Схема № 2 – Разведение антибиотика

№ пробирки	Указания для приготовления разведения	Концентрация антибиотика
	Основное разведение 2мл + 13,62 мл бульона	256 ЕД/мл
	2мл + 2 мл бульона	128 ЕД/мл
	1мл + 3 мл бульона	64 ЕД/мл
	1мл + 7 мл бульона	32 ЕД/мл
	2мл + 2 мл бульона	16 ЕД/мл
	1мл + 3мл бульона	8 ЕД/мл
	1мл + 7 мл бульона	4 ЕД/мл
	2мл + 2 мл бульона	2 ЕД/мл
	1 мл + 3 мл бульона	1 ЕД/мл
	1 мл + 7 мл бульона	0,5 ЕД/мл

3.Приготовление взвеси культуры микроорганизмов, выросшей на плотной среде. Полученную взвесь сравнивают с оптическим стандартом мутности № 10, а затем разводят стерильным изотоническим раствором NaCl до 10⁵ по схеме № 3.

Схема № 3 Приготовление взвеси микроорганизмов

Культура в разведении 10 ⁵ готовим 1 млрд = 10⁹ м.к./мл

0,1мл + 9,9 ф.р. = 10⁷

0,1 мл + 9,9 ф.р. = 10⁵

Постановка опыта.

В 12 стерильных пробирок разливают по 1 мл разведения антибиотиков. В 1-ую пробирку вносят 1 мл разведения антибиотика в 256 ЕД/мл, во 2-ую пробирку 1 мл антибиотика в 128 ЕД/мл. в 3-ую пробирку 64 ЕД/мл, в 4-ую – 32 ЕД/мл, в 5-ую – 16 ЕД/мл, в 6-ую – 8ЕД/мл, в 7-ую – 4 ЕД/мл. в 8-ую – 2 ЕД/мл, в 9-ую – 1 ЕД/мл, в 10-ую – 0,5 ЕД/мл. Содержимое 11-ой пробирки служит контролем роста бактерий (КК), а 12-ой контролем стерильности среды (КС). Во все пробирки, кроме 12-й, вносят 0,2 мл испытуемой культуры (10⁵) (схема № 4). Посев инкубируют в термостате в течение 18-24ч и регистрируют результаты опыта.

УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТА. Учет результата проводят при наличии роста в КК и отсутствии роста в КС. Затем отмечают последнюю пробирку с полной видимой задержкой роста микробов. Количество антибиотика в этой пробирке является минимальной ингибирующей концентрацией (МИК) для исследуемого штамма и определяет степень его чувствительности к данному антибиотику.

Схема № 4 Определение чувствительности бактерий к антибиотикам

10⁵

По 02 мл

37⁰С 18-24 ч К₁ – контроль культуры

К₂ – контроль бульона

УЧЕТ:МИК препарата определяют по последней пробирке с отсутствием роста

IV. Выходной контроль.Тестовый опрос.

Методические рекомендации студентам к практическому занятию

по теме: «Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам методом «серийных разведений»»

1. Что представляют собой антибиотики?

2.какое явление лежит в основе действия антибиотиков?

3.Каковы источники получения антибиотиков?

4.Как различаются антибиотики по механизму антимикробного действия?

5.Каков характер действия антибиотиков?

6.Какие возможные осложнения со стороны макроорганизма при антибиотикотерапии?

7.Какие существуют методы определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам?