Часть 2. Качественные реакции на водорастворимые витамины
1. Качественные реакции на витамин В1
Витамин В1 (тиамин, анейрин)
Витамин В1 (солянокислый) - бесцветные кристаллы в виде игл, растворимые в воде, спирте, кислотах, и нерастворимые в эфире и хлороформе. В кислой среде В1 устойчив к действию высокой температуры, а в щелочной среде легко разрушается. Длительное время он сохраняется в сушеных овощах и фруктах. При В1 - авитаминозе развивается полиневрит (болезнь «бери-бери»). Это заболевание состоит в прогрессирующей дегенерации нервных окончаний и проводящих пучков, следствием чего являются потеря кожной чувствительности, нарушение нормальной моторики желудочно-кишечного тракта, сердечные боли вплоть до наступления паралича и смерти. Витамин В1 содержит тиазольное и пиримидиновое кольцо:
Диазореакция на витамин В1.
В основе этого метода обнаружения лежит способность тиамина образовывать в щелочной среде с диазореактвом (диазосульфаниловой кислотой) комплекс оранжево-красного цвета.
Ход определения
Диазореактив готовят, сливая в пробирку по 5 капель 1%-ного раствора сульфаниловой кислоты и 5%-ного раствора нитрита натрия. В эту же пробирку добавляют на кончике скальпеля порошок тиамина и затем по стенке наклоненной пробирки осторожно приливают 5-7 капель 10%-ного раствора карбоната натрия. На границе двух жидкостей появляется кольцо оранжево-красного цвета.
Обнаружение витамина В1 в молоке
К 1 мл молока добавьте 10 капель диазореактива и 7 капель раствора карбоната натрия. Наблюдайте за изменением окраски раствора и сделайте вывод о присутствии витамина в молоке.
Взаимодействие витамина В1 с гексацианоферратом (III) калия
К раствору тиамина приливают 1 мл 5% раствора гексацианоферрата (III) калия, 1 мл 30% раствора щелочи и полученный раствор перемешивают. Далее к полученной смеси приливают 3 мл изобутилового спирта, полученный раствор хорошо взбалтывают. Верхний спиртовой слой при помощи капилляра или микропипетки переносят в сухую пробирку и наблюдают голубую флюоресценцию раствора в ультрафиолетовых лучах. Смесь в пробирке при перемешивании нагревают на водяной бане. Наблюдают появление желтой окраски.
2.Качественные реакции на витамин В2
Окисленная форма витамина В2 представляет собой желтое флюоресцирующее в ультрафиолетовых лучах вещество. Реакция на витамин В2 основана на его способности легко восстанавливаться. При этом раствор приобретает сначала розовый цвет промежуточных соединений, а затем обесцвечивается, т.к. восстановленная форма витамина В2 бесцветна.
Ход определения
В пробирку наливают 10 капель раствора витамина В2, добавляют 5 капель конц. соляной кислоты и опускают гранулу металлического цинка. Начинается выделение пузырьков водорода, жидкость постепенно розовеет, затем обесцвечивается.
3.Качественные реакции на витамин В6
Витамин В6 (пиридоксин, адермин)
Активностью витамина В6 обладает группа веществ, производных пиридина и носящих общее название пиридоксин:
К ним относятся, отличающиеся только характером радикала в 4-м положении пиридинового цикла, пиридоксол (R = СН2ОН), пиридоксаль (R = СНО) и пиридоксамин (R = СН2NН2). Свободные основания и гидрохлориды этих соединений представляют собой кристаллические порошки горьковатого вкуса, хорошо растворимые в воде, хуже - в спирте и нерастворимые в эфире и хлороформе. Лекарственная форма витамина В6 -монохлоргидрат пиридоксола - растворим в воде и спирте, выдерживает нагревание в растворах минеральных кислот и щелочей, в нейтральной и щелочной средах легко разлагается на свету. Сильные окислители разрушают eго.
Недостаточность витамина В6 у человека встречается крайне редко, так как он широко распространен в продуктах питания. У животных авитаминоз В6 проявляется отечной формой дерматита на мордочке, лапках и хвосте, а также гипохромной анемией и поражением нервной системы. Это вызвано нарушением обмена белков и липидов, что ведет к нарушению кроветворения и развитию дерматитов, которые не лечатся никотиновой кислотой, а также к атеросклерозу.
Феррихлоридная проба на витамин В6
Бесцветный раствор витамина В6 приобретает красную окраску в присутствии хлорного железа. Реакция обусловлена образованием комплексной соли красного цвета типа фенолята железа.
Ход определения
В пробирке смешивают 5 капель 5%-го водного раствора витамина В6 и 1 каплю 5%-го раствора хлорного железа и встряхивают ее. Смесь окрашивается в красный цвет.