Изолирование водой, подкисленной щавелевой кислотой

(метод Васильевой)

Идея изолирования подкисленной водой высказывалась разными исследователями. Так, еще в 1856 году С.Макадам предложил для подкисления воды использовать щавелевую кислоту, в 1861 г. Усляр и Эрдман -соляную, а в 1865 г. Г.Драгендорф - серную. Вплоть до 1941 г. водный метод не получал широкого распространения. В 1942-43 гг. Степановым А.В. и Швайковой М.Д. был предложен метод изолирования алкалоидов из объектов растительного происхождения водой, подкисленной щавелевой кислотой (ускоренный метод). В 1947-49 гг. этот метод был применен А.А.Васильевой к трупному материалу, после чего он вошел в практику судебно-химического анализа в отечественных лабораториях.

Схема изолирования по методу Васильевой заключается в следующем:

· Настаивание измельченного объекта с водой, подкисленной щавелевой кислотой до рН2-3, в течение двух часов. Вода берется в количестве 1:2 по отношению к навеске объекта. Водное извлечение фильтруется.

· Экстрагирование веществ кислого, нейтрального и слабоосновного характера из водного фильтрата хлороформом при рН=2 (трехкратная экстракция), отделение органической фазы и концентрирование полученного извлечения упариванием ( фракция А, «кислое» извлечение).

· Подщелачивание оставшегося после разделения фаз водного слоя раствором аммиака до рН 9-10, экстрагирование веществ основного характера трехкратной экстракцией хлороформом, отделение органической фазы и концентрирование упариванием (фракция Б, «щелочное» извлечение).

Изолирование «нелетучих» ядов из биологического материала водой, подкисленной щавелевой кислотой (метод Васильевой) проводится по следующей схеме:

По сравнению с изолированием подкисленным спиртом извлечение водой, подкисленной щавелевой кислотой, обладает рядом преимуществ:

1. Быстрота (анализ можно провести в течение одного рабочего дня).

2. Меньшее количеством операций, меньшие потери искомых веществ (алкалоиды извлекаются на 30-40%).

3. Экономичность и дешевизна, т.к. дорогой спирт заменен водой.

Недостатком метода является образование стойких эмульсий при экстрагировании веществ из водной фазы хлороформом, особенно при исследовании гнилостного биоматериала, т.к. метод не предусматривает очистки извлечений.

Частные методы изолирования :

- изолирование барбитуратов подщелоченной водой (метод американского ученого Валова)

- изолирование алкалоидов водой, подкисленной серной кислотой (по В.Ф.Крамаренко)

- другие методы для отдельных групп веществ

Изолирование барбитуратов подщелоченной водой (метод Валова) схематично можно представить следующим образом:

· Настаивание измельченного объекта с водой, подщелоченной 20% раствором гидроксида натрия до рН 10 и более, в течение 30 минут.

· Очистка водного извлечения путем насыщения вольфраматом натрия в кислой среде (Н₂SO₄ до рН 2), фильтрование раствора.

· Экстрагирование эфиром, концентрирование эфирного извлечения упариванием.

Выход составляет 50% и даже до 90% в зависимости от вида барбитурата. Метод дает достаточно чистые извлечения, т.к. включает стадию очистки (осаждение белков вольфраматом натрия), что повышает качество последующего анализа.

Изолирование барбитуратов из биологического материала частным методом (метод Валова) проводится по следующей схеме:

100 г

органа

Выход 50% и >

Недостатком метода является соосаждение барбитуратов с белками при обработке вольфраматом натрия. В последней модификации метода Н₂SO₄ заменена NaHSO₄, что увеличивает выход искомых веществ.