Количественное определение глюкозы

МИКРОМЕТОДОМ ХАГЕДОРНА-ИЕНСЕНА

Метод основан на реакции окисления глюкозы (и других углеводов) гексациано-(III) ферратом калия в слабощелочной среде до глюконовой кислоты. Гексациано-(III) феррат калия восстанавливается до гексациано-(II) феррата. Гексациано-(III) феррат калия берут в избытке и неиспользованный остаток его определяют иодометрически в кислой среде. К пробам прибавляют иодид калия, выделившийся иод оттитровывают тиосульфатом натрия.

Реактивы и оборудование

─ 0,045% раствор сульфата цинка.

─ 0,1 и раствор гидроксида натрия.

─ Щелочной раствор гексациано-(III) феррата калия (1,65 г K3[Fe(CN)6] и 10,6 г безводного карбоната натрия доводят водой до 1 л).

─ Реактив А (10 г сульфата цинка и 50 г хлорида натрия доводят водой до 200 мл).

─ Реактив Б (к 40 мл реактива А перед использованием добавляют 1 г иодида калия).

─ 3%-ная уксусная кислота.

─ 1%-ный крахмал.

─ 0,005 и тиосульфат натрия.

─ Колбы для титрования, воронки, баня водяная, пипетки, пробирки, вата гигроскопическая.

Ход работы

Подписывают 2 опытные и 2 контрольные пробирки и прибавляют реагенты по схеме, приведённой на с.30.

Содержание глюкозы рассчитывают по таблице на с. 31.

Затем из содержания глюкозы в опытной пробе вычитают содержание глюкозы в контрольной пробе и по найденной разности находят количество глюкозы в 100 мл крови:

x = разность * 100 / 0,1 (мг).

Схема прибавления реактивов для определения содержания глюкозы

№	Операция	Опыт	Контроль
1.	Дистиллированная вода	-	0,1 мл
2.	Сыворотка	0,1 мл	-
3.	1 мл 0,1 и NaOH и 4 мл 0,45% ZnNO4	+	+
4.	Инкубация на кипящей водяной бане	3 мин.	3 мин.
5.	Фильтрование в колбу для титрования	+	+
6.	Щелочной раствор K3[Fe(CN)6]	2 мл	2 мл
7.	Инкубация на кипящей водяной бане	15 мин.	15 мин.
8.	Охлаждение до комнатной температуры	+	+
9.	3 мл реактива Б, 2 мл 3% уксусной кислоты, 5-6 капель раствора крахмала	+	+
10.	Титрование раствором тиосульфата	+	+

Содержание отчёта

Таблица

Объём тиосульфата натрия, израсходованного на титрование	Содержание глюкозы (мг)
опытных проб	контрольных проб
		среднее			среднее	опыт	контроль	разность

Содержание глюкозы в крови равно:

Количество миллилитров 0,005 и раствора тиосульфата и соответствующее им количество миллиграмм глюкозы при использовании 2 мл 0,005 и раствора гексациано-(III) феррата калия:

	Объём раствора тиосульфата ( в мл)
	0,00	0,01	0,02	0,03	0,04	0,05	0,06	0,07	0,08	0,09
0,0	0,385	0,382	0,379	0,376	0,373	0,370	0,367	0,364	0,361	0,358
0,1	0,355	0,352	0,350	0,348	0,345	0,343	0,341	0,338	0,336	0,333
0,2	0,331	0,329	0,327	0,325	0,323	0,321	0,318	0,316	0,314	0,312
0,3	0,310	0,308	0,306	0,304	0,302	0,300	0,298	0,296	0,294	0,292
0,4	0,290	0,288	0,286	0,284	0,282	0,280	0,278	0,276	0,274	0,272
0,5	0,270	0,268	0,266	0,264	0,262	0,260	0,259	0,257	0,255	0,253
0,6	0,251	0,249	0,247	0,245	0,243	0,241	0,240	0,238	0,236	0,234
0,7	0,232	0,230	0,228	0,226	0,224	0,222	0,221	0,219	0,217	0,215
0,8	0,213	0,211	0,209	0,208	0,206	0,204	0,202	0,200	0,199	0,197
0,9	0,195	0,193	0,191	0,190	0,188	0,186	0,184	0,182	0,181	0,179
1,0	0,177	0,175	0,173	0,172	0,170	0,168	0,166	0,164	0,163	0,161
1,1	0,159	0,157	0,155	0,154	0,152	0,150	0,148	0,146	0,145	0,143
1,2	0,141	0,139	0,138	0,136	0,134	0,132	0,131	0,129	0,127	0,125
1,3	0,124	0,122	0,120	0,119	0,117	0,115	0,113	0,111	0,110	0,108
1,4	0,106	0,104	0,102	0,101	0, 099	0, 097	0, 095	0, 093	0, 092	0, 090
1,5	0,088	0,086	0,084	0,083	0,081	0,079	0,077	0,075	0,074	0,072
1,6	0,070	0,068	0,066	0,065	0,063	0,061	0,059	0,057	0,056	0,054
1,7	0,052	0,050	0,048	0,047	0,045	0,043	0,041	0,039	0,038	0,036
1,8	0,034	0,032	0,031	0,029	0,027	0,025	0,024	0,022	0,020	0,015
1,9	0,017	0,015	0,014	0,012	0,010	0,008	0,007	0,005	0,003	0,002

Контрольные вопросы

1. Напишите уравнения реакций, на которых основано определение глюкозы методом Хагедорна-Иенсена.
2. О чём может свидетельствовать пониженное или повышенное содержание глюкозы в крови?
3. Механизмы гормональной регуляции уровня глюкозы в крови.

Лабораторная работа №10

КАЧЕСТВЕННЫЕ РЕАКЦИИ НА ЛИПИДЫ

Ход работы

Опыт 1. Выделение лецитина из яичного желтка

К 1/6 части яичного желтка добавляют 5-7 мл кипящего этанола и тщательно перемешивают в течение 5-10 мин. Затем жидкость фильтруют в сухую пробирку через сухой фильтр.

Опыт 2. Получение эмульсии лецитина

К 5 каплям спиртового раствора лецитина прибавляют 20-30 капель воды. Образуется эмульсия лецитина в воде.

Опыт 3. Осаждение лецитина

К 5 каплям спиртового раствора лецитина прибавить 1-2 капли насыщенного спиртового раствора хлористого кадмия. Наблюдать образование осадка нерастворимого соединения лецитина.

Опыт 4. Гидролиз лецитина

К 5-10 каплям спиртового раствора лецитина добавляют такой же объём 10% раствора NaOH и кипятят 5 мин. Лецитин при этом распадается на глицерин, жирные кислоты, холин и фосфорную кислоту. Из холина образуется триметиламин, который обнаруживается по запаху селёдочного раствора.

Опыт 5. Реакция на холестерин

К 10 каплям хлороформного раствора холестерина или растительного масла прибавляют равный объём концентрированной серной кислоты (осторожно, по стенке). При лёгком встряхивании на границе двух слоёв жидкости образуется оранжевое кольцо, которое при стоянии переходит в красное. Нижний слой серной кислоты приобретает зеленую флюоресценцию.

Содержание отчёта

Полученные результаты заносят в таблицу:

Реакция	Наблюдаемый эффект

Контрольные вопросы

1. Перечислите представителей класса липидов, имеющих непосредственное отношение к образованию биомембран. Обьясните почему именно эти липиды.
2. Напишите уравнение гидролиза лецитина.
3. Почему для осаждения лецитина используется спиртовой, а не водный раствор хлорида кадмия?
4. В нервной ткани относительное содержания липидов выше, чем в любой другой
5. ( разумеется кроме жировой ткани). Попытайтесь дать этому факту обяьснение.

Уравнение гидролиза лецитина:

Лабораторная работа №11