Условия культивирования микроорганизмов
1.Температура +37°С – выращивание микроорганизмов проводится в термостате.
2. Влажность.
3. Аэрация – доступ воздуха.
4. Питательные среды.
Задание 6. Изучите алгоритм приготовления питательной среды Эндо.
ü Ответственные за приготовление среды, варят среду.
1. Навеску препарата в количестве 4 г на 100 мл, тщательно размешивают в 100 мл дистиллированной воды, нагревают до кипения, периодически перемешивая, не давая вспениваться, и кипятят 3 мин до полного расплавления агара.
2. Горячую среду фильтруют через ватно-марлевый фильтр и снова доводят до кипения.
3. Среду охлаждают до температуры 45-50°С, и разливают в стерильные чашки Петри.
Характеристика среды Эндо.
Среда Эндо — дифференциально-диагностическая питательная среда, предназначенная для выделения Escherichia coli. Названа по имени предложившего её японского бактериолога Сигэру Эндо (1869—1937). Обладает слабыми селективными свойствами, компоненты среды подавляют рост грамположительных бактерий.
Готовая к употреблению среда Эндо имеет бледно-розовый цвет либо бесцветна
Состав.
- Пептон ферментативный – 10,0
- Гидролизат казеина неглубокой степени расщепления ферментативный сухой - 10,0
- Дрожжевой экстракт – 1,0
- Натрия хлорид – 3,4
- Натрия сульфит – 0,8
- Натрия гидроортофосфат – 0,75
- лактоза – 10,0
- фуксин основной – 0,2
- агар микробиологический – 10,5 ± 2,5
pH 7,3 ± 0,2
Задание 7. Изучите материал «Питательные среды». Обсудите в паре: требования, классификацию, этапы приготовления питательных сред.
Питательные среды
Требования к питательным средам
1. Питательность – наличие всех питательных веществ;
2. Реакция рН – 7,2 (слабощелочная);
3. Оптимальная влажность.
4. Определенная вязкость.
5. Изотоничность – соответствие 0,5% раствору натрия хлорида.
6. Стерильность, чтобы другие микробы не препятствовали росту изучаемой микрофлоры.
7. Прозрачность.
Классификация питательных сред
1. По степени сложности:
- Простые;
- Сложные.
2. По происхождению:
- Натуральные (МПБ – мясо-пептонный бульон, пептонная вода и др.);
- Синтетические.
3. По консистенции:
- Жидкие;
- Полужидкие;
- Плотные. Для их получения в среду добавляют агар-агар, полученный из морских водорослей, при застывании которого среда становится плотной.
4. По целевому назначению:
- Основные: (мясо-пептонный бульон, питательный агар и др.) применяются для выращивания большинства микроорганизмов.
- Элективные: для выращивания определенного вида микроба.
- Дифференциально-диагностические: для отличия одних микроорганизмов от других (среды Гисса с добавлением углеводов).
- Консервирующие: предназначены для первичного посева при длительной транспортировке исследуемого материала.
ТВЕРДЫЕ
УНИВЕРСАЛЬНЫЕ
ПИТАТЕЛЬНЫЙ АГАР или МПА (мясо-пептонный агар) используют для выращивания бактерий, содержит гидролизат кильки, экстракт дрожжей, агар, хлорид натрия и дистиллированную воду. Растворяют ингредиенты, кипятят, фильтруют, стерилизуют (120 гр. С 20 минут). Затем разливают в стерильные пробирки или чашки Петри. На чашке с агаром видны разнообразные колонии микробов, выросшие в при посеве воздуха.
Смесь бактерий. На чашке с МПА видны различные колонии бактерий, отличающиеся по цвету, форме, размерам, прозрачности…. Культуральные свойства Escherichia coli: круглые с ровными краями, гладкие, влажные, слизистые, полупрозрачные колонии.
дифференциально-диагностическая и селективная
ЖЕЛТОЧНО-СОЛЕВОЙ АГАР ЧИСТОВИЧА - для культивирования стафилококков. Содержит питательный агар, желток куриного яйца, повышенные концентрации хлорида натрия (8-10%), которые не препятствуют размножению стафилококков и обеспечивают элективность среды для данных микробов. Среда позволяет дифференцировать лецитиназопозитивные стафилококки, вокруг колоний которых образуются зоны помутнения с перламутровым оттенком.
КРОВЯНОЙ АГАР питательная среда для выявления гемолитических свойств бактерий. К расплавленному остуженному (до 45-50 гр С) питательному агару асептически добавляют 5-10% дефибринированной крови, хорошо перемешивают и сразу же разливают в чашки Петри. Вокруг выросших колоний отчетливо видны прозрачные зоны гемолиза.
ТВЕРДЫЕ
дифференциально-диагностическая и селективная
СРЕДА ПЛОСКИРЕВА способствует лучшему росту некоторых бактерий (возбудители брюшного тифа, паратифов, дизентерий) и подавляет рост других (кишечная палочка и пр.). Содержит питательный агар с лактозой, бриллиантовым зеленым, солями желчных кислот, минеральными солями и индикатором (нейтральный красный). Лактозонегативные колонии вырастают бесцветными, лактозопозитивные – красными. На некоторых модификациях среды Плоскирева выявляется еще и способность сальмонелл выделять сероводород: выросшие колонии чернеют.
ЖИДКИЕ
Селективная среда с маннитом и желчью
Для выявления анаэробов