Приложение к ЗАНЯТИЮ 16
Классификация диагностических серологических реакций по природе антигена, технике постановки и механизму протекания
· Реакции агглютинации
· Реакции преципитации
· Реакции лизиса
· Реакция нейтрализации
· Реакция иммунофлуоресценции
· Иммуносорбентные реакции
Антигены - любые вещества, в том числе содержащиеся в микроорганизмах и клетках или выделяемые ими, которые несут признаки генетически чужеродной информации и при введении в организм вызывают развитие специфических иммунологических реакций.
Антитела - иммуноглобулины, которые вырабатываются клетками лимфоидных органов после парентерального поступления антигена и способны специфически взаимодействовать с ним.
Основные типы иммунологических реакций в организме
1. Синтез антител.
2. Гиперчувствительность немедленного типа.
3. Гиперчувствительность замедленного типа.
4. Иммунологическая память.
5. Иммунологическая толерантность.
6. Идиотип-антиидиотипические взаимоотношения.
Механизм реакции агглютинации
Реакция агглютинации, как любая серологическая реакция, протекает в две фазы.
Первая фаза - специфическое соединение активного центра антитела с детерминантой антигена может происходить в отсутствие электролитов. Эта фаза не сопровождается, видимыми изменениями системы и может быть обнаружена только косвенным путем.
Вторая фаза - склеивание антигенов - следует за первой и ее специфичность менее выражена. Для ее проявления необходимы электролиты, которые снижают электрический заряд комплекса антиген - антитело и ускоряют реакцию. Эта фаза сопровождается видимым изменением среда, склеиванием антигенов и выпадением их в осадок.
Склеивание антигена осуществляется за счет связывания двухвалентными антителами поливалентных антигенов, в результате чего образуются комплексы связанных между собой антигенов через антитела.
Серологические реакции, используемые с диагностической целью
1. Классическая реакция агглютинации с бактериальными антигенами (развернутая и на стекле).
2. Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА) и ее варианты (рНАг, рНАт).
3. Реакция Кумбса (для выявления неполных антител).
4. Реакция коагглютинации.
5. Реакция латекс-агглютинации.
6. Реакция агрегат-гемагглютинации.
7. Реакция иммунофлуоресцентного метода (прямого и непрямого).
8. Реакция связывания комплемента (РСК).
9. Реакция преципитации (в жидкой среде и в геле).
10. Опсоно-фагоцитарная реакция (ОФР).
11. Реакции иммуноферментного метода (ИФМ).
12. Реакции радиоиммунного метода (РИМ).
Система комплемента и ее основные функции
Комплемент - большая группа взаимодействующих между собой белков и гликопротеинов крови, имеющихся у всех позвоночных (белки С1-С9, различные факторы и инактиваторы, всего около 20 компонентов).
Существует три пути активации системы комплемента:
а) Классический, инициируемый комплексом антиген-антитело;
б) Альтернативный, инициируемый бактериальными эндотоксинами, пропердином и различными другими агентами, но протекающий без участия компонентов С1, С4 и С2;
в) Механизм С1 -шунта, реализуется при дефиците С4-компонента, требует активации С1-компонента.
Основные функции системы комплемента:
1. Лизис чужеродных клеток, включая бактерий.
2. Опсонизация чужеродных клеток, включая бактерий. Они становятся более доступными для макрофагов, благодаря феномену иммунного прилипания (он обусловлен прилипанием к клеткам СЗв и в меньшей степени С4в, С5в, С3вi ; С2 компонентов и их фрагментов).
3. Стимуляция хемотаксиса (С5а, в меньшей степени СЗа, фрагмент Ва, комплекс С5в67).
4. Стимуляция фагоцитоза (благодаря присоединению к иммунному комплексу С1q или СЗв).
5. Повышение сосудистой проницаемости и усиление лейкоцитоза (С5а, СЗе).
6. Стимуляция внутриклеточных процессов анафилотоксинами С5а,
СЗа, в результате которой из мастоцитов выбрасываются биологически
активные соединения (гистамин, брадикинин, серотонин, лейкотриены
и т.п.), обусловливающие развитие воспаления.
Компоненты и регуляторы комплемента могут быть синтезированы самими иммунекомпетентными клетками.
Макрофаги синтезируют белки С1q , С2, СЗ, С4, С5, факторы В,Д, Р, ингибиторы - фактор 1, Н, С1 -инактиватор (гены С2, С4 и фактора В связаны с системой MHC).
Реакция Кумбса
При помощи реакций прямой и пассивной агглютинации определяют полные (бивалентные) антитела. Неполные (моновалентные, блокирующие) антитела не выявляются этими методами, так как, соединяясь с антигеном, блокируют его, но не могут вызвать аггрегации антигена в крупные конгломераты. Для выявления неполных антител используют специальную реакцию Кумбса. В реакции участвуют: а) сыворотка больного, в которой определяют неполные антитела; б) антиген-диагностикум; в) антиглобулиновая сыворотка - антитела к человеческому глобулину.
Реакция протекает в два этапа: 1) взаимодействие антигена с неполными антителами; 2) взаимодействие антиглобулиновой сыворотки (антиглобулиновых антител) с антителами, адсобрированными на антигене. В силу того, что антиглобулиновые антитела двувалентны, они связывают два одновалентных антитела, адсорбированных соответственно на двух антигенах, что приводит к склеиванию антигенов, к их агглютинации.
Перечень обязательных сведений, которые должны быть на этикетках лечебно-профилактических препаратов:
а) полное наименование препарата;
б) номер государственного контроля;
в) номер серии препарата;
г) срок годности;
д) дозировка.
Вакцины по состоянию входящих в них антигенов делят на:
1) живые (БЦЖ, туляремийная, бруцеллезная, сыпнотифозная, сибиреязвенная, гриппозная, коревая, полиомиелитная и т.д.);
2) убитые (против кишечных инфекций, лептоспирозов, коклюша и т. д. );
3) химические, в состав которых входят полные антигены (химическая сорбированная брюшнотифозная).
По количеству входящих в них антигенов вакцины делят на: моновакцины, дивакцины, тривакцины, поливакцины.
Ассоциированные (комбинированные) вакцины представляют собой комплексные препараты из различных вакцин (и анатоксинов).
Анатоксины получают, добавляя к нативному экзотоксину 0,5% формалина. Смесь выдерживают в течение 3-4 недель при 38-40 °С. Анатоксин применяют для создания активного антитоксического иммунитета. Концентрация анатоксина выражается в иммуногенных единицах (ИЕ) или в единицах связывания (ЕС). Одна ИЕ или ЕС- это то количество анатоксина, которое в смеси с 1 антитоксической единицей (АЕ) сыворотки дает инициальную флокуляцию.
Иммунные сыворотки делят на лечебно-профилактические и диагностические .
Для получения лечебно-профилактических сывороток иммунизируют крупных животных - лошадей, баранов, мулов, волов.
Для получения диагностических сывороток используют кроликов.
Лечебно-профилактические сыворотки делят на:
а) антибактериальные и
б) антитоксические
Антибактериальные сыворотки дозируются в миллилитрах (мл).
Антитоксические сыворотки дозируются в международных антитоксических единицах - МБ. Одна МЕ - количество сыворотки, нейтрализующее определенное количество доз токсина для животных определенного вида и веса. Количество МЕ сыворотки в I мл является ее титром. Титрование антитоксических сывороток проводят на животных и in vitro в реакции флокуляции.
Лечебно-профилактические сыворотки подвергаются очистке от балластных белков методом ферментативного гидролиза и последующего диализа (сыворотки-"Диаферм"). Эти сыворотки используют также для получения чистого концентрированного иммунного гаммаглобулина.