Исследования с помощью рилизинг-гормонома ГР

Показано, что проба с человеческим РГГР подходит для диагностики недостаточности ГР у собак. Начальные исследования на здоровых собаках с использованием разных доз РГГР показали повышение концентрации ГР в течение нескольких минут после введения РГГР без каких-либо видимых клинических побочных явлений. Введение 1 мкг/кг РГГР по эффективности равно стандартной пробе с клонидином (10 мкг/кг клонидина) (Abribat et al, 1989). После забора крови в нулевой момент времени внутривенно вводят 1 мкг/кг человеческого РГГР, а затем отбирают кровь через 5, 10, 20, 30 и 45 минут (Rijnberk and Kooistra, 2010). В некоторых исходных протоколах отбирались дополнительные образцы крови через 60, 90 и 120 минут; однако поскольку пик ГР наступает рано (через 10-30 минут), необходимости в этих образцах нет. Образцы крови для определения ГР требуют осторожного обращения из-за риска быстрого протеолитического разрушения гормона. Мы обычно собираем кровь в пробирки с ЭДТА, охлажденные льдом, и сразу центрифугируем; желательна охлаждаемая центрифуга. Пробы хранят при температуре -20° C или ниже и отправляют в лабораторию в сухом льду с помощью службы экспресс-доставки (Rijnberk and Kooistra, 2010). Нормальная реакция на ГРРГ в виде высвобождения РГ подвержена высокой индивидуальной вариабельности. Meij, et al. (1996a) исследовали высвобождение ГР у восьми здоровых биглей после однократного введения ГР и сравнивали с реакцией на комбинированное введение четырех рилизинг-гормонов. Однократное введение РГГР давало максимальные концентрации ГР от 4,9 до 27,5 мкг/л (среднее 14,7 ± 3,7) через 10 минут. При комбинированной пробе со стимуляцией (см. также ниже) были получены максимальные концентрации ГР от 5,4 до 24,8 мкг/л (12,6 ± 2,5) через 20 минут. Высвобождение ГР не отличалось после введения одного РГ и комбинации (рис. 2-11). Исследование Meij, et al. (1996a) проведено на собаках в возрасте 1-6 лет (медиана 2 года). У более пожилых биглей (7-12 лет, медиана 10 лет) высвобождение ГР было значительно слабее, что подтверждает снижение реакции ГР на стимуляцию РГГР с возрастом (Bhatti et al, 2006b). Показано, что у карликовых немецких овчарок базальная концентрация ГР низкая и не изменяется при стимуляции РГГР (Hamann et al, 1999; Kooistra et al, 2000a see Fig. 2-7). Как упоминалось ранее, частичную недостаточность ГР может быть сложно дифференцировать от нормы, так как концентрации ГР иногда совпадают. Нормальной реакцией считается концентрация ГР после стимуляции выше 5 мкг/л. РГГР может быть недоступен в некоторых странах.

ГР (мкг/л)

время, мин.

РИС. 2-11.Концентрация гормона роста (ГР) в плазме (среднее ± стандартная ошибка) у восьми здоровых биглей после быстрой (30 секунд) внутривенной инъекции (показана стрелкой) комбинации четырех рилизинг-гормонов гипоталамуса (•) в сравнении с однократной стимуляцией ризилинг-гормоном ГР (РГГР) в дозе 1 мкг/кг (o). Площадь под кривой (AUC) и возрастание (пик базальной концентрации в 0 момент времени) концентраций ГР значительно не различались после введения одного стимулирующего вещества и комбинации веществ. (Воспроизведено с разрешения из публикации: Meij BP, et al: Assessment of a combined anterior pituitary function test in beagle dogs: rapid sequential intravenous administration of four hypothalamic releasing hormones, DomestAnim Endocrinol 13[2]:161-170, 1996).

Стимуляция грелином

Грелин – вещество, усиливающее секрецию ГР, которое стимулирует его высвобождение из соматотропных клеток гипофиза посредством РССГР. В противоположность людям, у собак введение грелина не стимулирует высвобождение других гормонов гипофиза (т. е. эффект специфичен в отношении ГР). Реакция на грелин в виде выделения ГР также снижается с возрастом, сходно с реакцией соматотропных клеток на РГГР (Bhatti et al, 2002; Bhatti et al, 2006b). У восьми здоровых биглей (в возрасте от 13 до 17 месяцев, медиана 10) максимальная концентрация ГР после введения грелина варьировала от 0,2 до 124 мкг/л (медиана 52). У шести немецких овчарок с карликовостью (в возрасте от 9 до 21 месяца, медиана 12) максимальное повышение концентрации ГР после введения грелина составило 0,7-4,1 мкг/л (медиана 1,9), что значительно меньше, чем у здоровых собак. Ни у одной из карликовых собак концентрация ГР не превышала 5 мкг/л; однако такие концентрации обнаружены также у трех здоровых собак (Bhatti et al, 2006c). Из-за относительно высокого числа ложноположительных результатов проба с грелином уступает пробе с РГГР и клонидином или ксилазином.

Во всех упомянутых исследованиях применяли человеческий грелин, вводившийся внутривенно (в/в) в дозе 2 мкг/кг, а кровь для измерения ГР отбирали до инъекции, а затем через 5, 10, 20, 30 и 45 минут после нее. Обработка образцов крови была аналогична описанной для теста с РГГР.