Правила работы с микроскопом на лабораторных занятиях
Установка микроскопа
Установите микроскоп у края стола в удобное для наблюдения положение. Установите рукоятку тонкой фокусировки в среднее положение (см. «Фокусировочный механизм»). Проверьте револьвер микроскопа. Он должен быть замкнут на засечку слабого объектива 10× и менее. Введите в ход лучей откидную линзу конденсора.
Размещение препарата
Положите препарат на предметный столик микроскопа так, чтобы объект приходился над отверстием столика. При этом надо обязательно проверить положение препарата покровным стеклом вверх. Установите освещение. Настройку освещения следует производить до начала работы на микроскопе как можно тщательнее, так как она влияет на качество изображения объекта. Настройка освещения у микроскопов с зеркалом и у микроскопов с осветителем, встроенным в основание, производиться по-разному.
Настройка освещения в микроскопе с зеркалом
Ввести в ход лучей объектив меньшего увеличения (10 и менее) и откидную линзу конденсора.
Поднять рукояткой 4 (см. рис. 1.6) кронштейн с конденсором до упора и полностью раскрыть апертурную диафрагму конденсора.
Повернуть зеркало (см. рис. 1.1) плоской стороной к окну или другому источнику света. Следует избегать положения, при котором прямые солнечные лучи попадают в микроскоп и создают излишне яркое, ослепляющее освещение. Яркий боковой свет также мешает наблюдениям, особенно при работе с сильными окулярами.
Сфокусировать микроскоп на резкое изображение препарата, расположенного на предметном столике.
Вынуть окуляр из тубуса. Наблюдая в тубус выходной значок объектива (наименьший освещённый кружок), наклонами зеркала добиться равномерного заполнения светом выходного зрачка объектива. В выходном зрачке не должны наблюдаться посторонние экранирующие предметы.
ВНИМАНИЕ! При работе с другим объективом также следует проверить заполнение светом выходного зрачка объектива.
При работе с объективами увеличением более 10 откидная линза конденсора должна быть выведена из хода лучей.
Вставить окуляр.
При необходимости, для уменьшения яркости освещаемого поля или изменения контраста объекта в откидную рамку конденсора можно установить матовый светофильтр.
Настройка освещения в микроскопе со встроенным в основание осветителем
Установить матовое стекло в откидную рамку конденсора. Ввести в ход лучей объектив меньшего увеличения (10 и менее).
Ввести в ход лучей матовое стекло и откидную линзу конденсора.
Поднять рукояткой 4 (см. рис. 1.6) кронштейн с конденсором до упора и полностью раскрыть апертурную диаграмму конденсора.
У лампы 6 В, 6 Вт предварительно проверить правильность расположения нити лампы, вынув патрон с лампой, а затем вставив его в шарнир до упора таким образом, чтобы нить лампы располагалась горизонтально.
В микроскопах, показанных на рис. 1.2, подсоединить штекер 17 источника питания 15 к гнезду 16 в основании микроскопа, а затем подключить источник питания к сети.
Включить лампу осветителя, для этого в микроскопе, показанном на рис. 1.2, установить выключатель 14 во включенное положение; если лампа 6 В, 6 Вт не загорелась, выдвигая патрон с лампой на 1 – 3 мм, найти положение, при котором лампа загорится.
Сфокусировать микроскоп на резкое изображение препарата, расположенного на предметном столике.
Перемещая патрон с лампой за рукоятку вдоль оси и разворачивая его вместе с шарниром в горизонтальной плоскости, добиться наиболее яркого и равномерного освещения поля зрения микроскопа.
При работе с другим объективом, если необходимо, повторить настройку освещения.
ВНИМАНИЕ! При работе с объективами увеличением более 10× откидная линза конденсора должна быть выведена из хода лучей.
Для изменения контраста объекта или уменьшения яркости горения лампы 6 В, 6 Вт или 6 В, 10 Вт установить в корпус коллекторной линзы 7 (см. рис. 1.2) сменный светофильтр из комплекта микроскопа.
Фокусировка микроскопа
Движением кремальеры найдите фокус слабого увеличения, при котором препарат вполне ясно будет виден в поле зрения (рабочее расстояние между стеклом препарата и фронтальной линзой объектива при этом будет около 1 см).
Рассмотрите препарат при слабом увеличении. Сориентировавшись в препарате, найдите место, подходящее для изучения при сильном увеличении, поставьте его в центр поля зрения (передвигая препарат по столику при помощи препаратоводителя).
Не меняя положения тубуса, поверните плавным движением револьвер на сильный объектив (40× или 90×), проследив за замыканием засечки револьвера.
Очень осторожным движением рукоятки грубой фокусировки установите фокус сильного увеличения (при объективе 40× обычно нужно слегка опустить тубус до рабочего расстояния, равного 0,41 мм) и микрометрическими винтом отфокусируйте объект. При объективе 90× или 100× свободное расстояние будет меньше половины миллиметра (точнее 0,10 мм), поэтому при неосторожном движении можно легко раздавить препарат и повредить объектив.
При работе с объективом 90× или 100× нанесите на препарат стеклянной палочкой каплю иммерсионного масла. Наблюдая сбоку за просветом между объективом и препаратом, вращением рукоятки грубой фокусировки очень осторожно опустите тубус до соприкосновения объектива с каплей иммерсии. Добейтесь резкого изображения объекта с помощью тонкой фокусировки.
Исследование препарата
Изучите препарат при слабом или сильном увеличении, а затем приступите к зарисовке. Если нужное место оказалось недостаточно точно центрированным, можно улучшить центрировку небольшим движением винтов препаратоводителя (ими нужно пользоваться для окончательной центрировки препарата при сильном увеличении). При отыскивании нужного места не следует передвигать препарат по столику микроскопа пальцами.
Завершение работы
После окончания работы снимите чистой тряпочкой слой иммерсионного масла с объектива. Поверхность линз объектива протрите тряпочкой, слегка смоченной смесью спирта и бензина (калоша) в соотношении 1:1 или эфиром. Зачехлите микроскоп.
Задание
1. Освойтеправила работы на микроскопе «МИКМЕД-1» путём микроскопирования окрашенного мазка крови человека с использованием объективов 9×, 90× или 100×.
Демонстрационный препарат крови человека, окрашенный по Романовскому-Гимза, рассмотрите под микроскопом сначала с объективом 9×. Основную массу клеток в поле зрения составляют эритроциты – красные кровяные тельца, окрашенные эозином в розовый цвет. В значительно меньшем количестве встречаются более крупные клетки, окрашенные в фиолетовый и розово-фиолетовый цвет. Это белые кровяные клетки – лейкоциты, лимфоциты и моноциты. Зарисуйте несколько эритроцитов и белых кровяных клеток.
Подпись под рисунком: Клетки крови человека. Демонстрационный препарат. Окраска: азур-эозин по Романовскому-Гимза. ×135.
На рисунке должны быть обозначены эритроциты и белые кровяные клетки.
Рассмотрите этот же препарат с объективом 90×. Он позволяет выявить более тонкие детали строения клеток. Обратите внимание, что у эритроцитов отсутствуют ядра, а в их центре обнаруживается небольшое просветление, что указывает на двояковогнутое строение этих форменных элементов крови.
Белые кровяные клетки отличаются наличием округлого, бобовидного, подковообразного или сегментированного ядра. Их цитоплазма базофильная, окрашена азуром в различные цвета от светло-голубого до фиолетового и может содержать гранулы. Лимфоциты отличаются наличием узкого ободка цитоплазмы, который удается различить только при некотором навыке работы. По этой причине создается впечатление, что данные клетки состоят только из ядра.
Зарисуйте несколько красных и белых кровяных клеток.
Подпись под рисунком: Клетки крови человека. Демонстрационный препарат. Окраска: азур-эозин по Романовскому-Гимза. ×1350.
На рисунке должны быть обозначены эритроциты, просветления в их центре; белые кровяные клетки, их цитоплазма и ядра различной формы.
2. Запишите в альбоме следующие требования, нарушать которые при работе с микроскопом категорически запрещается:
- вращать микровинт на малом увеличении и за пределы упора ограничителя;
- располагать препарат покровным стеклом вниз;
- пользоваться загрязненными препаратами, окулярами и другими оптическими частями;
- переводить микроскоп на большое увеличение, не добившись резкого изображения на малом;
- вынимать препараты из-под объектива большего увеличения;
- работать при слабом и неправильном освещении объекта.