны сравнительно небольшие изменения энергии. Если бы реакция протекала непосредственно между субстратом и кислородом, то вся энергия окисления высвобождалась бы одновременно. Так, реакция соединения водорода с кислородом сопровождается взрывом, так как образуется «гремучий газ», выделяется большое количество тепла. Отличием биологического окисления от этой реакции является: 1) постепенное, поэтапное выделение энергии; 2) окисляется не молекулярный водород, а водород, включенный в состав субстратов – (S · Н₂); 3) энергия высвобождается не только в виде тепла, но и аккумулируется в виде АТФ.

Биологическое окисление – процесс, в ходе которого окисляющиеся субстраты теряют протоны и электроны, т.е. являются донаторами водорода, промежуточные переносчики – акцепторами-донаторами, а кислород – конечным акцептором водорода.

Э

Э

Э

Нарисовать схему биологического окисления.

Э

Э

На последней стадии переносчик передает электроны кислороду, который восстанавливается до воды:

½ О₂ + 2е → О^¯2;

О^¯2 + 2Н⁺ → Н₂О.

Понятие биологическое окисление и тканевое дыхание однозначны, если речь идет о биологическом окислении при участии кислорода.

Такой тип окисления можно называть еще аэробным окислением. Это основной путь окисления, поставщик значительной части энергии, в которой нуждается клетка (организм). Промежуточными переносчиками в дыхательной цепи у высших организмов являются коферменты: НАД, ФАД, ФМН, Ко-Q, семейство гемсодержащих белков – цитохромов и белки, содержащие негеминовое железо. Различают цитохромы b, с₁, с, а, а₃, которые способны переносить электроны благодаря наличию в их составе ионов металла.

Все участники дыхательной цепи разделены на четыре окислительно-восстановительные системы (комплексы).

I комплекс дыхательной цепи: НАДН – убихинон – оксидоредуктаза.

Это сложный полиферментный комплекс, обладающий большой молекулярной массой. Он содержит более 20 различных белков, коферментом которых является ФМН – флавинмононуклеотид, который способен восстанавливаться, присоединяя два атома водорода (т.е. 2 протона и 2 электрона), отдаваемых пиридиновыми дегидрогеназами (НАД – зависимая дегидрогеназа). ФАД + 2Н ↔ ФАДН₂.

Кроме ФМН-зависимых ферментов, в состав I комплекса входят пять железосерных белков, которые осуществляют разделение потока протонов и электронов. При этом электроны от ФМН · Н₂ переносятся к внутренней поверхности внутренней мембраны митохондрий (обращенной к матриксу), а протоны – к внешней поверхности внутренней мембраны, здесь они выделяются в межмембранное пространство.

Субстраты (SН₂) проникают в матрикс митохондрии и подвергаются воздействию НАД⁺-зависимых дегидрогеназ:

SН₂ + НАД⁺-ДГ-аза → S + НАДН-ДГ-аза + Н⁺.

Символом SН₂ обозначаются такие субстраты, как пировиноградная кислота, изоцитрат, малат, оксипроизводные жирных кислот, глутаминовая кислота и другие аминокислоты.

Пиридиновые дегидрогеназы способны отнимать протоны и электроны у субстратов реакций, протекающих в матриксе, и передавать их первому комплексу дыхательной цепи (см. схему выше). Пиридиновые дегидрогеназы включают кофермент НАД⁺, в который входит витамин РР (производное пиридина). Окисленная форма (НАД⁺) называется пиридиниевым катионом.

В I комплексе дыхательной цепи непосредственно АТФ не образуется, а высвобождающаяся энергия аккумулируется или рассеивается в виде тепла.

II комплекс дыхательной цепи:сукцинат – убихинон – оксидоредуктаза.

Этот комплекс отличается меньшей молекулярной массой, содержит железосерные белки. С этим комплексом взаимодействует сукцинат, поступающий из матрикса митохондрий, а также жирные кислоты, которые находятся в матриксе. Коферментом комплекса является ФАД – флавинадениндинуклеотид.

В результате включения водорода субстратов через ФАД-зависимые дегидрогеназы (II комплекс) энергия в основном рассеивается в виде тепла, так как падение редокс-потенциала на этом участке дыхательной цепи незначительное (около 0,05 В) и этой энергии недостаточно для синтеза молекулы АТФ.

Убихинон (коэнзим Q) – посредник в передаче водородов. Это небольшая молекула (производное бензохинона) с длинной боковой цепью, способная свободно перемещаться как вдоль, так и поперек мембраны. Перемещаясь, молекулы убихинона захватывают протоны и электроны от комплексов I и II дыхательной цепи, а также протоны из матрикса. При этом убихинон восстанавливается.

КоQ + 2Н⁺ + 2е ↔ КоQН₂

Восстановленная форма (убихинол, КоQН₂) в свою очередь передает 2 электрона III комплексу дыхательной цепи (возможно, с участием какого-то индивидуального переносчика), а протоны при этом высвобождаются в межмембранное пространство.

III комплекс дыхательной цепи:убихинол – цитохром-с – оксидоредуктаза.

IV комплекс дыхательной цепи:цитохром-с – оксидаза.

В состав III и IV комплексов входят сложные белки – цитохромы. Цитохромы b и с₁ объединены в III комплекс дыхательной цепи. Цитохромы а и а₃ образуют IV комплекс дыхательной цепи.

Работа III комплекса заключается в транспорте электронов от убихинола на цитохрос с. Ферменты III комплекса способны захватывать из матрикса протоны и переносить их в межмембранное пространство. При этом существенно падает ОВ потенциал (от –0,04 В цитохрома «b» до +0,25 В цитохрома «с»), а высвободившейся энергии достаточно для синтеза одной молекулы АТФ.

От III комплекса электроны переносятся на IV при помощи очень подвижного фермента цитохромоксидазы (цитохром «с»). В своем составе этот фермент содержит 104 аминокислоты и одну гемподобную структуру. Такая молекула способна активно перемещаться, совершая челночные движения вдоль внешней поверхности мембраны от III к IV комплексу. Цитохром «с» при этом переносит только электроны, попеременно восстанавливаясь и окисляясь. В отличие от других цитохромов цитохромы а и а₃ содержат, помимо железа, также медь, которая меняет свою степень окисления. При этом электроны от цитохрома «с» последовательно переносятся на цитохром «а», а затем на цитохром «а₃».

Конечным акцептором электронов является молекулярный кислород воздуха. Восстановление кислорода происходит на цитохроме «а₃», обращенном к матриксу:

2е + ½ О₂ + 2Н⁺ → Н₂О или

4е + О₂ + 4Н⁺ → 2Н₂О.

Ионы Н⁺ для образования молекул воды берутся из матрикса митохондрии. Редокс-потенциал IV комплекса велик (+0,57 В), его хватит на образование 2-х молекул АТФ. Важнейшей функцией IV комплекса является также активный транспорт протонов, в связи с чем этот дыхательный комплекс ферментов получил название «протонного насоса». Протоны транспортируются в межмембранное пространство митохондрий.

Нарисовать схемы: «Дыхательная цепь» и «Трансмембранный перенос протонов и синтез АТФ в митохондриях»..

1. Дегидрогеназа НАДН₂, расположенная на поверхности мембраны митохондрии, обращенной к матриксу, отдает пару электронов на дегидрогеназу ФМН. Это позволяет ФМН принять пару протонов из матрикса с образованием ФМНН₂. Пара протонов, принадлежащих НАД, выталкивается на цитоплазматическую поверхность мембраны.
2. Дегидрогеназа ФМНН₂ выталкивает пару протонов на цитоплазматическую поверхность мембраны, а пару электронов отдает на КоQ (убихинон), который при этом получает способность присоединить пару протонов из матрикса с образованием КоQ · Н₂.
3. КоQ · Н₂ выталкивает пару протонов в цитоплазму, а электроны перебрасываются на кислород в матриксе с образованием воды. В итоге при переносе пары электронов из матрикса на цитоплазматическую поверхность перекачивается 6 протонов, что и ведет к созданию разницы потенциалов и разницы рН между поверхностями внутренней мембраны.
4. Разница потенциалов и разница рН обеспечивают движение протонов через протонный канал (фактор F₀) в обратном направлении.
5. Движение протонов ведет к активации АТФ-синтетазы (фактор F₁) и синтезу АТФ из АДФ и Н₃РО₄ (1 молекула АТФ при переносе пары протонов, соответственно 3 молекулы на 3 пары протонов или одну пару электронов).

Таким образом, работа дыхательной цепи сводится к транспорту электронов от субстрата тканевого дыхания к кислороду, а также протонов, поставляемых субстратом и матриксом митохондрий. При транспорте в связи с падением редокс-потенциала освобождается энергия и в итоге образуется вода.