Диагностика ротовой жидкости

В настоящее время интерес к слюнной диагностике значительно возрос и это связано с ростом литературных данных о взаимосвязи функций слюнных желез со многими системами организма.

При инфекционных заболеваниях смешанная слюна используется для иммуноферментной диагностики гепатитов А, В, и С.

В настоящее время поставлен вопрос использования слюны для тестирования ВИЧ-инфекции.

Высокая чувствительность определения антител к ВИЧ и генам ВИЧ в слюне и моче, указывают на целесообразность проведения скрининг-анализа к ВИЧ-1 с целью оценки эпидемиологической обстановки. Установлено, что смешанная слюна людей, которые не входят в группы повышенного риска, содержит не идентифицированные пока что факторы, которые подавляют ВИЧ-инфекцию.

Рекомендуется использовать исследование специфическогоIgA в ротовой полости для диагностики вируса гриппа.

В 85 % случаев дает положительный результат определение в слюне специфических антител (класса IgM) при лептоспирозе.

В настоящее время проводятся скрининг исследования в гастродуоденальной патологии.

Показано, что в обеспечении гомеостаза креатинина при язвенной болезни желудка принимает участие гематосаливарный барьер, гомеостатирующая функция которого имеет особенности в зависимости от локализации язвенного дефекта в пределах гастродуоденальной слизистой оболочки. Установлено усиление агрессивности слюны в период обострения дуоденальной язвы. Показана роль изменений саливарного гомеостаза и возможность использования в диагностике индекса агрессии, как соотношение компонентов по принципу агрессия/защита. В качестве агрессивных факторов на слизистую оболочку органов гастродуоденальной зоны изучалось влияние гистамина, арахидоновой кислоты и алюминия, а в качестве защитных — действие серотонина, эйкозопентаеновой кислоты и цинка.

Изучение динамики ферментного спектра у больных лейкозами отражает процессы, происходящие как в целостном организме, так и в полости рта. Установлено, что специфические изменения активности щелочной и кислой фосфатаз, а также альфа-амилазы в смешанной слюне у больных лейкозами находятся в прямой зависимости как от санации очагов хронического периодонтита и полости рта, так и проводимой полихимиотерапии.

Ротовая жидкость используется для исследования проблем пищевой аллергии. Иммунологические исследования показали, что у детей с аллергическими заболеваниями на фоне пищевой непереносимости наблюдается уменьшение концентрации иммуноглобулинов А, G, Ми лизоцима в слюне, что указывает на снижение антибактериальной функции ротовой жидкости. Снижение иммуноглобулина А и его секреторного компонента (S-IgA) в ротовой жидкости отражает угнетение гуморального иммунитета.

В онкологической практике установлено значительное снижение активности лизоцима у пациентов с раком и предраком желудка, что позволяет более спешно формировать группы риска по этому заболеванию.

В литературных данных отмечается высокая корреляция альфа-фето-протеина в слюне и сыворотке, причем содержание этого белка выше в слюне. Иммуноферментный анализ альфа-фетопротеина используется для диагностики гепатоклеточной карциномы.

В экспериментах оценивался белковый спектр слюны при воздействии различных психоэмоциональных состояний. Для «нормальной» активности психики характерен условно невысокий («средний») уровень белка в полосах (на электрофореграмме), при этом фракция в области 55 кДа являлась наибольшей по объему.

При сниженном психоэмоциональном тонусе, в случае депрессии или подавленного настроения белковый состав смешанной слюны (БССС) сильно обедняется фракциями.

В случаях сильного волнения или переживания в БССС могут практически исчезать фракции с молекулярной массой > 40 кДА, а ниже этой границы возникает размазывание белка в виде большого пятна.

В состоянии творческого подъема и возвышенного состояния БССС насыщен фракциями, и концентрация белков в некоторых из них (особенно 55 кДА) значительно превышает уровень белка в предыдущих трех случаях.

Изучение природы БССС с молекулярной массой в области 55 кДа показало, что в этот диапазон входят следующие белки: бета-1,4-галакто-зилтрансфераза, ингибиторы связывания стрептококка к гидрофобным поверхностям, амилаза и специфическая протеаза, гидролизующие высокомолекулярные гликопротеины. В этой же области был обнаружен еще один белок, который имеет высокую степень гомологии (75 %) с определенными участками первичной структуры белков, относящихся к семейству пролин, обогащенных белков слюны человека.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЧАСТЬ ЗАНЯТИЙ

Лабораторные работы

Лабораторная работа 1. Определение активности пероксидазы в слюне.

Принцип метода. В присутствии перекиси водорода пероксидаза окисляет индигокармин, который при этом обесцвечивается.

Ход определения. В опытную и контрольную пробы вносят по 0,5 мл ацетатного буфера и добавляют 0,5 мл индигокармина. В опытную пробу добавляют 0,25 мл смешанной слюны. Помещают обе пробы в водяную баню при 30 ^оС на 5 мин. По окончании инкубации в опытную пробу вносят 0,25 мл раствора перекиси водорода, а в контрольную — 0,5 мл дистиллированной воды. Включают секундомер и останавливают реакцию через 2 мин после добавления в обе пробы по 1,5 мл 20 %-ного раствора серной кислоты. Пробы интенсивно встряхивают и колориметрируют в кюветах толщиной 1 см на фотоэлектроколориметре (λ 610 нм) против дистиллированной воды.

Активность пероксидазы рассчитывают по формуле 1:

А = (Е_к – Е_о ) ´ 1142,9, (1)

где А — активность в мкмоль/мин на 1 литр; Е_к — экстинкция контроля; Е_о — экстинкция опыта; 1142,9 — расчетный коэффициент.

Лабораторная работа 2. Количественное определение фосфатов в слюне.

Принцип метода основан на реакции неорганического фосфора с молибденовой кислотой. При этом образуется комплекс, который при соответствующих условиях может восстанавливаться аскорбиновой кислотой. При этом появляется окрашивание, интенсивность которого пропорциональна количеству неорганического фосфора, присутствующего в растворе.

Ход определения. К 0,1 мл слюны прибавляют 2,4 мл 5 % ТХУ для осаждения белка, перемешивают и центрифугируют 20 мин. Супернатант сливают и в нем проводят определение.

Пробу перемешать и инкубировать в термостате при 37 °С градусах в течение 20 мин. После охлаждения измерить оптическую плотность опыта и стандарта при 635 нм против контрольной пробы на ФЭКе.

При расчете используют формулу 2:

, (2)

где С — содержание фосфора в г/л; Е_оп — экстинкция опыта; 0,05 — мг/мл фосфора; Е_ст — экстинкция стандарта.

Лабораторная работа 3.Определение активности щелочной фосфатазы в слюне (по методуBessey и др.).

Принцип метода. Субстрат — паранитрофенилфосат гидролизуется в присутствии щелочной фосфатазы с образованием паранитрофенола, дающего в щелочной среде желтое окрашивание.

Ход определения. В опытную и контрольную пробы вносят по 0,5 мл субстратно-буферной смеси. В опытную пробу приливают 0,1 мл слюны и обе пробы помещают на 30 мин в водяную баню при 37 ^оС. После окончания инкубации обе пробы переносят в ледяную баню и приливают по 5 мл 0,02 н. раствора NаОН, а в контрольную пробу еще добавляют 0,1 мл слюны. Интенсивность окрашивания пробы измеряют против контроля (длина волны 405 нм) на ФЭКе или спектрофотометре. Активность фермента рассчитывают по формуле 3:

А = Е ´ 101, (3)

где А — активность фермента в мкмоль/мин на 1 л слюны; Е — оптическая плотность, 101 - коэффициент пересчета в мкмоль/л.

Лабораторная работа 4. Определение рН слюны

Принцип метода основан на изменении физико-химических свойств индикаторной бумаги под действием рН слюны.

Ход определения. Каплю слюны наносят на универсальную индикаторную полоску и немедленно сравнивают полученную окраску с соответствующей шкалой рН.

Лабораторная работа 5. Качественные реакции на α-амилазу слюны.

Принцип метод основан на расщеплении крахмала под действием α-амилазы слюны на отдельные фракции декстринов.

Ход определения. На предметное стекло нанести 1 каплю 0,5 %-ного раствора крахмала и 1 каплю слюны. Оставить при комнатной температуре на 5 мин и добавить 1 каплю раствора Люголя.

Лабораторная работа 6.Качественное определение молочной кислоты в осадке слюны и надосадочной жидкости слюны.

Принцип метода. При взаимодействии фенолята железа, имеющего фиолетовый цвет, с лактатом, образуется лактат железа желто-зеленого цвета.

Ход определения. Слюну (1,5 мл) отцентрифугировать при 3 тыс. об./мин в течение 15 мин. Слить надосадочную жидкость. Осадок растворить в 0,5 мл воды, проделать в обеих пробах реакцию Уффельмана. Для этого к 20 каплям 1 %-ного раствора фенола добавляют 2 капли 1 %-ного раствора хлорного железа. Получают фенолят железа, окрашенный в фиолетовый цвет. В 2 пробирки с фенолятом приливают полученный надосадок и растворенный осадок. Фиолетовая окраска переходит в желто-зеленую вследствие образования молочно-кислого железа.

Лабораторная работа 7. Количественное определение лактата в слюне.

Принцип метода. В присутствии серной кислоты лактат превращается в ацетальдегид.

Ход определения. К 0,2 мл слюны добавляют 2 мл 10 %-ного раствора ТХУ и центрифугируют 7 мин при 1500 об./мин. В другую пробирку отбирают 3 мл концентрированной серной кислоты и добавляют 0,5 мл центрифугата, а также 2 капли 12 %-ного раствора сульфата меди. Перемешивают и нагревают 5 мин в кипящей водяной бане. После охлаждения добавляют 1 каплю 1,5 %-ного раствора параоксидифенила и оставляют на 30 мин, периодически встряхивая. Помещают в кипящую водяную баню на 90 с. После охлаждения колориметрируют на ФЭКе против контроля, который вместо центрифугата содержит 0,5 мл ТХУ. Длина волны равна 582 нм.

Расчет содержания лактата проводят по формуле 4:

, (4)

где С — количество лактата в мкмоль на 1 л слюны; А — количество лактата в мг/мл, найденные по калибровочному графику; 0,045 — количество слюны в мл, внесенное в пробу.

Лабораторная работа 8. Определение роданидов (тиоционатов) в слюне.

Принцип метода. Роданиды (SCN^-) в кислой среде образуют комплексное соединение красного цвета с трехвалентным железом.

Качественная реакция. К 5 каплям слюны добавляют 2 капли 2 %-ного раствора соляной кислоты и 2 капли 0,01 %-ного раствора хлорного железа. Развивается красное окрашивание.

Ход количественного определения роданидов. В центрифужную пробирку вносят 0,2 мл слюны, 1,3 мл дистиллированной воды, 0,5 мл 20 %-ного раствора ТХУ, перемешивают и оставляют на 10 мин при комнатной температуре. Стандартная проба содержит 2 мл (0,2 мг) раствора тиоционата аммония и 1,5 мл раствора хлорного железа. Обе пробирки центрифугируют при 3000 об./мин в течение 10 мин. Далее центрифугат переносят в темную склянку, добавляют 1,5 мл 24 %-ного раствора хлорного железа, закрывают пробкой и колориметрируют против контроля, содержащего 2 мл дистиллированной воды и 1,5 мл раствора хлорного железа на ФЭКе при длине волны 540 нм. Расчет по формуле 5:

, (5)

где С — содержание роданидов в мг/мл; С_ст — концентрация тиоционатов в стандартной пробе; Е_о — экстинкция опыта; Е_ст — экстинкция стандарта; 0,2 — количество слюны.

Лабораторная работа 9. Определение активности кислой фосфатазы.

В десневой жидкости определяется активность ряда ферментов, но при воспалении пародонта наибольшим изменения подвержены лизосомальные гидролазы (катепсин D, кислая фосфатаза и др.).

Принцип метода. В кислой среде паранитрофенилфосфат гидролизуется ферментом — фосфатазой до паранитрофенола, дающего в щелочной среде желтое окрашивание.

Ход определения. В опытную и контрольную пробу вносят по 0,5 мл субстратно-буферной смеси. В опытную пробу приливают 0,4 мл экстракта из полоски с десневой жидкостью (ДЖ), перемешивают и помещают обе пробы на 30 мин в водяную баню при 37 °С. По окончании инкубации пробы переносят в ледяную баню и приливают по 5 мл 0,1 н. раствора NаОН. В контрольную пробу добавляют 0,4 мл ДЖ. Интенсивность окраски опытной пробы замеряют против контроля при длине волны 405–410 нм. Для расчета используют калибровочный график, построенный с использованием различных количеств паранитрофенола.

Активность фермента рассчитывают по формуле 6:

, (6)

где А — активность кислой фосфатазы в мкмоль/мин на мг белка; С — концентрация паранитрофенола, найденная по калибровочному графику; 30 — время инкубации в минутах; а — количество белка в мг в пробе, соответствующее 0,4 мл ДЖ.

Лабораторная работа 10. Получение десневой жидкости.

ДЖ получают путем введения в десневую щель стандартной полоски хроматографической бумаги. Высушивается поверхность зуба, он изолируется от попадания слюны, а затем в десневую щель в области верхних 3, 4, 5-го коренных зубов заостренным концом вводится полоска хроматографической бумаги на 1–5 мин. Полученные полоски с ДЖ пропитывают 0,02 %-ным спиртовым раствором нингидрина. Окрашенную в сине-фиолетовый цвет площадь, замеряют и рассчитывают ее в мм².

Лабораторная работа 11. Определение количества нитритов в слюне.

Принцип метода. В присутствии сульфаниловой кислоты и N-этилендиамина, нитриты образуют диазосоединения красного цвета.

Ход определения. К 0,1 мл слюны в центрифужную пробирку приливают 2 мл дистиллированной воды, 0,5 мл сульфаниловой кислоты и 0,5 мл 0,05 %-ного N-этилендиамина. Оставляют на 10 мин при комнатной температуре, а затем центрифугируют при 3 тыс. об./мин в течение 10 мин для осаждения белков. Оптическая плотность надосадочной жидкости определяется на ФЭКе при длине волны 540–550 нм против контроля, содержащего 2,1 мл воды, 0,5 мл сульфаниловой кислоты и 0,5 мл N-этилендиамина.

Расчет проводят по формуле 7:

С = Е_оп ´ 711, (7)

где С — концентрация мкмоль/л; Е_оп — экстинкция опытной пробы, 711 — коэффициент пересчета NO_2.

Лабораторная работа 12. Количественное определение хлоридов в слюне.

Принцип метода. Хлориды экстрагируют 96 %-ным спиртом. Хлор оттитровывают нитратом серебра в присутствии бихромата калия. Хлористое серебро, как менее растворимое, в первую очередь выпадает в осадок. Следующая капля раствора азотнокислого серебра, введенная после выпадения всего хлора, реагирует с бихроматом калия, причем образуется AgCrО₄ коричневого цвета (конец реакции).

Ход реакции. В пробирку помещают 0,2 мл слюны и 2,0 мл спирта, хорошо перемешивают и оставляют на 15 мин при комнатной температуре, затем центрифугируют при 3 тыс. об./мин в течение 15 мин. Сливают надосадок и добавляют к нему одну каплю 7 %-ного раствора бихромата калия, появляется желтое окрашивание. Затем раствор оттитровывают 0,01 н. раствором азотнокислого серебра из мерной пипетки на 1 мл по каплям до появления коричневой окраски.

Расчет проводят по формуле 8:

, (8)

где С — концентрация в г/л; 0,355 — мг хлора соответствует 1 мл 0,01 н раствора азотнокислого серебра; Е — количество 0,01 н. раствора азотнокислого серебра, израсходованное на титрование; 0,2 — количество слюны в пробе.

Лабораторная работа 13. Оценка всасывающей функции ЖКТ по показателям йодинометрии слюны.

Принцип метода. Пероральное введение иодида калия с водой или в капсуле стимулирует слюнные железы выделять этот йод, что используется для оценки всасывающей функции ЖКТ.

Ход исследования. После тщательного ополаскивания полости рта у обследуемого берут пробу слюны в объеме 0,5–10 мл до и через 10 мин после приема внутрь йодида калия в дозе 0,06 мг на 1 кг массы тела в 5–10 мл воды с запиванием 100 мл дистиллированной воды. Йодионометрию проводят в микроячейке электролитического ключа. По величине электродного потенциала при помощи калибровочной кривой результаты выражают в единицах рI с последующим расчетом содержания ионов йода в микромолях. О всасывающей функции ЖКТ судят по величине показателей йодионометрии, полученных через 10 мин за вычетом соответствующих показателей исходной пробы. В норме эти показатели у клинически здоровых людей в возрасте 18–21 год равняются 5,3 ± 0,06 рI, что соответствует содержанию йодида 6,61 ± 0,98 мкмоль/л.

Учитывая прямую зависимость величины электродного потенциала от концентрации ионов йода в слюне, можно ограничиться выражением результатов анализа в милливольтах, что упрощает и ускоряет использование метода. В норме этот показатель равен 38,8 ± 3,7 мВ.

Доза вводимого йодсодержащего препарата в связи с высокой чувствительностью йодионоселективного электрода уменьшается в 50–100 раз, что снижает воздействие экзогенного йода на щитовидную железу.

Лабораторная работа 14. Количественное определение белка и муцина (гликопротеина) в слюне.

Принцип работы. Раствор белка в щелочной среде с реактивом Бенедикта дает фиолетовое окрашивание, интенсивность которого пропорциональна содержанию белка в минимальном объеме слюны (0,1 мл).

Выделенный из слюны муцин труднорастворим, и даже в щелочной среде его раствор остается мутным, что может служить препятствием при определении как белкового, так и углеводного компонентов. Чтобы исключить влияние вязкости и мутности, определение муцина проводят по разнице между содержанием общего белка в слюне и в супернатанте, после выделения гликопротеидов (муцина).

Ход исследования. Для определения белка к 0,1 мл слюны приливают 1,9 мл дистиллированной воды, 2 мл 6 %-ного едкого натрия, тщательно перемешивают, добавляют 0,2 мл раствора Бенедикта, встряхивают и оставляют при комнатной температуре на 15 мин. Затем спектрофотометрируют при длине волны 330 нм против контроля на реактивы.

В пробирку вносят 0,1 мл слюны, 1,9 мл воды (дистиллированной) и 2–3 капли 20 % раствора уксусной кислоты до выделения комочков муцина (последние после растворения в щелочи дают положительную реакцию и пробу Фелинга). Содержимое пробирки тщательно перемешивают путем встряхивания в течение 5 мин, далее центрифугируют при 1,5–2 тыс. об./мин. Супернатант сливают в чистую пробирку, добавляют к нему 2 мл 6 %-ного NаОН и 0,2 мл реактива Бенедикта, затем встряхивают и оставляют при комнатной температуре на 15 мин. Спектрофотометрирование проводят при длине волны 330 нм против контроля на реактивы.

Результат (в мг/дл) подсчитывают по калибровочному графику, построенному по стандартным растворам альбумина. Содержание муцина в слюне определяют по разности между содержанием белка в слюне и в супернатанте. Коэффициент сходимости и воспроизводимости по белку — 3,56 %, по муцину — 5,14 %.

Содержание муцина в слюне практически здоровых людей составляет в среднем 75,4 ± 8,8 мг/дл, для сравнения при язвенной болезни желудка — 259 ± 17,9 мг/дл. У других больных (смешанная группа) содержание муцина может достигать 122,5 ± 7,7 мг/дл.

После лечения содержание белка в слюне больных снижается, тогда как содержание муцина хотя и снижается, но остается выше, чем у здоровых.

Высокий уровень муцина в слюне больных является защитной реакцией организма в состоянии болезни, когда муцин как слизеподобное вещество препятствует колонизации слизистой микроорганизмами.

Лабораторная работа 15. Определение активности лизоцима слюны.

Принцип работы. Основан на определении антилизоцимной активности микроорганизмов при оптимальном разведении и инкубации при 37^оС.

Ход исследования. В качестве тест-культуры использовали 24-часовую культуру Microccocus lysodeikticus (ML-штамм № 2665 ГИСК им. Л. А. Тарасевича). Бактериальные клетки убивали хлороформом в течение 60 минут, смывали 0,067 М фосфатным буфером с ЭДТА и один раз 0,067 М фосфатным буфером без ЭДТА. Культуру ML отделяли путем центрифугирования при 3,5 тыс. об./мин 20 мин. После этого к осадку ML добавляли этот же буферный раствор и на спектрофотометре СФ-46 (540 нм) оптическую плотность суспензии микрококка доводили до 0,300. Исследуемые образцы слюны разводили 0,067 М фосфатным буфером в соотношении 1:9. К 2 мл субстрата (суспензии тест-штамма ML) добавляли 0,5 мл раствора слюны.

Измерения начинали непосредственно после внесения всех компонентов в смесь и через 10 мин инкубации при 37 ^оС. В контрольном опыте к 2 мл суспензии микрококка добавляли 0,5 мл 0,067 М фосфатного буфера. Активность лизоцима рассчитывали по специальной, выведенной формуле 9:

ед./мл/мин, (9)

где Д_о — начальная плотность, Д_к — конечная оптическая плотность, К — коэффициент пересчета, равный 100, 10 — разведение слюны, 2 — пересчет на 1 мл, 10 — время инкубации.

Для выведения расчетной формулы определения удельной активности культуру микрококка готовили описанным выше способом. После чего полученную биомассу делили на 2 равные части. Одну часть доводили до оптической плотности 0,300 при длине волны 540 нм. При этом объем буфера составил 24 мл. В другой части путем минерализации по Кьельдалю, отгонки по Конвею и титрования определяли количество азота и рассчитывали содержание белка в пробе. Пятикратным исследованием установлено, что при оптической плотности 0,300 в пробе содержится 3,48 мг белка в микрококках. Столько же его содержится в 24 мл суспензии, а в 1 мл —0,0148 мг. За единицу активности лизоцима условно принято количество фермента, способного лизировать ГАГ (гликозаминогликаны) и ПГ (протеогликаны), содержащие 0,001 мг белка.

Метод используется для исследования функциональной активности слюнных желез и протективных свойств слюны при различных патологических процессах в ротовой полости. Данное исследование возможно также проводить при изучении влияния различных гигиенических средств ротовой полости и пищевых продуктов на антимикробные свойства слюны с целью оценки качества потребляемой продукции.

Определение содержания лизоцима в слюне имеет практическое значение в клинической лабораторной диагностике, при пищевых отравлениях, особенно у детей (таблица 3).

Употребление различных химических, биологических добавок и примесей пищи создает проблему пищевой аллергии. Особенно высокая чувствительность организма к пищевым продуктам отмечается у детей, что связано с незрелостью ферментативных систем ЖКТ и особенностями общего и местного иммунитета. У детей с пищевой аллергией отмечается дисбаланс индивидуальных уровней лизоцима в ротовой жидкости, что указывает на дисфункцию местного и гуморального иммунитета полости рта.

Таблица 3 — Содержание лизоцима в слюне у детей до и после лечения* (М ± м)

Показатель	Группы детей	Контроль
бронхиальная астма	атопический дерматит	аллергические реакции
Лизоцим до лечения, мг/л Лизоцим после лечения, мг/л	0,81 ± 0,03 1,40 ± 0,05	0,92 ± 0,05 1,43 ± 0,07	0,96 ± 0,.05 1,47 ± 0,08	1,59 ± 0,12 —

* Шилова, М. А. Содержание лизоцима и иммуноглобулинов в ротовой жидкости у детей с пищевой аллергией / М. А. Шилова. // Медицинские новости. — 2000. — № 8. — С. 66–69.

Лабораторная работа 16. Определение кальция и фосфора в ротовой полости с целью профилактики кариеса зубов.

Принцип работы. Основан на образовании комплекса иона кальция с анионом ЭДТА (трилон В), который устойчив в сильнощелочной среде при рН 12–13. Комплекс ионов магния в этой среде разрушается, а магний выделяется в виде гидроксида. Отсутствие свободных ионов кальция при титровании трилоном В обнаруживается индикатором мурексидом.

Ход работы. Ротовую жидкость объемом 0,5–1,0 мл разбавляют дистиллированной водой до объема 50 мл, добавляют 1 мл 1 %-ного раствора гидроксиламин гидрохлорида, 2 мл 2 н. раствора гидроксида натрия, несколько кристаллов мурексида и титруют 0,05 н. раствором трилона B до изменения окраски.

Нижний предел обнаружения кальция в ротовой жидкости при исследовании 0,5 мл слюны составляет 8,0 мг/л.

Определение фосфора основано на реакции ортофосфатов с молибдатом аммония в кислой среде. Образующаяся при этом желтая гетерополикислота под действием восстановителей аскорбиновой кислоты или хлорида олова, превращается в интенсивно окрашенное синее соединение.

Для разрушения белков 0,1 мл слюны обрабатывали 2,4 мл 7 %-ного раствора ТХУ кислоты, затем раствор центрифугировали. Аликвотную часть центрифугата (0,1–2,0 мл) использовали для анализа. Интенсивность окраски измеряли с помощью ФЭКа. Расчет проводили по калибровочному графику. Нижний предел обнаружения фосфора в ротовой жидкости — 1,0 мг/л.

Содержание фтор-иона в слюне определяют с помощью фторселективного электрода потенциометрическим методом.

Поскольку слюна постоянно омывает зубы, то повышение концентрации минеральных компонентов в ней способствует лучшей минерализации зубов.

При потреблении фторированной соли происходит увеличение скорости саливации, что способствует снижению вязкости слюны. Потребление фторида натрия (в таблетках) приводит к снижению вязкости ротовой жидкости в 1,08 раза (р < 0,01). Потребление фторированной соли приводит к снижению вязкости слюны в 1,12 раза, что способствует лучшему доступу минеральных компонентов к эмали зубов и повышению ее устойчивости к кариесу зубов. Профилактика кариеса зубов оказывает благоприятное влияние на состав и свойства ротовой жидкости, устраняет ряд патогенетических заболеваний.

ЛИТЕРАТУРА

1. Бабаева, А. Г. Структура, функции и адаптивный рост слюнных желез / А. Г. Бабаева, Е. А. Шубникова. — М.: Изд-во МГУ, 1979. — 190 с.

2. Боровский, Е. В. Биология полости рта / Е. В. Боровский, В. К. Леонтьев. — М.: Медицина, 1991. — С. 172–186.

3. Вавилова, Т. П. Слюна и десневая жидкость: учеб.-метод. пособие / Т. П. Вавилова, Н. И. Трунилина, Ю. А Петрович: М-во здравоохранения РСФСР – Медицинский стоматологический институт им. Н. А. Семашко. — М.: МГУ, 1986. — 38 с.

4. Волчкова, В. М. Диагностическая ценность исследования ферментов слюны у больных лейкозами / В. М. Волчкова, Т. Т. Березов, Т. Т // Клинико-биохимические исследования. — 1995. — С. 46–53.

5. Григорьев, И. В. Слюна и психическая сфера человека / И. В. Григорьев. — М.: Ноосфера-3000, 2005. — 157 с.

6. Гриневич, В. Б. Уровень креатинина в крови и слюне-прогностический критерий клинического течения язвенной болезни / В. Б. Гриневич, Е. И. Ткаченко, Ю. П. Успенский // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. — 1996. — № 1. — С. 58–62.

7. Григорьев, И. В. Слюна как предмет лабораторной диагностики / И. В. Григорьев, А. А. Чиркин // Медицинские новости. — 1998. — № 4. — С. 4–13.

8. Коротько, Г. Ф. Роль слюнных желез в обеспечении постоянства гидролитической активности крови / Г. Ф. Коротько, Ш. К. Кадыров // Физиол. журнал им. И. М. Сеченова. — 1994. — Т. 80, № 8. — 108 с.

9. Коротько, Г. Ф. Гастрин в слюне / Г. Ф. Коротько, Ш. К. Кадыров // Физиология человека. — 1993. — Т. 20, № 2. — 61 с.

10. Циркадные ритмы концентрации кортизола в слюне во время длительного космического полета / И. М. Ларина [и др.] // Физиология человека. — 2000. — Т. 26, № 4. — 95 с.

11. Нетаха, Ж. Н. Изучение саливации у человека в норме и при патологии / Ж. Н. Нетаха, С. Н. Ляпун // Клиническая медицина. — 1972. — № 9. — 15 с.

12. Олецкий, Э. И. Биохимия соединительной ткани и органов полости рта / Э. И. Олецкий, А. Д. Таганович, В. К. Кухта. — Мн.: БГМУ, 2002. — С. 45–53.

13. Рыбакова, М. Г. Об эндокринной функции слюнных желез / М. Г. Рыбакова // Архив патологии. — 1978. — № 2. — 85 с.

14. Сукманский, О. И. Биологически активные вещества слюнных желез / О. И. Сукманский. — Киев: Здоровье, 1991. — 111 с.

15. Сукманский,О. И. Взаимосвязь щитовидной и слюнной желез / О. И. Сукманский // Вестник стоматологии. — 1995 — № 2. — 143 с.

16. Рыбакова, М. Г. Об эндокринной функции слюнных желез / М. Г. Рыбакова // Архив патологии. — 1978. — № 2. — 85 с.

17. Физиология человека / В. М. Покровский [и др ]; под общ. ред. В. М. Покровского, Г.Ф. Коротько — М.: Медицина, 1998. — Т. 2. — 38 с.

18. Шилова, М. А. Содержание лизоцима и иммуноглобулинов в ротовой жидкости у детей с пищевой аллергией / М. А. Шилова // Медицинские новости. — 2000. — № 8 — С. 66–69.

19. Шубникова, Е. А. Секреция желез: Очерки. Традиционные и нетрадиционные аспекты секреторного процесса. — Е. А. Шубникова, Г. Ф. Коротько. — М.: Изд-во МГУ, 1986. — 38 с.

20. Signaling mechanisms that regulate receptors / B. Baum [et al.] // DDT. — 1996. — № 1. — С. 502–612.

21. Reliability of salivary testosterone measurements: a multicenter evalution / J. M. Dabbs [et al.] // Clin. Chem. — 1995. — Vol. 41, № 11. — 1581 p.

22. Putz, Z. Radioimmunoassay of thyroxine in saliva / Z. Putz, A. Vanuga, J. Veleminsky // Exp. And Clinic. Endоcrinol. — 1985. — Vol. 85, № 2. — 199 p.

СОДЕРЖАНИЕ

Механизм секреции слюны. Факторы, влияющие на формирование

белкового состава слюны.......................................................................... 3

Биохимический состав ротовой жидкости................................................ 5

Функции белков слюны............................................................................. 10

Минерализующая функция слюны (ротовой жидкости........................... 19

Диагностика ротовой жидкости................................................................ 25

Практическая часть занятий...................................................................... 27

Литература................................................................................................. 36

Учебное издание

Грицук Александр Иванович

Свергун Валентина Тимофеевна

Коваль Александр Николаевич

БИОХИМИЯ

РОТОВОЙ ЖИДКОСТИ