Лабораторная диагностика. Материалы для исследования – кровь, СМЖ, слизь из зева
Материалы для исследования – кровь, СМЖ, слизь из зева, пунктаты увеличенных лимфатических узлов, у новорожденных дополнительно – меконий, пупочная кровь; секционный материал — кусочки мозга, печени, селезенки, лимфатические узлы. Посевы рекомендуется делать в первые 7-10 сутки болезни; кровь (10мл) и СМЖ (2-5 мл) засевают на 100-150 мл глюкозного, глюкозо-печеночного или глюкозо-глицеринового бульона; инкубируют при температуре 37°С до 3 недель. При посеве на глюкозо-кровяной агар отбирают типичные колонии (прозрачные или роговидные), дающие гемолиз. Также можно проводить посев на триптозный агар и просматривать чашки под микроскопом при косом освещении — суточные колонии листерий имеют сине-зеленую окраску.
Общие положения
Листериоз – инфекционное заболевание из группы зооантропонозов, характеризующееся полиморфностью клинического проявления, в последнее время как пищевая инфекция людей с тенденцией к генерализации, септикопиемии, а так же поражению различных органов и систем жизнедеятельности у людей и животных.
Листериоз относится к числу широко распространенных в мире инфекций, что обусловлено выраженной адаптационной способностью возбудителя. Исследования трех последних десятилетий позволили сформулировать заключение о повсеместном распространении данной инфекции в России.
Материалы для исследования
В бактериологическую лабораторию направляют не менее 200 грамм исследуемого субстрата, упакованного в водонепроницаемую тару и желательно в первые 1-3 часа после отбора. Если время доставки образцов свыше указанного срока, то материал допускается направлять в замороженном виде в термосе со льдом.
Порядок исследования материала
Бактериологическое исследование проводят в соответствии с прилагаемой ниже схемой, а идентификацию выросших колоний - по тестам, указанным в таблице 12. Оптимальным решением является постановка на исследование не одной пробы исследуемого образца, а целой серии в 10-12 проб.
Оценка результатов бактериологического исследования.
При соответствии полученных результатов по тестированию выделенной культуры с вышеуказанными данными полученный бактериальный штамм признают как бактериальную культуру вида Listeria monocytogenes.
В случае если изучаемая бактериальная культура не типируется как бактерии вида Listeria monocytogenes, возможен вариант повторного использования бактериальной суспензии со средой накопления, хранящейся в холодильнике при +4°С.
Общие сроки бактериологического исследования материала в пределах 7 суток.
Рисунок 9. Принципиальная схема выделения Listeria monocytogenes
Серологические исследования. Обычно ставят РА с листериозным диагностикумом.
Фаготипизация.Используют листериозные фаги L 2А и L4А (ВНИИВВиМ).
Таблица 12. Характеристика биологических свойств листерий, штаммов первой серогруппы (шт. 766) и второй серогруппы (шт. 634)
| Шт. 766 | Шт. 634 | |
| Окраска по Граму | + | + |
| Подвижность: 37°С | – | – |
| 22°С | + | + |
| В-гемолиз | + | + |
| Каталаза | + | + |
| ферментация: | ||
| Лактозы | + | + |
| Сахарозы | + | + |
| Глюкозы | + | + |
| Мальтозы | + | + |
| Маннита | – | – |
| Рамнозы | + | + |
| Дульцита | – | – |
| Арабинозы | – | – |
| Инозита | – | – |
| Сорбита | – | – |
| Салицина | + | + |
| Галактозы | – | – |
| Ксилозы | – | – |
| Раффинозы | – | – |
| Эскулина | + | + |
| Фруктозы | + | + |
| Конъюнктивальная проба (проба Антона) | + | + |
Биологическая проба. Лучше всего использовать белых мышей, иммуносупрессированных кортизоном (4-5 мг в/м за 4ч до заражения); после гибели животного (обычно на 2-6 сут.) производят посев материала из различных органов. Следует помнить, что листерии характерино «холодовое обогащение», и для избежания ошибок в диагностике часть патологического материала следует поместить в стерильные пробирки и хранить в течение 5-10 сут. при температуре 4-6°С, а затем подвергнуть повторному исследованию. Ставят конъюнктивальный тест на морских свинках (проба Антона).
Рецепты и способы приготовления питательных сред для выделения листерий
Среда с теллуритом калия
(Бакулов и др., 1970).
К 1 л расплавленного МПА (рН 7,2-7,4) перед разливом в бактериологические чашки добавляют 10 мл 2%-го водно-глицеринового раствора теллурита калия. Добавление к указанной среде 5-10% сыворотки крови крупного рогатого скота улучшает рост листерий.