Микроскопическая оценка спермы (густота, активность, концентрация, процент патологических форм спермиев)

Применяют метод визуальной оценки эякулята по густоте. В этом случае сперму относят к одной из следующих категорий: густая, средняя или редкая. К исследованию допускается сперма быков, хряков и жеребцов с оценкой густая (Г) и средняя (С), сперма баранов только густая (Г).

Оценку на подвижность (активность) проводят в раздавленной капле, для чего на чистое подогретое предметное стекло наносят каплю свежеполученной спермы, накрывают ее покровным стеклом. Стекло помещается на электрообогревательный столик, установленный на предметном столике микроскопа. Визуальную микроскопическую оценку проводят в затемненном поле зрения при увеличении в 140 или 280 раз. При этом определяют не активность отдельных спермиев, а процент спермиев с прямолинейным поступательным движением (ППД) во всем поле зрения микроскопа. Результаты оценки выражают в баллах. Принята 10-балльная оценка, причем каждый балл соответствует 10% спермиев с ППД.

Свежеполученная сперма считается пригодной, если её подвижность: не менее 8 баллов – для барана и быка, 7 баллов – для хряка и 6 баллов – для жеребца.

Концентрация спермиев определяется в каждом эякуляте, эти данные необходимы для расчета кратности разбавления спермы, которая устанавливается с таким расчетом, чтобы в каждой дозе разбавленной спермы было предусмотренное ГОСТом число спермиев.

Концентрацию спермиев можно определить несколькими методами: подсчетом в камере Горяева, по оптическому стандарту, при помощи фотоэлектроколориметра, электронным счетчиком частиц.

Достаточно точным методом определения концентрации спермиев является подсчет в камере Горяева. Однако он утомителен и требует много времени – 15-20 мин. на оценку каждого эякулята. Поэтому в настоящее время он используется лишь как вспомогательный. Применение оптического стандарта основано на том, что чем больше мутность исследуемой спермы, тем выше концентрация спермиев. Этот метод легко и быстро выполним, но по точности значительно уступает прямому подсчету спермиев. Применение фотоэлектроколориметра (ФЭК-56 или КФК-2) позволяет оценить концентрацию спермиев за 1-2 мин.

Концентрация спермиев определяется в млрд в 1 мл спермы. Допускается для использования сперма со следующей концентрацией: быка – 1-2 млрд/мл, барана – 2-4 млрд/мл, хряка и жеребца – 0,15-0,4 млрд/мл.

Содержание патологических форм спермиев определяют периодически. На предметном стекле к капле спермы добавляют краситель (1-10%-ный водный или спиртовой раствор эозина) в соотношении 1:2 или 1:3. Смесь спермы с краской выдерживают 3-5 мин., после чего делают три мазка и просматривают их под микроскопом с иммерсионной системой.

Подсчитывают 100-200 спермиев, выделяя патологические формы и определяя их процентное содержание. К ненормальным формам относят спермии с измененными головкой (уменьшенная, круглая, несимметричная, укороченная, асимметричная, заостренная, двойная, без чехла), шейкой (двойная или ломаная, наклоненная к телу), телом (изогнутое, ломаное, удвоенное, свернутое) или хвостом (изогнутый, двойной, с извитым и оголенным концом, скрученный).

Максимальный процент патологических форм спермиев: у барана – 14, быка – 18, хряка – 20, жеребца – 25.

Разбавление, хранение и транспортировка спермы. Значение и необходимость разбавления спермы

Во время эякуляции к содержимому эпидидимиса примешиваются секреты придаточных половых желез. Они изменяют рН среды, насыщают плазму электролитами (соли натрия, калия, магния); последние вызывают разрушение липопротеидного покрова спермиев. Отмеченные сдвиги обуславливают переход спермиев из анабиоза в активное состояние; это, в свою очередь, приводит к быстрой их гибели.

Непосредственными причинами сокращения срока жизни спермиев вне организма являются:

- истощение источников энергии в спермальной плазме и самих спермиях;

- интоксикация продуктами жизнедеятельности спермиев;

- разрушение липопротеидного покрова, набухание мембран и снятие электрического заряда;

- отрицательное действие находящихся в сперме и размножающихся в ней микроорганизмов;

- температурные перепады.

Следовательно, для продления срока жизни спермиев во внешней среде требуется:

- уменьшить активность спермиев;

- обеспечить их дополнительными источниками энергии;

- защитить мембраны спермиев от разрушения;

- предотвратить накопление токсических продуктов метаболизма;

- блокировать размножение находящихся в сперме микроорганизмов;

- повысить устойчивость спермиев к температурным перепадам и криогенным воздействиям.

Это достигается применением специальных разбавителей.

Помимо защитных функций, разбавление спермы облегчает дробление эякулята на порции (спермодозы). Это особенно существенно для животных с маточным типом естественного осеменения (свиньи, лошади), поскольку спермодоза наряду с нормативным числом подвижных спермиев должна быть достаточно объемной.