Этапы приготовления питательных сред

1. Подготовка посуды.

Посуду вымыть, просушить. Посуду для питательных сред запрещается использовать в других целях, т.к. примеси посторонних веществ могут препятствовать росту микроорганизмов.

2. Варка среды.

3. Установление рН – проводят с помощью индикаторных бумажек.

4. Осветление – проводят, если среда помутнела при помощи белка куриного яйца.

5. Фильтрация через ватно-марлевый фильтр.

6.Разлив в посуду.

7.Стерилизация - проводится в автоклавах при температуре 80 -120 °С.

8.Контроль готовых сред:

1)На стерильность – чашки со средой ставят в термостат на 2 суток, если на чашках не будет признаков роста микроорганизмов, то среды считаются стерильными.

2)Химический – определение рН среды, содержание азота, пептона, хлоридов и др.

3) Биологический – на питательность. Среды засевают микроорганизмами и по их росту судят о питательных свойствах среды.

Задание 8. Ответьте на вопросы.

1. Каким требованиям должны соответствовать питательные среды (ПС)?

2. На какие группы классифицируют ПС?

3. Какие виды сред в группе по происхождению?

4. Какие виды сред в группе сложности?

5. Какие виды сред в группе по консистенции?

6. Какие виды сред в группе по целевому назначению?

7. Какие этапы имеет процесс приготовления питательной среды?

8. Как проводится осветление?

9. Сколько видов контроля должна пройти готовая питательная среда?

Задание 9. Подпишите чашки вашим номером. Еще раз просмотрите материал «Питательные среды».

Задание 10.

Прочитайте текст «Методы посевов микроорганизмов на питательные среды». Обсудите в паре.

Методы посевов микроорганизмов на питательные среды.

Посев — один из стационарных методов культивирования микроорганизмов на питательных средах.

В зависимости от содержания исследуемых бактерий в образце, проводят посев на плотные питательные среды (для получения изолированных колоний и определения чистоты культуры).

Если в исследуемом материале содержание микроорганизмов незначительное, то посев проводят на жидкие среды обогащения.

Во время посева материала необходимо исключить попадание других микроорганизмов, поэтому нельзя разговаривать во время посева, работу производить быстро и соблюдать технику личной безопасности.

Инструменты для посева микроорганизмов

1. Микробиологический шпатель.

2. Пастеровская пипетка.

3. Бактериальная петля.

Различают различные методы посева.

1. Метод истощающего штриха. Применяют для получения отдельных колоний.

2. Метод посева сплошным газоном. Применяют при определении общего микробного числа или при определении чувствительности бактерий к антибиотикам.

Метод посева истощающим штрихом.

В основе метода лежит механическое разобщение микробных клеток путем снижения их концентрации по ходу нанесения исследуемого материала бактериологической петлей штриховымидвижениями по поверхности плотной питательной среды (а) и последующим их культивированием с целью получения изолированных колоний.

Метод Дригальского.

Посевы «газоном» производят на плотную питательную среду в чашке Петри. Для этого петлёй, пипеткой или шпателем наносят посевной материал на всю поверхность питательного агара по методу Дригальского. После инкубации посева появляется равномерный сплошной рост бактерий с разделением их на колонии.

Для взятия санитарного смыва мы используем метод посева истощающим штрихом для получения отдельных колоний.

Задание 11. Прочитайте текст «Взятие смыва с объектов внешней среды».

Взятие и посев смыва с объектов внешней среды

Смывы берутся стерильными ватными тампонами, помещенными в пробирки с физиологическим раствором хлорида натрия.

Смывы проводятся для оценки санитарно-гигиенического состояния предприятий общепита, лечебно- профилактических учреждений, детских учреждений.

Взятие смыва проводится с объектов внешней среды с поверхности площадью 10´10 см. Каждый смыв берется только с одного объекта исследования.

Используют ватные тампоны (палочка с намотанной на нее ватой вставлена в пробирку) или салфетки 5×5 см, которые захватывают стерильным пинцетом. Тампоны и салфетки увлажняют, помещая их в пробирки с 2 мл изотонического раствора натрия хлорида.

1. Тампон перед взятием смыва смочить в физиологическом растворе в пробирке.

2. Вынуть из пробирки.

3. Провести взятие смыва тампоном с исследуемой поверхности.

4. Опустить тампон в пробирку и в течение часа доставить в лабораторию.

Посев тампоном.

Тампон с посевным материалом вносят в приоткрытую чашку и методом истощающего штриха аккуратно, не повреждая агара, втирают в поверхность среды.

Задание 12.

1. Налейте в пробирку 2 мл физ. раствора.

2. Приготовьте ватные тампоны на металлических палочках.

3. Опустите в пробирку, смочите ватный тампон.

4. Возьмите санитарный смыв с выбранного объекта: со стен, кнопки лифта, ручки двери, водопроводного крана.

5. Опустите в пробирку ватный тампон.

6. Осуществите посев.

7. Переверните дном вверх, для предотвращения попадания конденсата на растущие колонии.

8. Поставьте в термостат при t 37⁰С.

9. Приготовьтесь к итоговому опросу и выполнению теста.

3. Заключительная часть.

1. Формирование отчета по выполненной практике.

При формировании отчета ориентируйтесь на цель практики, и. выполненные вами практические действия. Запищите, чему вы научились и что вами было сделано.

2. Прочитайте итоговые вопросы по теме занятия, подготовьте короткие ответы.

Итоговые вопросы по теме занятия

1. Где существуют микробиологические лаборатории?

2. Какие исследования проводятся в микробиологических лабораториях при ЛПУ?

3. Какие исследования проводятся в лабораториях при ЦСЭН?

4. Что служит материалом для исследования в микробиологических лабораториях?

5. Как должен осуществляться забор материала для исследования?

6. Каковы правила работы в микробиологической лаборатории.

7. Каковы условия культивирования микроорганизмов?

8. Какие требования предъявляются к питательным средам для выращивания микроорганизмов?

9. Какими по консистенции бывают питательные среды?

10. На какие группы делятся питательные среды по целевому назначению?

11. Что такое агар-агар?

12. Назовите этапы приготовления питательных сред.

13. Какие виды контроля готовых сред вы знаете?

14. Какие методы посева микроорганизмов вы знаете?

15. Как проводится взятие смывов с объектов внешней среды?

3. Выполните итоговый тест по теме «Питательные среды». Проверьте.

4. Подведение итогов. Выслушайте итоговую оценку.

5. Домашнее задание. Подготовиться к теме практ. 2 «Морфология микроорганизмов. Микроскопический метод». Лек. 2-3

6. Приведите в порядок свое рабочее место.