Лабораторная работа № 3.10. Определение количества гемоглобина

. Содержание гемоглобина в норме приведено в таблице 16.

Таблица 16 -Содержание гемоглобина в норме

Показатели	Пол	Система	Среднее значение
г%	г/л	Ед.	г%	г/л
Гемоглобин (Hb)	М	13,0 –16,0	130,0 -160,0	80-108	15,8
Ж	12,0 –15,0	120,0 -150,0	70-95	13,7

А). Гематиновый метод (метод Сали).

Цель работы: освоить калориметрический способ определения гемоглобина с помощью гемометра Сали.

Основан на превращении гемоглобина при добавлении к крови хлористоводородной кислоты в хлорид гематина коричневого цвета. В учебных целях используют гемометр Сали, состоящий из трех пробирок одинакового диаметра (рис.18). Одна (средняя) пробирка – пустая и сверху открыта, две другие запаянные и содержат стандартный раствор солянокислого гематина определенной окраски.

Оборудование:гемометр Сали, 0,1 % раствор НСl, смеситель, стерильный скарификатор, пипетка, дистиллированная вода, стеклянная палочка, спирт, вата.

Рис. 18 Гемометр Сали

1 - пробирки со стандартным раствором;

2 - градуированная пробирка с исследуемой кровью;

3 -смеситель;

4 - пипетка;

5 - палочка для смешивания.

ХОД РАБОТЫ

1.В градуированную пробирку гемометра Сали налить 0,1 % раствор соляной кислоты до нижней круговой метки – 0,2 мл.

2.Приготовить смеситель к забору крови (на тупой конец надеть резину, промыть водой и продуть).

3.Ватным тампоном протереть мякоть 4-го пальца левой руки и скарификатором проколоть палец

4.Первую каплю крови стереть сухим тампоном. Во вторую каплю погрузить кончик смесителя, держа его вертикально. Набрать крови до метки 0,2 мл.

5.Смеситель погрузить в градуированную пробирку гемометра и выдуть из нее кровь на дно пробирки.

6.Смеситель промыть 2-3 раза 0,1% раствором соляной кислоты из верхнего прозрачного слоя.

7.Содержимое пробирки тщательно перемешать, ударяя пальцем по ее концу и помешивать палочкой, а потом оставить на 5 минут.

8.В пробирку с раствором, размешивая палочкой, по каплям внести дистиллированную воду до полного совпадения цвета жидкости в градуированной пробирке с цветом стандарта.

9.Показания гемометра снять по нижнему мениску жидкости в градуированной пробирке.

Градуированная пробирка гемометра имеет две шкалы, нанесенные с обеих сторон. Одна шкала (с делениями от 2 до 23) показывает количество гемоглобина в граммах на 100 мл крови, грамм-процент (г%) гемоглобина. Вторая шкала (с делениями от 12 до 140) показывает единицы гемометра (или относительный процент гемоглобина), при этом 100 единиц (или 100% по гемометру Сали) означают, что в 100 мл крови содержится 16,67 г гемоглобина, или 100 единиц соответствует 16,67 г%.

10. Вычисление концентрации гемоглобина по формулам в г%, % и г/л

Пример 1. Равенство красок достигнуто на отметке 15 г% гемоглобина. Для расчета концентрации Hb в относительных процентах применяется формула:

Формула для расчета: Х = (100 % х 15 г%)/16,7 г%,

где Х – относительное содержание гемоглобина, %.

16,7 – стандартная концентрация Hb в г%.

Пример 2. Равенство красок достигнуто на отметке 80. Следовательно, исследуемая кровь содержит 80 % гемоглобина по сравнению со стандартом (16,7 г%)

Формула для расчета: Х = (16,7 г% х 80 %)/100 %,

где Х – количество гемоглобина в г%

Для того чтобы выразить концентрацию гемоглобина в граммах на литр (г/л), нужно количество гемоглобина в г% умножить на 10.

Пример 3. Гемоглобин – 13,5г% = 13,5 х 10 = 135 г/л.

Грамм процентное обозначение гемоглобина имеет преимущества перед обозначением просто в единицах, так как оно дает реальную количественную величину концентрации гемоглобина.

Оформление протокола

1. Определите концентрацию гемоглобина.

2. Занесите данные в таблицу 17

Таблица 17. -Собственные результаты исследований

Пол	Содержание гемоглобина в крови
	Полученные результаты	Норма
В грамм процентах (г%)
Мужчины		13,0 –16,0
Женщины		12,0 –15,0
В грамм на литр г/л
Мужчины		130,0 -160,0
Женщины		120,0 -150,0
В относительных процентах
Мужчины
Женщины

1. Сделайте заключение о соответствии полученных вами данных нормативным.

Б).Гемоглобинцианидный метод(сиспользованием фотометрического гемоглобинометра АГФ – 03/540 – «Минигем».

Оборудование:гемоглобинометр АГФ – 03/540 – «Минигем», трансформирующий раствор,стерильный скарификатор, гемоглобиновый капилляр (0.02 мл), пипетка с грушей (5мл), дистиллированная вода, стеклянная палочка, спирт, вата.

Ход работы:

1.Проверить оптический ноль прибора (в соответствии с техническим паспортом прибора).

2.Подготовить пробирки с трансформирующим раствором в объеме -5 мл.

3. Произвести забор капиллярной крови в гемоглобиновый капилляр и перенести в пробирки с трансформирующим раствором.

4. Тщательно перемешать стеклянной палочкой.

5.Через 20 мин. провести замер пробы, для чего перелить в оптическую кювету реакционную смесь из очередной пробирки и установить кювету в фотометрическую ячейку прибора.

6.Появление звукового сигнала свидетельствует о фотометрировании и на индикаторе появляется число, соответствующее концентрации гемоглобина (в гр./л).

7. Вылить содержимое кюветы, удалить оставшиеся капли с верхнего края кюветы при помощи бинта и перейти к очередному замеру.

Контрольные вопросы для самостоятельного изучения:

1.Строение молекулы гемоглобина

2.Строение молекулы миоглобина.

3.Соединения гемоглобина с различными газами и их значение.

4.Функции гемоглобина.

5.Функции миоглобина.

6.Как определить содержание гемоглобина в крови.

7.Типы гемоглобина у эмбриона, плода, новорожденного и детей раннего возраста.