Выражение результатов определения активности ферментов
Требования к материалу при определении ферментов
Кровь натощак или не ранее, чем через 4 ч. после приема пищи.
Только негемолизированная сыворотка
Быстро отделять сыворотку от сгустка крови (не позже 2 ч. с момента взятия крови).
Хранение сыворотки при комнатной температуре для большинства ферментов не более 6—8 ч., при 4°С — около одной недели, а в замороженном состоянии — в течение одного месяца. Исключение: ЛДГ (активность в течение первых трех дней лучше сохраняется при комнатной температуре)
Избегать повторных замораживаний и оттаиваний → денатурация белка, потеря ферментативной активности.
Требования к материалу при определении ферментов (продолжение)
Если определение проводится в замороженной сыворотке, оттаивание сыворотки должно производиться на водяной бане при температуре 37°С.
Сыворотка лучше, чем плазма. Если в качестве материала используется плазма - учитывать, что многие антикоагулянты могут ингибировать ферментативную активность. ЛДГ и амилаза теряет активность в "оксалатной" плазме, альдолазы – при использовании фторидов, . Фториды нельзя использовать при определении альдолазной активности. Оксалат и цитрат ингибируют амилазную активность и т.д.
Интерференция лекарств - салицилаты повышают активность аминотрансфераз, сульфаниламиды подавляют активность карбоангидразы, препараты опия могут увеличивать активность амилазы и т.д.
Выражение результатов определения активности ферментов
Единица активности (Е) фермента - количество фермента, которое катализирует превращение 1 мкмоль субстрата (или образование 1 мкмоль продукта реакции) за 1 мин при заданных условиях. При этом необходимо указывать температуру, при которой проводилась ферментативная реакция. Активность ферментов в сыворотке или плазме крови следует выражать в единицах на 1 л.
Возможно выражение результата в каталах (долях катала) на литр (1 мкат = 60 ЕД).
48. АсАТ, АлАТ, методы определения, клинико-диагностическое значение. Коэффициент де Ритиса.
АсАТ и АлАТ осуществляют межмолекулярный перенос аминогрупп между аминокислотами и кетокислотами. Отличаются по названиям аминокислоты, от которой отщепляется аминогруппа.
Содержание АсАТ в тканях (по убывающей) – сердечная мышца, печень, скелетная мускулатура, головной мозг, почки, семенники. Активность в сердечной мышце в 10000 раз выше, чем в сыворотке. В эритроцитах – в 10 раз больше, чем в сыворотке. Поэтому сыворотка не должна содержать даже следов гемолиза.
Содержание АлАТ в тканях (по убывающей)– печень, поджелудочная, сердце, скелетная мускулатура.
Методы определения: спектрофотометрические, колориметрические, хроматографические.
Норма в сыворотке: АсАТ — 10-30 МЕ/л при 30˚С; АлАТ — 7-40 МЕ/л при 30˚С.
Диагностическое значение определения АсАТ и АлАТ в сыворотке
Инфаркт миокарда ↑↑↑ АсАТ (в 2-20 раз), ↑↑ АлАТ в 98% случаев. Ч/з 6-12 час., максимум – 24-48 часов, нормализация ч/з 4-5 дней. Степень повышения коррелирует с прогнозом. При стенокардии– в норме.
Заболевания печени: ↑↑↑ АлАТ, ↑ АсАТ при поражении гепатоцитов. Максимум на 6-10 день, нормализуется на 15-20 день. ↑↑↑ АлАТ отмечается рано (уже в инкубационом периоде) и даже при безжелтушных формах.
Снижение АсАТ и АлАТ - при недостаточности пиридоксина (витамина В6), процедуры гемодиализа; ХПН, Беременность.
Коэффициент де Ритиса: АсАТ / АлАТ = 1,33.- соотношение активности сывороточных АСТ (аспартатаминотрансфераза) и АЛТ (аланинаминотрансфераза). Коэффициент де Ритиса в пределах нормальных значений (0,91-1,75) обычно характерен для здоровых людей. Однако, повышение АСТ при одновременном росте отношения АСТ/АЛТ (коэффициент де Ритиса больше 2) свидетельствует о поражении сердца, и можно с уверенностью говорить об инфаркте миокарда или ином процессе, связанным с разрушением кардиомиоцитов. Коэффициенте де Ритиса меньше 1 говорит о поражении печени. Высокие уровни ферментемии при всех видах вирусного гепатита за исключением дельта-гепатита характеризуются низким коэффициентом де Ритиса и прогностически являются неблагоприятным признаком течения болезни.
Коэффициент Шмидта: для дифференциальной диагностики заболеваний печени - АсАТ + АлАТ /ГлДГ (глютамат дегидрогеназа). При паренхиматозном гепатите ГлДГ меняется незначительно, а при механических желтухах – ↑↑↑ ГлДГ, но АсАТ + АлАТ ↑.
49. ЛДГ и ее изоферменты, методы определения, клинико-диагностическое значение.
ЛДГ— гликолитический фермент, обратимо катализирующий окисление лактата в пировиноградную кислоту.
L-лактат + НАД ↔ пируват + НАДФ + Н+
Активность в тканях: практически во всех органах, нааибольшая активность в почках, сердечной мышце, скелетной мускулатуре и печени. Много в эритроцитах.
Требования к материалу: полное отсутствие гемолиза (ЛДГ в эритроцитах ↑ в 100 раз, чем в сыворотке).
Определяют спектрофотометрическими и колориметрическими методами.
Норма в сыворотке – до 195 МЕ (при 250С).
Клиническое значение определения активности ЛДГ сыворотки крови:
Инфаркт миокарда. ↑ЛДГ спустя несколько часов после ИМ , max через 36_48 ч (в 10—15 раз по сравнению с нормой). У больных стенокардией не повышается. Диагностическая точность при трансмуральном инфаркте 97±1,7% .
Заболевания печени. ↑ЛДГ в сыворотке при поврежедении целостности гепатоцитов- паренхиматозная желтуха. При механической желтухе в начале заболевания активность ЛДГ в норме, а на более поздних стадиях ↑ ЛДГ.
Прогрессирующая мышечная дистрофия ↑ЛДГ
Активность ЛДГ возрастает также при хронических лимфогранулематозах, лейкозах, пернициозной анемии и других заболеваниях