Исследования in vivo в условиях эмоционально-стрессового воздействия в тесте «Открытое поле»

В исследовании использованы мыши-самцы инбредной линий Balb/c массой 19-25 г (НПП «Питомник лабораторных животных ФИБХ РАН). Животные содержались в условиях лабораторного вивария в контролируемых условиях окружающей среды (20-22°C и 30-70% относительная влажность, 12-часовой цикл освещения, 10-ти кратная смена объема воздуха комнаты в час), в пластмассовых клетках с верхней крышкой из нержавеющей стали с обеспыленной подстилкой из деревянной стружки. Двадцать мышей в каждой клетке, при постоянном доступе к экструдированному брикетированному корму [61] и питьевой воде. Животные распределялись по группам рандомизированно, по критерию массы тела, с отклонением от среднего значения не более чем на ±10%. Перед опытом животных выдерживали в экспериментальной комнате в «домашних» клетках в течение 24 часов.

Соединения 13А, 13B, 13D готовились в виде суспензии с Твин-80 и дистиллированной водой и вводились однократной внутрибрюшинной инъекцией.

Через 30 минут после внутрибрюшинного введения соединения животное сначала помещали на 1 мин в темную камеру, а затем – на один из периферических квадратов "открытого поля", которое представляет из себя белую круглую арену диаметром 1 метр с белыми бортами высотой 50 см. Арена равномерно освещена четырьмя бестеневыми лампами по 75 Вт каждая, расположенными на высоте 1 м над поверхностью поля. Все пространство арены равномерно разделено 4-мя концентрическими окружностями, которые в свою очередь разбиты радиусами на сектора так, что периферическая окружность состоит из 16 одинаковых криволинейных квадратов. Наблюдение за животным производили в течение 3 минут, раздельно фиксировали число пересеченных квадратов на периферии (ПА), в центральных областях (ЦА), число заходов в центр (Ц), а также число вертикальных стоек (ВА) и количество дефекаций (Д). Суммарное число пересеченных квадратов вместе с числом вертикальных стоек обозначали как общую активность (ОДА).

Рис. 21

Рис. 22

Рис. 23

О наличии анксиолитического действия соединений 13А, 13B, 13D (Рисунок 21, 22, 23 соответственно) судили по выявлению активирующего эффекта на двигательную активность у животных, с реакцией замирания в тесте «открытое поле» (линия Balb/c).

Введение соединения 13А в дозах 0,1 и 0,5 мг/кг и соединения 13B в дозах 0,5 и 1,0 мг/кг привело к значимой активации двигательной активности мышей в тесте «открытое поле» по сравнению с контрольной инъекцией. Вещество 13D оказывает сравнимую с диазепамом активность только при дозировке 0,1 мг/кг, это может быть связано с высокой липофильностью соединения.

Таким образом, соединения 13А,13B в широком диапазоне доз при внутрибрюшинном способе введения обладают ярко выраженным анксиолитическим действием у мышей Balb/с. Данная активация происходила за счет увеличения периферической и центральной двигательной активности, что характерно для соединений, обладающих анксиолитическим действием.

Экспериментальная часть

ЯМР ¹H-спектры регистрировали на спектрометрах Bruker AC-250 (Германия) в растворах ДМСО-d6 и CDCl₃, используя в качестве внутреннего стандарта сигналы остаточных протонов растворителей (δ 2.50 и 7.25 м.д. соответственно). ИК‑спектры регистрировали на спектрометре «Vertex-70» фирмы «Bruker» в KBr. Температуры плавления определяли в открытых капиллярах с использованием прибора OptiMelt и не корректировали. Контроль за ходом реакций осуществляли методом ТСХ с использованием различных хроматографических систем на пластинках Kieselgel 60 F254, с обнаружением в УФ-свете. Для хроматографических колонок использовали силикагель марки Sigma-Aldrich с размером пор 60Å и размером частиц 130-270 мкм.

Морфолинфенилметанон

13,51 г (96 ммоль) бензоилхлорида по каплям добавляют к раствору 9,26 г (106 ммоль) морфолина и 12,21 г (120 ммоль) триэтиламина в 75 мл дихлорметана при перемешивании при комнатной температуре. Реакционную массу перемешивают 60 минут при комнатной температуре, после чего к ней добавляют 5%-ной соляной кислоты до кислой реакции среды, смесь перемешивают, органический слой отделяют, промывают 150 мл воды и профильтровывают через бумажный фильтр. Фильтрат упаривают досуха, остаток перекристаллизовывают из смеси 50 мл этилацетата и 50 мл гексана, получая 14,85 г белого кристаллического вещества[62]. Выход 80%. Т.пл. 74-75°С Спектр ЯМР ¹Н (CDCl3, δ, м.д.): 7.34-7.35 (м, H(5), (1-5)); 3.65 (уш. c, H(2) (12,14)); 3.39 (уш. c, H(2) (11,13)).