А. Для обнаружения антител

1.Реакция Райта (титр антител определяют в международных единицах - МЕ. Диагностическое значение имеет титр антител более 200 МЕ/мл.

2.Реакция Кумбса (для определения неполных антител).

3.Ускоренные реакции: Хеддльсона, роз-бенгал, латекс-агглютинация, непрямая реакция гемолиза (эритроциты сенсибилизируют липо-полисахаридом бруцелл, добавляют сыворотку больного. Антиген соединяется с антителом и в присутствии комплемента происходит лизис эритроцитов), реакция иммунофлуоресценции (непрямой метод на предметном стекле).

4.Реакция пассивной гемагглютинации.

5.Иммуноферментный метод (лунки сенсибилизируют антигеном).

6.Реакция связывания комплемента.

7.Опсоно-фагоцитарная реакция (ОФР).

Б. Для обнаружения антигена

1.Реакция агрегат-гемагглютинации.

2.Иммуноферментный метод (луночки сенсибилизируют антителами к родоспецифическому антигену бруцелл).

3.РПГА с использованием эритроцитарного диагностикума с моноклональными антителами к родоспецифическому антигену бруцелл).

4.Реакция коагглютинации.

Кроме того, для быстрой диагностики бруцеллеза разработан метод ДНК/ДНК гибридизации.

Г. Аллергический - проба Бюрне

Приложение к занятию 3.

Дифференциальная характеристика видов рода Brucella.

Вид	Количество биоваров	Потребность в CO2	Бактериостатическое действие красителей	Активность уреазы	Выделение сероводорода	Агглютинация сыворотками	Отношение к тбилисскому фагу
Фуксин 1:50000	Тионин 1:25000	Сафранин 1:20000	Антиабортус	Антимелитензис
B. melitensis		—	+	+	+	++ (2 час)	—	—	+	—
B. abortus		+	+	—	+	+(18-20час)	±	+	—	+
B. suis		—	—	+	—	+++(15-20мин)	++	+	+	—
B. rangiferis		—	—	+	—	+++ (8-13мин)	—	—	—	—
B. neotomae		—	—	—	—		+	+	—
B. ovis		+	+	+			—	—	—
B. canis		—	—	+			—	—	—

Обозначения: + - наличие роста, выделение уреазы, сероводорода,

агглютинабельность сыворотками, лизис фагом;

— - отсутствие роста, выделения уреазы, сероводорода, агглютинабельности сыворотками, лизиса фагом.

ЗАНЯТИЕ 4

Дата____________________

Тема: МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЙ ДИАГНОЗ ОСОБООПАСНЫХ ИНФЕКЦИЙ (бруцеллез, чума, туляремия, сибирская язва)

План занятия

1. Регистрация результатов реакции Райта.

2. Возбудитель чумы. Морфология - демонстрация готовых препаратов-мазков.

3. Микробиологическая диагностика псевдотуберкулеза и кишечного иерсиниоза. См.приложение.

4. Возбудитель туляремии. Морфология - микроскопия готовых препаратов-мазков из чистой культуры и из органов зараженных животных.

5. Возбудитель сибирской язвы. Изучение морфологических и культуральных свойств. Приготовление и микроскопия мазков из чистой куль­туры авирулентной сибиреязвенной палочки.

6. Правила взятия материала, пересылки в лабораторию и условия

работы с возбудителями особо опасных инфекций.

7.Знакомство с иммунопрепаратами, применяемыми для диагности­ки, профилактики и лечения чумы, туляремии, бруцеллеза и сибирской язвы (диагностикумы, аллергены, вакцины, сыворотки).

Методические указания

§1.Зарегистрировать в таблице результаты реакции Райта. Сформулировать и записать вывод: указывают ли результаты реакции на на­личие заболевания бруцеллезом у данного больного?

§5.Рассмотреть невооруженным глазом и под малым увеличением микроскопа колонии сибиреязвенных палочек (вакцинный штамм СТИ).

Приготовить, окрасить по Граму и зарисовать препарат из культу­ры авирулентной палочки сибирской язвы.

Регистрация результатов реакции Райта.

Разведения сыворотки	1:50	1:100	1:200	1:400	1:800	Контроль
Результат реакции

Вывод:________________________________

Рис.1 Возбудитель чумы Yersinia pestis

Рис.2 Возбудитель туляремии Francisella tularensis

Рис.3 Возбудитель сибирской язвы Bacillus anthracis

Контрольные вопросы.

Каковы морфологические особенности палочки чумы и ее культуральные свойства? Что такое пестин и для какой цели он применяется?

Какой материал берется для бактериологического исследования при различных клинических формах чумы?

Какие микробиологические методы используются для диагностики чумы?

Каковы основные пути заражения человека возбудителем чумы?

Как осуществляется специфическая профилактика чумы?

Какие признаки используют для дифференциации возбудителя чумы от возбудителя ложного туберкулеза грызунов?

Какие подвиды чумных бактерий Вы знаете?

Каковы морфологические культуральные и биохимические свойства возбудителя туляремии?

Какой материал берется от больного при различных клинических формах туляремии? Каковы особенности выделения возбудителя туляремии от больного человека?

Какие микробиологические методы используются для диагностики ту­ляремии?

Методы микробиологической диагностики чумы.

А. Бактериологический

Материал: от больных - пунктат из бубона, мокрота, кровь из вены;

от трупов - кусочки органов, лимфоузлы, кровь, костный мозг.

Рисунок 4.

Б. Биологический

Рисунок 5.

В. Аллергический (для ретроспективной диагностики)

Проба с пестином.

Г. Применение иммунологических реакций для обнаружения антигенов возбудителя (РПГА и ее модификации, ИФМ, РИМ).