Регистрация общего состояния подопытных животных

Испытания проводят на беспородных белых мышах и белых крысах с массой тела соответственно 18 - 25 и 180 - 250 г. Выборки подопытных животных формируют из внешне здоровых особей одного пола. В день проведения испытаний животных взвешивают натощак. В группе белых мышей должно быть не менее 10, белых крыс - не менее 6 особей.

В процессе испытания наблюдают за поведением животных, обращая внимание на изменение их естественного положения, устойчивость при передвижении, двигательную активность, наличие или отсутствие судорожных сокращений мышц, одышки, признаков раздражающего действия (почесывание мордочкой участков кожного покрова, «умывательных» движений, закрытие век) и поведенческой адаптации (группового «скучивания»). По окончании экспозиции проводят дополнительный осмотр животных, проверяя их двигательную способность (легким уколом иглы в заднюю конечность), отмечая и другие внешние проявления интоксикации (например, наличие выделений из глаз, носа, ротовой полости, шума при дыхании и т. д.). Подсчитывают летальные исходы в каждой группе подопытных животных.

Особей, перенесших кратковременное воздействие газовых ОТВ, равно как и комбинаций последних с продуктами термического разложения, оставляют для наблюдения в течение 10 суток с регистрацией фактов постэкспозиционной гибели, времени ее наступления и общей по группе выживаемости животных (в процентах). Кроме осмотра, полезную информацию о состоянии подопытных животных дает также их взвешивание, которое рекомендуется проводить в середине и конце срока наблюдения.

Определение физической работоспособности

Методика заключается в установлении среднего времени проплыва белыми мышами дистанции 1,5 м при 10 последовательных измерениях.

Для заплывов белых мышей на указанную дистанцию используют резервуар (бассейн) длинной 230 см, шириной 10 см и высотой 30 см. У одного края резервуара устанавливают под углом 30° к поверхности воды спасательную площадку из пенопласта белого цвета. На расстоянии 1,5 м от нее отмечают линию старта с помощью полоски тесьмы, расположенной сверху и поперек резервуара.

Внутренние поверхности бассейна должны быть выкрашены в черный цвет. Глубина его заполнения водой составляет 10 - 12 см. Температуру воды поддерживают на уровне 17 - 19°С.

За 3 дня до испытания газового ОТВ проводят предварительную тренировку мышей. В течение первого дня отбирают в группу 10 особей. Им дают возможность поочередно ознакомиться с бассейном, помогают обнаружить спасательную площадку и выполнить 15 проплывов. Причем каждый раз, как только мышь оказывается на спасательной площадке, ее немедленно переносят в зону старта.

На второй тренировочный день количество проплывов увеличивают до 20. На третий день оно также остается равным 20, но при первых 10 проплывах отмечают по электронному секундомеру время от момента старта до касания мышью спасательной площадки (время проплыва). Эти данные измерений служат для расчета исходного параметра физической работоспособности - среднего времени проплыва по группе животных.

На следующий день тренированных животных подвергают воздействию испытываемого газового ОТВ или его комбинации с продуктами термического разложения. Если по окончании экспозиции летальные исходы в группе отсутствуют, то без задержки повторяют измерения времени проплыва каждым животным с последующим расчетом постэкспозиционного параметра физической работоспособности.

Данные плавания белых мышей, полученные до и после воздействия на них испытываемых веществ, подвергают статистической обработке. Различия между ними считают достоверными при доверительной вероятности, равной 95 % (Р < 0,05). Однако в соответствии с концепцией установления аварийных пределов воздействия химических веществ (МДК) критериальную значимость эти различия имеют лишь в том случае, когда они выходят за пределы 30 %.

Определение частоты и ритма сокращений сердца

Методика сводится к записи и анализу электрокардиограммы (ЭКГ) у белых крыс.

Для записи ЭКГ животных помещают в индивидуальные «домики» из полиметилметакрилата. Через отверстия на боковых стенках домиков под кожу животных вводят стальные игольчатые электроды, имеющие проводную связь с электрокардиографом. Подключение электродов осуществляют по второму отведению (левая задняя и правая передняя лапы). Первую запись ЭКГ проводят до начала воздействия на животных химического агента, затем на 1, 5, 10 и 15-й мин экспозиции и через 10 мин после ее окончания. Продолжительность каждой записи составляет 10 с при скорости протяжки бумажной ленты электрокардиографа 50 мм с^-1.

При анализе ЭКГ устанавливают количество сокращений сердца в единицу времени, наличие или отсутствие нарушений ритма (экстрасистол). Анализу подлежат ЭКГ по меньшей мере двух крыс. Если характер изменений ЭКГ у них не совпадает, то возникает необходимость в постановке дополнительного эксперимента.