Раздел: « учение об инфекции и иммунитете »
Занятие 11. Дата ______. Тема: «Учение об инфекции. Факторы врожденного иммунитета. Фагоцитоз»
Streptococcus pneumoniaeФагоцитоз Neisseria gonorrhoeae в гное
(в органах) S.aureus _(незавершенный фагоцитоз)
Окраска водным фуксином Окраска по Граму Окраска метиленовым синим
Рисунок 5. Факторы вирулентности стафилококков
Плазмокоагулаза Рост на 5% кровяном агаре (β-гемолиз) Рост на ЖСА (лецитовителлаза)
Таблица 10. Механизмы и пути передачи возбудителей инфекционных заболеваний
| Механизмы заражения | Пути передачи инфекции | Факторы передачи инфекции | "Входные ворота" инфекции | Группа инфекционных заболеваний | |
| Фекально-оральный | Пищевой (алиментарный) | Контаминированные пищевые продукты | Рот, желудочно-кишечный тракт | Кишечные инфекции | |
| Водный | Инфицированная вода | ||||
| Контактно-бытовой | Грязные руки, контаминированная посуда, насекомые-переносчики (мухи, тараканы) | ||||
| Аэрогенный | Воздушно-капельный | Капли слизи из зева при кашле, чихании, разговоре, шепоте и дыхании | Слизистые оболочки дыхательных путей | Респираторные инфекции (инфекции дыхательных путей) | |
| Воздушно-пылевой | Частицы пыли, несущие на себе микробы | ||||
| Аэрозольный | Пылевой или водный аэрозоль | ||||
| Кровяной | Прямой | Трансфузионный | Переливание зараженной крови | Кровь | Кровяные инфекции |
| Трансплацентарный | Через плаценту от матери к плоду | ||||
| Половой | Если были повреждения с выделением крови | ||||
| Непрямой | Трансмиссивный | Через кровососущих насекомых | |||
| Манипуляционный | Через нестерильные инструменты (иглы, шприцы, "опасная" бритва) с остатками крови на них | ||||
| Контактный | Контактный (прямой) | Контаминированные руки (при рукопожатии, дотрагивании и т.п.), поцелуй, укус животного, травма, прохождение плода через инфицированные родовые пути матери | Кожа, слизистые оболочки мочевыделительной и половой систем, конъюнктива глаз, волосы, ногти | Контактные инфекции | |
| Половой (прямой) | Половой контакт | Сексуально-трансмиссивные инфекции | |||
| Контактно-бытовой (непрямой) | Контаминированные предметы (контакт или ранение), все виды оружия, медицинская аппаратура, перевязочный материал | Контактные инфекции |
Занятие 12. Дата _______. Тема: «Реакции иммунитета (реакция агглютинации, РПГА, реакция Кумбса, реакция преципитации)»
Таблица 11. Развернутая реакция агглютинации с сывороткой больного
| Ингредиенты | пробирки | ||||||
| Контроль сыворотки | Контроль антигена | ||||||
| Изотонический раствор, мл | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | -- | 1,0 |
| Сыворотка больного в исходном разведении 1:25, мл | 1,0 | → | → | → | → вылить | 1,0 | -- |
| Разведения сыворотки | 1:50 | 1:100 | 1:200 | 1:400 | 1:800 | 1:25 | -- |
| Диагностикум (в каплях) | -- | ||||||
| Термостат при 37оС в течение 2 ч., затем при комнатной температуре 24 ч. | |||||||
| Результат: | |||||||
| ВЫВОДЫ: реакция агглютинации положительная. Титр антител к антигену - ________. |
Рисунок 6. Реакция агглютинации на стекле
 |
| ч.к. бактерий+ эшерихиозная сыв. | ч.к. бактерий + паратифозная сыворотка | Контроль (ч.к.+физ.р-р) |
ВЫВОД:
Рисунок 7. Схема реакции пассивной гемагглютинации (РПГА)
Таблица 12. Реакция пассивной (непрямой) гемагглютинации (РПГА)
| Ингредиенты | пробирки | |||||
| Контроль антигена | ||||||
| Изотонический раствор, мл | 0,25 | 0,25 | 0,25 | 0,25 | 0,25 | 0,25 |
| Сыворотка больного в исходном разведении 1:25, мл | 0,25 | → | → | → | →0,25 вылить | -- |
| Разведения сыворотки | 1:10 | 1:20 | 1:40 | 1:80 | 1:160 | -- |
| Эритроцитарный диагностикум, мл | 0,25 | 0,25 | 0,25 | 0,25 | 0,25 | 0,25 |
| При комнатной температуре в течение 30-60 минут | ||||||
| Результат: | ||||||
| ВЫВОД: реакция пассивной гемагглютинации положительная до титра __________. |
Таблица 13. Реакция кольцепреципитации для определения неизвестного белка
| Ингредиенты | Неизвестный белок |
| Преципитирующая сыворотка против белка человека | |
| Преципитирующая сыворотка против белка курицы | |
| ВЫВОД: Исследованный белок принадлежит ________________. |
Занятие 13. Дата _______. Тема: «Реакции иммунитета с участием комплемента: реакция иммунного гемолиза, РСК»
Таблица 14. Реакция иммунного гемолиза
| Ингредиенты | Опыт | Контроль | Контроль | Контроль | Контроль |
| Гемолитическая сыворотка кролика, мл | 0,5 | 0,5 | -- | 0,5 | -- |
| Эритроциты барана, мл | 0,5 | 0,5 | 0,5 | -- | 0,5 |
| Комплемент в разведении 1:10, мл | 0,5 | -- | 0,5 | 0,5 | -- |
| Эритроциты собаки, мл | -- | -- | -- | 0,5 | -- |
| Физиологический раствор, мл | -- | 0,5 | 0,5 | -- | 1,0 |
| Общий объем, мл | 1,5 | 1,5 | 1,5 | 1,5 | 1,5 |
| Инкубация при 37oC в течение 45-60 минут | |||||
| Результат: (гемолиз/отсутствие гемолиза): | |||||
| ВЫВОД: Реакция иммунного гемолиза положительная (отрицательная), т.к. _______ |
Таблица 15. Реакция титрования комплемента
| Ингредиенты | пробирки | ||||||||
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | Контроль комплем. 8 | Контроль гем. сист | |
| Комплемент в разведении 1:10, мл | 0,2 | 0,25 | 0,3 | 0,35 | 0,4 | 0,45 | 0,5 | 0,5 | -- |
| Изотонический раствор, мл | 1,3 | 1,25 | 1,2 | 1,15 | 1,1 | 1,05 | 1,0 | 1,5 | 1,5 |
| Гемолитическая система, мл | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 0,5 | 1,0 |
| Инкубация при 37oC в течение 30 минут | |||||||||
| Результаты: (гемолиз/отсутствие гемолиза): | |||||||||
| ВЫВОД: титр комплемента ______ мл; рабочая доза комплемента ________ мл. |
Рисунок 8. Схема реакции связывания комплемента (РСК)
Таблица 16.Реакция связывания комплемента с исследуемой сывороткой
| Ингредиенты | Опыт | Контроль сыворотки | Контроль антигена | |
| Исследуемая сыворотка в разведении 1:25, мл | 0,5 | 0,5 | -- | |
| Антиген (диагностикум), мл | 0,5 | -- | 0,5 | |
| Комплемент в рабочей дозе, мл | 0,5 | 0,5 | 0,5 | |
| Изотонический раствор, мл | -- | 0,5 | 0,5 | |
| Инкубация при 37oC в течение 45-60 минут | ||||
| Гемолитическая система, мл | 1,0 | 1,0 | 1,0 | |
| Инкубация при 37oC в течение 45-60 минут | ||||
| Результаты: (гемолиз/отсутствие гемолиза): | Сыворотка больного | |||
| Сыворотка здорового | ||||
| ВЫВОДЫ: РСК положительная/отрицательная с сывороткой здорового, т.к. ________________________________. РСК положительная/отрицательная с сывороткой больного, т.к. ________________________________. |
Условные обозначения: «+» - наличие гемолиза (РСК «-«),
«-» - отсутствие гемолиза (РСК «+«).
Занятие 14. Дата _______. Тема: «Реакции иммунитета с «мечеными» реагентами: РИФ (прямой и непрямой варианты), ИФА»
Рисунок 9. Схема проведения иммуноферментного анализа (ИФА, «метод сэндвича»)
Таблица 17.Схема постановки ИФА
| Ингредиенты | Опыт | «Положительный контроль» | «Отриц. контроль» | |||||
| A1 A2 | B1 B2 | C1 C2 | D1 D2 | E1 E2 | F1 F2 | G1 G2 | H1 H2 | |
| 1. Буфер A (мл) | 0,1 | 0,1 | 0,1 | 0,1 | 0,1 | 0,1 | 0,1 | 0,1 |
| Инкубация при комнатной температуре 10 мин. | ||||||||
| 2. Сыворотка больного (мл) | 0,1 | -- | -- | -- | -- | -- | -- | -- |
| 3. Стандартный антиген 100 мкг/мл (мл) | -- | 0,1 | → | → | → | → | →0,1 вылить | -- |
| 4. Отрицательный контроль (мл) | -- | -- | -- | -- | -- | -- | -- | 0,1 |
| Инкубация при 37oC в течение 20 мин. | ||||||||
| 5. Конъюгат (мл) | 0,1 | 0,1 | 0,1 | 0,1 | 0,1 | 0,1 | 0,1 | 0,1 |
| Инкубация при 37oC в течение 20 мин. | ||||||||
| 6. Субстрат (мл) | 0,1 | 0,1 | 0,1 | 0,1 | 0,1 | 0,1 | 0,1 | 0,1 |
| Инкубация при комнатной температуре 20 мин. | ||||||||
| 7. 50%H2SO4 (мл) | 0,05 | 0,05 | 0,05 | 0,05 | 0,05 | 0,05 | 0,05 | 0,05 |
| Результаты: | ||||||||
| ВЫВОДЫ: ИФА ________________(положительная/отрицательная). Концентрация HBs антигена _______ мкг/мл |
Занятие 15. Дата ______. Тема: «Медицинские иммунобиологические препараты для лечения, профилактики и диагностики заболеваний»
Таблица 18.Схема реакции флоккуляции для титрования анатоксина
| Ингредиенты | |||||
| Дифтерийный анатоксин, мл | 2,0 | 2,0 | 2,0 | 2,0 | 2,0 |
| Противодифтерийная антитоксическая сыворотка, мл (400 МЕ/мл) | 0,16 | 0,18 | 0,2 | 0,22 | 0,24 |
| Водяная баня 40-45˚C в течение 45 минут | |||||
| Результаты: (инициальная флоккуляция): | |||||
| Расчет: | |||||
| ВЫВОДЫ: Реакция флоккуляции ________________(положительна/отрицательна). Титр дифтерийного анатоксина __________ Lf/мл. |
Таблица 19.Схемаконтроля дифтерийного анатоксина
| Название анатоксина | Тип вакцины | Внешний вид (цвет, прозрачность) | Стерильность | Титр (см. табл.9) |
| Дифтерийный анатоксин | Неживая молекулярная вакцина | |||
| ВЫВОД: Дифтерийный анатоксин________________ (соответствует/не соответствует стандарту) по показателям _________. |
Схема 4.Препараты для создания искусственно-приобретенного активного иммунитета
Схема 5.Препараты для создания искусственно-приобретенного пассивного иммунитета
