Морфология прокариот. Методы выявления: окраска, микроскопия
ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ:
изучить морфологию прокариот; особенности ультраструктуры бактерий, функции отдельных структур; ознакомиться с методами приготовления и окраски микропрепаратов для микроскопии.
СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ЗНАТЬ:
1. Основные формы и размеры бактерий.
2. Протопласты, сферопласты и L-формы бактерий.
3. Постоянные и непостоянные структуры бактериальной клетки.
Функциональное значение отдельных структурных компонентов.
4. Различия в структуре грамположительных и грамотрицательных бактерий. Химический состав. Функции.
5. Механизмы взаимодействия красителей с клеточной стенкой бактерий при окраске по Граму.
6. Методы изучения микроорганизмов в нативном и окрашенном состоянии. Простые и сложные методы окрашивания. Методы Грама, Циля-Нильсена, Ожешко, Нейссера, Бурри-Гинса, Романовского-Гимза.
СТУДЕНТ ДОЛЖЕН УМЕТЬ:
n приготовить препараты: живые (нативные), фиксированные;
n окрасить препараты простым методом и методом Грама.
СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ИМЕТЬ ПРЕДСТАВЛЕНИЕ
о механизмах окраски структурных компонентов бактерий: клеточной стенки кислотоустойчивых бактерий, спор, капсул, жгутиков, включений.
Работа №1 Морфология прокариот
Цель: сравнить формы и размеры микроорганизмов (см. теоретическую справку - Морфология прокариот)
Результат:
Результат:
Результат:
Вывод:
Работа№2. Изучение структуры клеточной стенки
Цель: изучить структуру клеточной стенки бактерий; освоить технику приготовления фиксированных препаратов.
Схема строения бактериальной клетки:
А) Назвать обязательные компоненты бактериальной клетки и охарактеризовать их
Б) Дать характеристику перечисленных структурных компонентов бактериальной клетки, методы их выявления, охарактеризовать участие в процессах метаболизма и значение структур для процессов репродукции, биосинтеза белка, энергетической, регуляторной, адгезивной функциях клетки.
Структурные компоненты бактериальной клетки и их функции:
Постоянные компоненты и их природа | Функции | Метод выявления |
Клеточная стенка Гр + (пептидогликан, тейхоевые кислоты) Гр – ( пептидогликан, фосфолипиды, белки, ЛПС) | 1) Скелетная 2) Защитная 3) Рецепторная 4) Антигенная 5) Адгезивная 6) Транспортная 7) Нарушение синтеза клеточной стенки ведет к образованию L-форм | Световая микроскопия, окраска по Граму |
ЦПМ Двойной слой фосфолипидов с внедрёнными белками | 1) Основной осмотический барьер 2) Участвует в регуляции роста и синтезе компонентов клеточной стенки 3) Транспорт питательных веществ в клетку и метаболитов из нее 4) Инвагинации участков ЦПМ - лизосомы - содержат ферменты, обеспечивающие биологическое окисление | Электронная микроскопия |
Лизосомы Производные ЦПМ | 1) Аналог митохондрий, у эукариот обеспечивают синтез АТФ и процессы дыхания 2) Участвуют в делении клетки 3) Участвуют в спорообразовании | Электронная микроскопия |
Цитоплазма Сложная коллоидная система, состоит из воды, растворимых белков, РНК | Обеспечивает функционирование всех органелл | Электронная микроскопия |
Рибосомы 70S | Отвечают за биосинтез белка | Электронная микроскопия |
Нуклеоид Двунитевая молекула ДНК, замкнута в кольцо, плотно уложена в виде клубка | Расположен в центральной зоне бактерий (одна хромосома) – носитель генетической информации | Электронная микроскопия |
Непостоянные компоненты и их природа | Функции | Метод выявления |
Капсула Слизистая структура, прочно связана с клеточной стенкой (полисахариды или полипептиды) | 1) Защитная 2) Антигенная 3) Адгезивная | Световая микроскопия, окраска по Бурри, Бурри-Гинсу |
Жгутики Состоят из белка-флагеллина, являющимся Н-антигеном Пили Состоят из белка | Обеспечивают движение бактерий Пили 1го порядка обеспечивают адгезию к поражаемой микробной клетки. Пили 2го порядка – конъюгационные, обеспечивают перенос частиц генетического материала от донора к реципиенту | В мазках «висячая капля», «раздавленная капля», при фазово -контрастной микроскопии Электронная микроскопия |
Плазмиды Дополнительные факторы наследственности в виде замкнутых колец ДНК с небльшой молекулярной массой | 1) Регуляторная – компенсация нарушений метаболизма ДНК клетки хозяина 2) Кодирующая – внесение в бактериальную клетку новой генетической информации | Электронная микроскопия |
Включения Гликоген, полисахариды, бета-оксимасляная кислота, полифосфаты (валютин) | Запас питательных веществ | Световая микроскопия. Валютин окрашивают по Леффлеру или Нейссеру |
Спора Образуют Гр+ бактерии, из одной клетки образуется спора. Плотная многослойная оболочка, с большим содержанием кальция и липидов низким содержанием воды | Сохранение генетической информации, при неблагоприятных условиях. Расположена: - субтерминально - терминально - центрально | Световая микроскопия, окраска по Ожешко. |
Схема построения клеточной стенки: