Гемагглютинирующих сывороток
Цели работы:освоить методику определения групп крови, определить группу донорской крови.
Объект исследования –кровь человека.
На основании реакции агглютинации эритроцитов установлено, что кровь каждого человека принадлежит к одной из четырех групп. Кровь различных групп отличается наличием агглютининов и агглютиногенов. Агглютинины (склеивающие вещества) находятся в плазме. Агглютиногены – вещества, способные склеиваться, содержатся в эритроцитах.
Имеются два вида агглютиногенов – А и В и соответственно два вида агглютининов – a и b. Реакция агглютинации, т. е. склеивание эритроцитов, наступает лишь при смешении одноименных агглютининов и агглютиногенов, например a и А или b и В. Агглютинацию нельзя смешивать с процессом свертывания крови – выпадением фибрина в виде нерастворимых нитей.
Определение группы крови имеет практическое значение для переливания крови. При этом учитывают, прежде всего, свойства эритроцитов донора, так как плазма вводится в малом количестве и, разводясь в крови реципиента, теряет свои агглютинирующие качества. Однако при переливании значительного количества крови, учитывают и агглютинины донора.
Для работы необходимы: донорская кровь, стандартные сыворотки I, II и III групп двух разных серий, предметные стекла (чашка Петри), пипетки, стеклянные палочки.
Проведение работы. Группы крови определяют по свойствам эритроцитов, которые устанавливают с помощью стандартных сывороток, содержащих известные агглютинины.
1.На чистые чашки Петри в обозначенные участки наносят по 1 капле сыворотки I, II и III групп двух серий, содержащих соответственно агглютинины: I – a и b, II – b и III – a.
2.В каждую каплю сыворотки, с помощью стеклянных палочек или разных углов предметных стекол, вносят небольшое количество донорской крови и тщательно размешивают кровь в капле сыворотки палочкой до тех пор, пока смесь не примет равномерного розового цвета.
3.Покачивают чашку Петри в течение 5 минут. При наличии агглютинации капля становится прозрачной, а эритроциты склеиваются в виде комочков.
4.По мере наступления агглютинации, но не раньше, чем через 3 минуты в каждую смесь добавляют по одной капле физиологического раствора для предупреждения образования «монетных столбиков» из эритроцитов.
5.Определяют наличие агглютинации в каждой капле и устанавливают группу крови.
· Отсутствие агглютинации во всех трех каплях говорит об отсутствии агглютиногенов А и В в эритроцитах исследуемой крови, такая кровь принадлежит O(I) группе.
· Если агглютинация произошла с сыворотками I и III групп, содержащих соответственно агглютинины ab и a, то, следовательно, эритроциты исследуемой крови содержат агглютиноген А и эта кровь принадлежит А(II) группе.
· Если агглютинация произошла с сыворотками I и II групп, содержащих агглютинины ab и b, то эритроциты исследуемой крови содержат агглютиноген В и эта кровь принадлежит В(III) группе.
· Наличие агглютинации в сыворотках всех трех групп указывает на присутствие в эритроцитах исследуемой крови агглютиногенов А и В, следовательно, она принадлежит АВ(IV) группе. Однако в этом случае для исключения неспецифической агглютинации эритроцитов необходимо провести дополнительное исследование со стандартной сывороткой группы АВ (IV). Отсутствие агглютинации в этой капле позволит считать реакцию специфической и отнести исследуемую кровь к АВ(IV).
Источниками ошибок могут быть:
1.Оценка реакции отрицательнойпри фактическом наличии агглютинации. Это может быть обусловлено:
1.1. Поздней или слабовыраженной агглютинацией в связи с малой активностью стандартных сывороток;
1.2. Нарушением соотношения 1:10 при взятии большого количества крови;
1.3. Наличием температуры воздуха большей, чем 25оС. В таких случаях исследования проводят при охлаждении стекла.
2.Оценка реакции положительной при практическом отсутствии агглютинации. Это может быть обусловлено:
2.1. Образованием «монетных столбиков»;
2.2. Наличием панагглютинации, которая развивается при t=15 о С; для
2.3. ее исключения следует повторить определение при более высокой температуре;
2.4. Подсыханием сывороток и образованием по краям капель «зернистости», принимаемой за агглютинацию. Это может быть в тех случаях, когда чтение результатов производится более чем через 5 минут.
Оформление протокола.Записать принцип метода определения группы крови, ход работы. Зарисовать полученные результаты: обозначить номер группы крови, агглютинины стандартных сывороток и отсутствие или наличие агглютинации, например.
 |
Вывод.Назвать и правильно записать группу крови. Обосновать полученный результат. Указать, в каких случаях исследуемая кровь может быть использована как донорская. Нарисовать схему совместимости групп крови системы АВО.