Химические методы определения органических

СОСТАВНЫХ ЧАСТЕЙ МОЧИ

Белок.У здоровых животных содержание белка в моче незна­чительное и обычными лабораторными методами исследования не обнаруживается. Появление белка в моче — альбуминурия (вернее протешурия, так как в составе белка мочи имеются также и a-глобулины) может быть почечного (ренального) или внепо-чечного (экстраренального) происхождения, причем ренальные протеинурии могут быть функциональной и органической при­роды.

Физиологические протеинурии обычно кратковременны и возможны после чрезмерного скармливания (производителям, молодняку при диспепсии), нативного, неде­натурированного яичного белка, физического переутомления, переохлаждения, перегревания, переливания крови, при бере­менности (особенно в последние недели перед родами), стрес­сах, ушибах почек, а также у новорожденных в первые часы и дни жизни, когда содержание белка в моче повышается до 0,1 — 0,4%.

Органические (истинные, ренальные) протеи­нурии бывают при нефритах, нефрозах и нефросклерозах, амило­идозе почек и носят стойкий характер, указывая на органическое поражение почек. Содержание белка достигает 20 % и даже свыше 30 %. Протеинурия наиболее высока при липоидном и амилоид­ном нефрозах. При острых и хронических нефритах содержание белка в моче не превышает 10 %. Альбуминурии органического происхождения могут быть при врожденных аномалиях почек (поликистоз), ожогах, желтухе, инвагинации и перекручивании ки­шечника, териотоксикозах, лихорадках и отравлениях солями тя­желых металлов.

Постренальная (ложная) альбуминурия от­мечается из-за примеси к моче вьщелений мочеполовых органов (спермы, лейкоцитов, эпителия и т. п.)

Преренальная (застойная) альбуминурия бывает при декомпенсации гемоциркуляции (сердечная недоста­точность).

Все реакции на содержание белка в моче основаны на его дена­турации и осаждении. Обязательным условием анализа является предварительное фильтрование и подкисление щелочной мочи. Для определения белка в моче применяют пробы кипячения, сульфасалициловой кислоты, Геллера.

Количественное определение белка проводят по методу Робертса—Стольникова (Брандберга). Этот метод получил широкое распространение благодаря достаточной точности и простоте по­становки. В его основе лежит проба Геллера с использованием 50%-ной азотной кислоты. При постановке реакции обращают внимание на плотность, ширину и время появления белого коль­ца на границе разделения сред. Образование белого нитевидного кольца на третьей минуте после наслоения 50%-ной азотной кислоты на мочу соответствует 0,033 % белка в моче. Если ните­видное кольцо образуется тотчас после наслоения реактива, мочу следует развести дистиллированной водой или изотоническим раствором натрия хлорида вдвое. При образовании широкого кольца делают четырехкратное разведение (одна часть мочи на три части дистиллированной воды или изотонического раствора натрия хлорида). При необходимости делают восьмикратное раз­ведение и т. д. В разведенной моче снова определяют время появления кольца. Полученное разведение умножают на 0,033 %, и это произведение отражает количественное содержание белка в моче.

Если реакция с сульфасалициловой кислотой дает положи­тельный результат, а при количественном способе белок в моче не определяется, то считается, что в ней имеются лишь следы белка.

Альбумозы (протеозы). Альбумозы в моче появляются при со­держании в ней спермы, нарушении их всасывания в пищевари­тельном тракте (раковые новообразования), при сильном клеточ­ном распаде в тканях (абсцессы, гангрена легких, эмпиема, пара- и пиелонефрит); после инъекции туберкулина, содержащего альбумозы. Альбумозы — результат расщепления белков, определе­ние которых основано на их способности не свертываться при ки­пячении при положительной биуретовой реакции, а также на их способности высаливаться некоторыми солями (сульфатом аммо­ния, ацетатом цинка в кислой среде).

К моче, подкисленной уксусной кислотой, добавляют насы­щенный раствор натрия хлорида (1/3 объема), кипятят и горячую жидкость фильтруют. Альбумозы проходят фильтрат, где их при­сутствие обнаруживают биуретовой реакцией. К фильтрату добав­ляют 1/2 объема концентрированного раствора натрия хлорида и несколько капель слабого раствора меди сульфата, получают крас­но-розовое окрашивание раствора. При положительной пробе с сульфасалициловой кислотой пробу нагревают. Если опалесценция исчезает, а при охлаждении появляется снова, это значит, что в моче имеются альбумозы или белковое тело Бенс-Джонса (гете­рогенные патологические белки, осаждающиеся при нагревании до 45—60 °С и появляющиеся при миеломной болезни, а также некоторых формах ретикулезов).

Сахар. В моче здоровых животных сахар содержится в количе­ствах, не обнаруживаемых обычными качественными реакциями. Его появление связано с повышением концентрации сахара в кро­ви, увеличением его фильтрации через почечные клубочки или снижением реабсорбции в почечных канальцах. При нормальной функции почек глюкозурия возникает, когда его концентрация в крови становится выше «сахарного порога» почек. Почечный по­рог сахара повышается при снижении клубочковой фильтрации, после введения вазопрессина (питуитрина), адреналина, паратгормона. Понижение почечного порога сахара (глюкозурия) возника­ет при снижении реабсорбции в почечных канальцах, когда его уровень в крови бывает даже нормальным.

Почечная глюкозурия часто отмечается при беременности, ост­рой почечной недостаточности, хронических нефритах, нефрозах, интоксикации. Гипергликемия и возникающая при этом глюкозу­рия бывают при стрессах, поражениях центральной нервной системы, гипертиреоидизме, опухолях надпочечников, гиперфунк­ции гипофиза. Алиментарная гипергликемия и глюкозурия возни­кают при перегрузке легкоперевариваемыми углеводами. Наибо­лее характерно протекает глюкозурия при сахарном диабете (са­харном мочеизнурении), возникающем при недостаточной про­дукции инсулина, а также глюкагона и липокаина в поджелудочной железе, когда всасывающиеся в кровь углеводы накапливаются в крови вследствие невозможности их перехода в гликоген печени, являющийся источником глюкозы. Их избыток почками выделяется с мочой, несмотря на энергетическое голода­ние организма вследствие дефицита глюкозы.

Качественные пробы на наличие сахара в моче. Кроме глюкозы в моче могут быть сахароза, фруктоза, гектоза, пентоза, левулеза, галактоза, лактоза, а также витамин С, креатин, мочевая кислота, обладающие редуцирующими (восста­новительными) свойствами, на использовании которых основаны качественные методы определения их наличия в моче.

Проба Бенедикта. Основана на способности глюкозы восста­навливать в щелочной среде гидроксид меди (II) в гидроксид меди (I) (желтый цвет) или оксид меди (I) (красный цвет). При зеленом окрашивании и отсутствии осадка проба считается отрицательной. Это одна из самых чувствительных проб на сахар, так как при большом разведении мочи, применяемом в реакции, редуцирую­щие действия других (витамин С, креатин, креатинин и др.) вос­становителей мочи бывают незначительными.

Проба Гайнеса. Принцип метода тот же, что и при пробе Бене­дикта, но используется реактив, приготавливаемый по следующей прописи:

1) 13,3 г кристаллического (х.ч. или ч.д.а.) сульфата меди ра­створяют в 400 мл дистиллированной воды;

2) 50,0 г калия едкого растворяют в 400 мл дистиллированной воды;

3) 15,0 г глицерина (х.ч. или ч.д.а.) разводят в 200 мл дистилли­рованной воды.

Растворы 1 и 2 смешивают и тотчас добавляют раствор 3. Реак­тив длительно сохраняется в холодильнике. К 3—4 мл полученно­го реактива добавляют 8—12 капель мочи, кипятят на пламени или ставят в кипящую водяную баню. При наличии сахара в моче по­являются желтая или красная окраска и осадок.

Проба Ниляндера. Основана на свойстве глюкозы восстанав­ливать нитрат висмута в металлическую формулу. При наличии сахара в моче появляется окрашивание от коричневого до чер­ного и при отстаивании — темный осадок. Эта проба чаще дру­гих дает положительный результат при отсутствии сахара в моче вследствие наличия в нормальной и патологической моче дру­гих участвующих в реакции веществ (белок, мочевая кислота, пигменты, соединения глюкуроновой кислоты и другие углево­ды, антипирин, салициловая кислота, биомицин, тетрациклин и др.).

Метод индикаторных бумажек. В мочу опускают полоску филь­тровальной бумаги, предварительно пропитанной специальным реактивом (глюкотест). При наличии сахара в моче бумага окра­шивается в синий цвет. Сравнивая интенсивность окраски инди­каторной бумажки с прилагаемым к набору цветным стандартом, определяют ориентировочное количество сахара в моче. При со­мнительной реакции на глюкотест проводят качественные реак­ции с разными реактивами по описанным выше пробам.

Количественное определение сахара в моче. Поляриметрический метод. Глюкоза обладает способнос­тью вращать оптическую плоскость поляризации вправо. По вели­чине этого смещения можно судить о концентрации глюкозы в моче.

Моча должна быть прозрачной, свободной от белка и иметь кислый рН, для чего ее подкисляют слабой уксусной кислотой, кипятят, охлаждают и фильтруют. Если моча мутная и содержит много пигментов, применяют отсорбенты (ацетат свинца, активи­рованный уголь и др.).

При пользовании поляриметром надо учитывать следующее:

а) исследование концентрации сахара проводят через 2—3 мин после заполнения трубки и зарядки аппарата, так как колебания жидкости мешают измерению;

б) заполненная трубка не должна длительно стоять, так как при этом проба мутнеет;

в) после окончания измерений трубку и стекла надо промыть дистиллированной водой и просушить. Нельзя пользоваться при этом водопроводной водой, так как от нее стекла мутнеют.

Метод Бенедикта. Состоит в том же, что и при качественной реакции. Реакцию с мочой ставят в двух пробирках с 5 мл реакти­ва. В первую берут 0,5 мл мочи, во вторую 0,1 мл, кипятят 5 мин и фильтруют. Охлажденный фильтрат по цвету сравнивают со стан­дартом и таким образом определяют концентрацию сахара в моче.

Метод Альтгаузена. Основан на том, что количество глюкозы в моче пропорционально интенсивности окрашивания проб мочи при реакции со щелочью.

Проба на брожение. Это самая чувствительная проба на глюко­зу. Основана на способности сахара к брожению с образованием оксида углерода. Используют аппарат Эйгорна, в слепой конец которого наливают исследуемую мочу, смешанную с 1—2 г свежих дрожжей. При зарядке аппарата недопустимо попадание пузырь­ков воздуха в его слепой конец. Заполняют расширенную часть аппарата наполовину. Затем аппарат помещают на 18ч в термо­стат при 37 °С. В присутствии сахара происходит его брожение, а образующийся оксид углерода скапливается в слепой ампуле ап­парата. Количество его отмечают по левой шкале, имеющейся на аппарате и отражающей содержание сахара в процентах в неразве­денной моче, правая шкала показывает концентрацию глюкозы в разведенной пятикратно моче.

Кетоновые (ацетоновые) тела.Кетоновые (ацетоновые) тела со­стоят из ацетона, ацетоуксусной и ᵦ-оксимасляной кислот. Так как в моче они бывают обычно вместе, раздельное их определение клинического значения не имеет.

Кетоновые тела, будучи пороговыми для почечного барьера ве­ществами, при их ретенции в крови до 10—15 мг% начинают вы­деляться с мочой (ацетонурия). Ацетонурия связана прежде всего с недостаточной обеспеченностью организма энергией (глюко­зой), что бывает при белковом, жировом перекорме, ожирении, недостатке легкопереваримых углеводов в рационе, истощении и кахексии («голодные кетозы»), нарушениях эндокринной регуля­ции (сахарный диабет), при поражении желез внутренней секре­ции, гиперкортикоридизме, тиреотоксикозе, диарее, лихорадке, стрессах, раке желудка, эклампсии, травмах черепа и т. п. Наличие ацетоновых тел в моче во всех случаях имеет патологическое зна­чение.

Для определения содержания ацетоновых тел в моче наиболее распространены цветные пробы Ланге, Легаля и Герхарда, осно­ванные на взаимодействии ацетоновых тел с натрия нитропрусси-дом в щелочной среде.

Проба Ланге. К 12—15мл исследуемой мочи добавляют около 1 мл ледяной уксусной кислоты и около 0,5—1,0мл свежеприго­товленного 10%-ного раствора натрия нитропруссида, а затем на­слаивают из пипетки 1,5—2,0мл концентрированного аммиака. При наличии ацетоновых тел в моче в течение 3 мин на границе двух сред образуется розово-фиолетовое кольцо. Более интенсив­ная окраска появляется в присутствии ацетоуксусной кислоты, а слабая окраска обусловливается наличием ацетона. В кислой среде ацетоновые тела дают интенсивное вишнево-красное или фиоле­товое окрашивание.

Проба Лестраде. Используют сухой реактив по следующей про­писи: натрия нитропруссида — 1 г, натрия карбоната безводного — 20 г, аммония сульфата — 20 г. Реактивы смешивают и растирают в ступке до получения мелкого однородного порошка, который за­тем хранят в темной посуде с плотно притертой пробкой.

На фильтровальную бумагу на кончике скальпеля помещают небольшое количество порошка реактивов и вносят несколько (1—3) капель мочи. При наличии в моче ацетоновых тел через 2— 3 мин на месте реакции появляется окрашивание от розового до темно-фиолетового.

Проба Герхарда. Основана на реакции ацетоуксусной кислоты с железом полуторахлористым (FеС1₃), образующей в его присутствии красно-фиолетовое или темно-красное окрашива­ние.

Желчные пигменты.В моче здоровых животных желчные пиг­менты (билирубин, биливердин) обычными методами лаборатор­ного исследования не устанавливаются. Билирубинурия возникает при ретенции желчных пигментов до уровня, превышающего их почечный порог (более 2 мг%). Обычно гипербилирубинурия и билирубинурия возникают при тяжелом поражении печени и жел­чных путей (паренхиматозная, механическая желтуха). Моча и ее пена приобретают темный желто-зеленый оттенок. С мочой мо­жет выделяться только прямой билирубин. Непрямой билирубин, будучи связан с белками сыворотки крови, даже при высоком со­держании в крови с мочой не выделяется. Обнаружение желчных пигментов, таким образом, может служить диагностическим тес­том при дифференциации паренхиматозной и механической жел­тухи от гемолитической, при которой в моче возрастает содержа­ние стеркобилина и уробилина (табл. 8).