Химические свойства аминокислот
*Реакции аминокислот в водных растворах
1. На универсальную индикаторную бумагу пипеткой наносят по 1 капле растворов глицина, глутаминовой или аспарагиновой кислоты и аргинина.
2. Отмечают развивающуюся окраску индикатора во всех трех случаях и делают заключение о реакции среды.
3. Записывают уравнения реакций, описывающих поведение данных аминокислот в водных растворах.
*Взаимодействие аминокислот с сахарами
1. В две пробирки вносят по 2 мл 5% раствора фруктозы в 2.5% растворе борной кислоты.
2. В первую пробирку добавляют 2 мл 3% раствора аргинина, а во вторую – 2 мл дистил-лированной воды.
3. В третью пробирку вносят 2 мл 3% раствора аргинина и 2 мл 2.5% раствора борной кислоты.
4. Все три пробирки инкубируют в течение 5 мин в кипящей водяной бане.
5. Отмечают различие во времени появления окраски и ее интенсивности в каждой из проб.
Разделение смеси аминокислот методом хроматографии на бумаге.
1. На полосе хроматографической бумаги отмечают линию старта (1-1.5 см от края бумаги), а также места нанесения стандартных растворов аминокислот и анализируемой смеси.
2. Микропипеткой наносят на хроматографическую бумагу по 20 мкл раствора каждой аминокислоты. Нанесение проводят в несколько приемов, следя за тем, чтобы пятно раствора не растекалось более чем на 3 мм. Каждую последующую порцию раствора наносят после полного высыхания предыдущей, что определяют по исчезновению просвечивания бумаги в точке нанесения.
3. Точки старта высушивают.
4. Параллельно готовят 20 мл растворителя, состоящего из н-бутанола, уксусной кислоты и воды в соотношении 12:3:5. К растворителю добавляют несколько кристаллов нингидрина для окрашивания хроматограммы во время проявления.
5. Растворитель заливают в хроматографическую камеру, герметично закрывают и оставляют на некоторое время для насыщения парами.
6. Бумажную полоску помещают в хроматографическую камеру. Проявление заканчивают когда фронт растворителя переместится к противоположному концу полоски (2-3 см от края).
7. Хроматограмму высушивают.
8. Определяют значения Rf аминокислот. Идентифицируют аминокислоты, содержащиеся в анализируемой смеси.
Тема II.
Качественные реакции на аминокислоты.
*Приготовление 1% раствора белка для проведения качественных реакций
1. Отделяют белок куриного яйца от желтка, считая, что масса белка в одном яйце в среднем составляет 30г, а его концентрация ~10%.
2. Белок помещают в мерный цилиндр и добавляют девятикратный объем дистиллированной воды.
3. Полученный раствор тщательно перемешивают и фильтруют через нейлоновое сито.
* Нингидриновая реакция
1. В четыре пробирки наливают 2 мл 1% раствора белка, 2 мл 0.01% раствора глицина, 2 мл 0.01% раствора b-аланина и 2 мл воды, соответственно.
2. Во все пробирки добавляют по 10 капель 0,1% раствора нингидрина.
3. Растворы перемешивают и оставляют в водяной бане при 70˚С на 5 минут.
4. Отмечают появление окраски в некоторых пробирках.
*Ксантопреновая реакция
1. В четыре пробирки наливают 1 мл 1% раствора белка, 1 мл 0.01% раствора триптофана, 1 мл 1% раствора желатина и 1 мл воды соответственно.
2. Во все пробирки добавляют по 5-6 капель концентрированной азотной кислоты и осторожно нагревают.
3. После охлаждения в пробирки осторожно (по стенке) приливают избыток 10% раствора NaOH.
4. Отмечают появление окраски в некоторых пробирках.
*Реакция Фоля
1. В три пробирки наливают 2 мл 1% раствора белка, 2 мл 0.02% раствора цистеина и 2 мл 1% раствора желатина, соответственно.
2. Во все пробирки добавляют по 1 мл 10% раствора NaOH.
3. Пробирки осторожно нагревают до кипения, кипятят в течение 2 мин.
4. Далее в каждую пробирку добавляют по 3 капли раствора Pb(CH3COO)2.
5. Отмечают появление окраски в некоторых пробирках.
*Качественные реакции на триптофан
Реакция с формальдегидом
1. В первую пробирку наливают 1 мл 0.01% раствора триптофана, во вторую – 1 мл 1% раствора белка.
2. В обе пробирки добавляют по 2 капли раствора формалина.
3. Затем осторожно по стенке пробирки наслаивают в каждую по 1 мл H2SO4 (конц.), следя, за тем, чтобы жидкости не перемешивались.
4. Наблюдают окраску растворов на границе соприкосновения жидкостей.
Реакция Адамкевича
1. В первую пробирку вносят 5 капель 0.01% раствора триптофана, во вторую – 5 капель 1% раствора белка.
2. В обе пробирки добавляют по 2 мл концентрированной CH3COOH.
3. В случае выпадения осадка пробирки осторожно нагревают до его растворения, после чего охлаждают.
4. Затем осторожно по стенке пробирки наслаивают в каждую по 1 мл H2SO4 (конц.), следя, за тем, чтобы жидкости не перемешивалась.
5. Через некоторое время наблюдают окраску растворов на границе соприкосновения жидкостей.
Реакция Гопкинса-Коле
1. В первую пробирку наливают 1 мл 0.01% раствора триптофана, во вторую – 1 мл 1% раствора белка.
2. В обе пробирки добавляют по 1 мл глиоксалевой кислоты и по 10 капель 0.04 М раствора сульфата меди (II).
3. Далее в обе пробирки приливают небольшими порциями (по несколько капель) 2 мл концентрированной серной кислоты, охлаждая пробирку каждый раз в ванночке со льдом.
4. Оставляют на 10 мин при комнатной температуре и ставят на 5 мин в кипящую водяную баню.
5. Отмечают появление окраски.