Приготовление препаратов для микроскопирования.

Препараты для микроскопирования готовят из крови, мочи, фекалий, колоний бактерий, тканей животных и растений и др. В некоторых случаях приготовление препаратов несложно, в других - требует специальной техники.

Наиболее просто готовят так называемые нативные препараты, т.е. объекты в естественном их виде. В этом случае материал наносят на предметное стекло и покрывают тонким покровным стеклом. Иногда его смешивают с изотоническим раствором хлорида натрия или глицерином для разжижения, осветления и предохранения от высыхания. Так готовят препараты дл микроскопического исследования осадка мочи, мокроты, фекалий.

Широко распространён метод окраски препаратов для микроскопирования. Способ окраски зависит от особенностей исследуемого материала и цели исследования.

Различные части препарата воспринимают краску по-разному, что делает их более чёткими, позволяет отличить друг от друга отдельные структуры. Например, мазки крови окрашиваются азур-эозином для подсчёта лейкоцитарной формулы, фуксином - для подсчёта тромбоцитов, азуром II -для подсчёта ретикулоцитов.

Для бактериоскопии - изучения под микроскопом микроорганизмов -существует большое количество методов окраски, в том числе и сложных -двумя и более красителями.

Существует негативный метод окраски, т.е. окрашивается фон препарата, на котором отчётливо видны неокрашенные микроорганизмы, например бледная трепонема.

Препарат для микроскопии не может быть толстым или плотным, так как свет должен хорошо проходить сквозь него, поэтому приготовление гистологических препаратов из тканей требует довольно сложной техники. Ткань обрабатывают спиртами, формалином или фиксирующими смесями, пропитывают целлоидином, парафином или желатином. Затем получают тончайшие срезы ткани при помощи специального прибора - микротома. После этого срезы окрашивают гематоксилин-эозином, Суданом, сложными смесями красителей, серебром и т.д. Срезы закрепляют на предметных стёклах смесью белка с глицерином. Для сохранения препаратов срезы заливают канадским бальзамом и покрывают покровным стеклом. Бальзам засыхает и гистологический препарат может храниться в течение многих лет.

Техника микроскопирования под средним и большим

Увеличением

Вращая верхнюю часть предметного столика, винтами устанавливают в центре поля зрения ту часть объекта, которую нужно рассматривать при большом увеличении. Затем, не поднимая тубуса, поворачивают револьвер так, чтобы поместить над объектом объектив № 40. Свет необходимо усилить: открыть диафрагму и приподнять конденсор до среднего положения. Снова находят рабочее расстояние между объективом № 40 и объектом. Для этого объектива оно равно примерно 2-3 мм.

Фокусировку производят очень осторожно, чтобы не допустить соприкосновения объектива с препаратом и повреждения того или другого, так как объектив почти касается препарата. Под контролем глаза медленно поднимают тубус до получения изображения объекта. Вращением микровинта добиваются чёткости изображения.

Иммерсионноемикроскопирование применяется при необходимости наибольшего увеличения. На препарат, а в некоторых случаях и на верхнюю линзу конденсора наносят каплю иммерсионного масла. Обычно для иммерсии применяют кедровое масло. Освещение должно быть сильным, т.е. конденсор поднят до отказа и диафрагма открыта. Иммерсионное масло применяют для создания между препаратом и объективом однородной среды,преломляющей световые лучи так же, как и линзы объектива. Это способствует получению чёткого изображения при большом увеличении.

Препарат помещают на предметный столик и прижимают к нему клеммами. Объектив № 90 погружают в каплю иммерсионного масла до соприкосновения с препаратом. Затем, глядя в окуляр, поднимают тубус очень осторожными движениями макровинта, так как рабочее расстояние между объективом и объектом в этом случае равно 1-1,5 мм. При помощи микровинта получают чёткое изображение и просматривают объект послойно.

При работе с микровинтом следует поворачивать его медленно на неполный оборот. Ни в коем случае не следует свободно и много вращать микровинт: это расстраивает Микромеханизм, что приводит к нарушению регулировки и уменьшению чёткости изображения.

Микроскопическое изучение объекта следует проводить поочерёдно то левым, то правым глазом. При этом оба глаза должны быть открыты, это предотвращает утомление. При работе необходимо удобно сидеть, не нагибаясь низко к окуляру. После каждого часа микроскопирования следует 10 мин отдыхать.