Активность глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы

В норме 3—11 % эритроцитов периферической крови содержат глюкозо-6-фосфатдегид-рогеназу (Г-6-ФД).

Определение активности фермента в эритроцитах является основным методом диагнос­тики наиболее распространенной наследственной гемолитической анемии, обусловленной дефицитом активности Г-6-ФД эритроцитов. Дефицит этого фермента может проявляться на фоне лечения различными лекарственными препаратами. Первый этап метаболизма лекарст­венного препарата в организме — переход в активную форму. Активная форма лекарства вступает во взаимодействие с оксигемоглобином, при этом образуется перекись водорода. Восстановленный глутатион при помощи системы пероксидазы глутатиона обезвреживает

перекись, в процессе реакции восстановленный глутатион окисляется. Дефицит активности Г-6-ФД в эритроцитах приводит к нарушению восстановления НАДФ, который идет на вос­становление окисленного глутатиона. Окисленный глутатион не может противостоять окис­лительному действию обычных доз лекарств. Это приводит к окислению гемоглобина, поте­ре гема из молекулы гемоглобина, выпадению в осадок цепей глобина; появляются тельца Гейнца. Селезенка освобождает эритроциты от телец Гейнца, при этом теряется часть кле­точной мембраны, что приводит к их гибели (гемолизу). Помимо этого, идет и внутрисосу-дистый гемолиз.

Эксперты ВОЗ подразделяют варианты дефицита Г-6-ФД на 4 класса в соответствии с клиническими проявлениями и уровнем активности фермента в эритроцитах:

1-й класс — варианты, которые сопровождаются хронической гемолитической анемией и отсутствием фермента в эритроцитах;

2-й класс — варианты с уровнем активности фермента в эритроцитах 0—10 % от нормы, носительство которых обусловливает отсутствие гемолитической анемии вне криза и кризы, связанные с приемом лекарств или употреблением конских бобов;

3-й класс — варианты с уровнем активности фермента в эритроцитах 10—60 % от нормы, при которых могут быть легкие клинические проявления, связанные с приемом ле­карств;

4-й класс — варианты с нормальным или близким к норме уровнем активности без кли­нических проявлений.

Активность Г-6-ФД в эритроцитах не всегда коррелирует с тяжестью клинических про­явлений. При многих вариантах 1-го класса определяется 20—30 % активности фермента, а при нулевой активности у некоторых носителей не наблюдают никакой клинической симп­томатики [Воробьев А.И., 1985].

Гликоген в клетках

Энергетические потребности клетки обеспечиваются гликогеном. Для обнаружения его в клетках применяют ШИК-реакцию (PAS-реакция). Наиболее богаты гликогеном клетки гранулоцитарного ряда. Он выявляется, хотя далеко не всегда, уже в миелобластах. По мере созревания клеток этого ряда содержание гликогена в них закономерно возрастает. Аграну-лоциты костного мозга и периферической крови обычно либо лишены гликогена, либо со­держат незначительное количество гликогена в виде немногочисленных хорошо контуриро-ванных гранул, что особенно свойственно лимфоцитам. Нормальные лимфобласты еще реже, чем зрелые лимфоциты, содержат гранулы гликогена. В моноцитах гликоген чаще всего выявляется в виде мелкой пылевидной зернистости. Эозинофильные лейкоциты содер­жат небольшие количества гликогена в виде диффузного окрашивания. В нормальных клет­ках эритропоэза и плазматических клетках гликоген не обнаруживается. Нормальные вели­чины содержания гликогена в клетках приведены в табл. 2.12.

Таблица 2.12. Содержание гликогена в клетках в норме [Меньшиков В.В., 1982]

Клетки	Активность гликогена, %	СЦК
Миел областы		0,80-0,84
Миелоциты		1,38-1,54
Зрелые гранулоциты:
костного мозга	90-95	2,11-2,21
крови	95-100	2,27-2,35
Из них:
(+)	4-18
(++)	72-90
(+++)	2-12
Мегакариоциты	58-66	1,23-1,41
Лимфоциты:
костного мозга	6-11	0,06-0,10
крови	8-13	0,08-0,12

5 -5812

Определение гликогена в бластных клетках имеет значение в дифференциальной диа­гностике различных форм острого лейкоза. Миелобласты при остром миелобластном лейко­зе имеют тенденцию к значительному снижению содержания гликогена, тогда как при ост­ром лимфобластном лейкозе лимфобласты окрашиваются интенсивно.

Монобласты при остром монобластном лейкозе окрашиваются по разному — от отрица­тельных до сильно положительных.

Эритробласты при остром эритромиелозе содержат гликоген в виде средних и крупных гранул, расположенных в цитоплазме концентрическими кольцами.

Положительная ШИК-реакция может появиться в эритробластах при гемолитических анемиях (особенно талассемии), железодефицитных анемиях, болезни Кули.

Увеличение содержания гликогена в нейтрофилах наблюдается при различных воспали­тельных процессах, эритремии, сахарном диабете; уменьшение — при агранулоцитозах, лу­чевой болезни, при хроническом миелолейкозе, особенно при прогрессировании процесса. Повышение числа гликоген-положительных лимфоцитов (до 70—80 %) характерно особенно для хронического лимфолейкоза и лимфопролиферативных заболеваний (лимфосаркома), но также отмечается при реактивных изменениях.

При тромбоцитопенической пурпуре и симптоматических тромбоцитопениях число гли­коген-положительных форм мегакариоцитов значительно снижено; после спленэктомии оно повышается до нормальных величин.

Лимфоидные клетки костного мозга при макроглобулинемии содержат гликоген. Этот признак имеет дифференциально-диагностическое значение для того, чтобы отличить дан­ные клетки от миеломных.

Липиды в клетках

Липиды локализованы в цитоплазме клеток; играют важную роль в проницаемости мем­бран. В норме клетки гранулоцитарного ряда дают положительную реакцию на липиды, уси­ливающуюся с увеличением зрелости клеток. Миелобласты могут быть отрицательными или содержать несколько мелких гранул. Эозинофильные клетки на всех стадиях созревания дают сильноположительную реакцию на липиды. Реакция в базофилах вариабельна: некото­рые клетки реагируют отрицательно, другие окрашиваются положительно. Положительная окраска в базофильных клетках имеет тенденцию уменьшаться по мере увеличения клеточ­ной зрелости. Лимфоциты и их предшественники реагируют отрицательно. Моноциты и их предшественники могут иногда давать отрицательную реакцию, но чаще содержат вариа­бельное число мелких или крупных гранул. Мегакариоциты и тромбоциты обычно реагируют отрицательно при окраске на липиды. Клетки эритроидного ряда на липиды реагируют отри­цательно. Содержание липидов в клетках в норме приведено в табл. 2.13, а в бластных клет­ках при различных формах лейкозов — в табл. 2.14.

Таблица 2.13. Содержание липидов в клетках в норме [Меньшиков В.В., 1982]

Клетки	Активность липидов, %	СЦК
Миелобласты		0,82-1,10
Миелоциты		1,24-1,40
Зрелые гранулоциты:
костного мозга	90-95	2,42-2,54
крови	95-100	2,48-2,56
Из них:
(+)	18-36
(++) (+++)	69-80
Мегакариоциты
Лимфоциты:
костного мозга
крови
Моноциты	25-88	0,49-1,17

Таблица 2.14. Содержание липидов в властных клетках при различных формах лейкозов [Marmont A.M. et al., 1981]

		FAB-классификация лейкозов	Реакция на липиды
МО	(острый	недифференцированный лейкоз)	Отрицательная
Ml	(острый	миелобластный лейкоз без созревания)	Положительная
M2	(острый	миелобластный лейкоз с созреванием)	»
мз	(острый	промиелоцитарный лейкоз)	»
М4	(острый	миеломонобластный лейкоз)	»
М5	(острый	монобластный лейкоз)	Может быть положительная
Мб	(острый	эритромиелоз)	Отрицательная
М7	(острый	мегакариобластный лейкоз)	»
Острый лимфобластный лейкоз	То же

Определение липидов имеет важное диагностическое значение в идентификации бласт-ных клеток, отрицательно реагирующих на миелопероксидазу при острых лейкозах. Вы­явление в таких клетках липидов говорит об их принадлежности к гранулоцитарному или моноцитарному ряду и позволяет отдифференцировать острый миелобластный, промиелоци­тарный, миеломонобластный и монобластный лейкозы от острого лимфобластного лейкоза.

При хроническом миелолейкозе содержание липидов в гранулоцитах снижено. Сниже­ние содержания липидов в нейтрофилах обнаруживают при ревматизме и других воспали­тельных процессах.

Положительную реакцию на липиды дают макрофаги костного мозга при болезни Гоше, болезни Нимана—Пика, эозинофильной гранулеме и болезни Хенда—Шюллера—Крисчена.

Все цитохимические особенности патологических клеток, на основе которых проводит­ся дифференциальная диагностика острых лейкозов, представлены в табл. 2.15.

Таблица 2.15. Цитохимические особенности властных клеток, на основе которых проводится диф­ференциация вариантов острых лейкозов

Форма острого лейкоза	Пероксидаза	Липиды	PAS-реакция	Неспецифиче­ская эстераза	Хлорацетат-эстераза	Кислая фосфатаза
Недиффе-	отрицательная	отрицательная	отрицательная	отрицательная	отрицательная	отрицатель-
ренцируе-						ная
мый
Лимфо-	отрицательная	отрицательная	положитель-	отрицательная	отрицательная	иногда по-
бластный			ная крупно-	или слабо по-		ложительная
			гранулярная	ложительная,		диффузная
				не ингибиру-
				ется NaF
Миело-	положитель-	положитель-	положитель-	слабоположи-	положитель-	положитель-
бластный	ная	ная	ная диффуз-	тельная, не	ная	ная
			ная	ингибируется
				NaF
Миеломо-	слабоположи-	слабоположи-	положитель-	выраженная	отрицательная	выраженная
нобластный	тельная	тельная	ная мелко-	положитель-		положитель-
			гранулярная	ная, не инги-		ная
				бируется NaF
Монобласт-	слабоположи-	слабоположи-	положитель-	выраженная	отрицательная	выраженная
ный	тельная или	тельная или	ная мелко-	положитель-		положитель-
	отрицательная	отрицательная	гранулярная	ная, ингиби-		ная
				руется NaF
Промиело-	выраженная	выраженная	выраженная	выраженная	выраженная	выраженная
цитарный	положитель-	положитель-	положитель-	положитель-	положитель-	положитель-
	ная	ная	ная	ная, не инги-	ная	ная
				бируется NaF

Продолжение табл. 2.15